DB12-T334-2007光合細(xì)菌菌劑使用技術(shù)規(guī)范

1、ICS 65.080B13 備案號(hào)：DB12DB12/T 3342007光合細(xì)菌菌劑使用技術(shù)規(guī)范2007-11-01 實(shí)施Usag。TedtMical Specifications ofNoculant of Photosynthetic Bacteria2007-10-18 發(fā)布 天津市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB12/T 3342007本標(biāo)準(zhǔn)附錄A、附錄B均為規(guī)范性附錄。學(xué)院提出。市農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心C本標(biāo)準(zhǔn)由木津市農(nóng)業(yè)科 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：天津 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳秀為、周可、謝鳳行。光合細(xì)菌菌劑使用技術(shù)規(guī)范非硫細(xì)菌發(fā)酵培養(yǎng)的液體光合細(xì)菌活菌本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)歩了光合細(xì)菌項(xiàng)劑的質(zhì)量要求、檢測(cè)方法及使用技

2、術(shù)。 本標(biāo)準(zhǔn)適而于在我市水*養(yǎng)殖中使用的以光合細(xì)菌中紫色菌劑。2規(guī)范性引用下列文件中的條款通過*標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。 修改單（不包勇勘誤的內(nèi)容） 是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，某最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。文件或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而凡是注日期的引用文件，其隨后所有的 ，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究GB 13078-2001飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T 1302-2006 飼狠NY 527-2002光合細(xì)宜,中霉菌總數(shù)的測(cè)定 菌劑3定義下列定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)3.1光合細(xì)菌 photosynthetic bacteria是一大類能*進(jìn)行光合用的細(xì)菌的總稱。.光合細(xì)菌菌

3、刑 noculant 是以光合細(xì)菌中的紫色非 酵培養(yǎng)而成的活菌液體制品。of photosynthetic bacteria 硫細(xì)菌（Purple Non sulfur Bacte:ia）為菌種，釆用有機(jī)、無機(jī)原料發(fā)4光合細(xì)菌菌利的質(zhì)量要求4. 1菌種紫色非硫細(xì)南（Purple Nonsulfur Bacteria）中的一種或多種細(xì)菌。4.2菌劑4. 2.1分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)按感官和濃*分將光合細(xì)直菌劑為級(jí)，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見表1。4.2.2霉菌符合GB 130782001的要求。5糧測(cè)方法5. 25. 3微生物數(shù)量檸測(cè)微生物數(shù)量&測(cè)方法見附桌A（規(guī)范性附錄）O 吸光度值檢*吸光度值檢商方法見附錄B霉菌檢測(cè)（規(guī)

4、范性附錄）。DB12/T 33420072霉菌檢測(cè)按 GB/T 130)22006的方法測(cè)定。|表1光合細(xì)菌菌劑的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)I級(jí)II級(jí)川級(jí)感官濃顏色紫紅1采紅紅棕紅淡紅氣味特有香E未或淡海腥味淡海腥味海腥味較重質(zhì)地微生物*量略粘稠懸濁液無沉淀，呈均勻10X10略粘稠，有少量沉* 可消失，呈均勻懸*v ioxio3 5X10經(jīng)震蕩沉淀 衛(wèi)液菌液粘稠度差，有沉淀，經(jīng)震 蕩仍可見細(xì)小顆粒狀沉淀V 5X10N 3X10度吸光丿度值V 2N 0. 75V 0.75N 0. 36使用技術(shù)冰質(zhì)件U20C以上，值應(yīng)達(dá)到8.09.0,晴朗天氣的上午使用。 暈 用量以45kg/j6.1用于改善：6.1.1使用條 水

5、溫應(yīng)達(dá)項(xiàng)6.1.2使用劑首次使用，6.1.3使用方，去池塘放苗將菌劑與*沙混合均勻拋灑在池底。 放苗后每風(fēng)15天20天褻放一次。為增加凈化水質(zhì)效果，可 撒。水瘦時(shí)，寸一個(gè)養(yǎng)殖周：避免與化學(xué)：6. 2用于飼喂6. 2. 1育苗時(shí)X開口飼料，6. 2.2放養(yǎng)階將菌劑按，宀7E 6.3不同等級(jí)0劑適用范圍I級(jí)主要用II級(jí)主要用in級(jí)主要用jha75kg/ha為宜。再次使用按20k/ha30kg/ha。與沸石粉混合攪拌均勻后，遍池均勻拋與肥料同時(shí)僂用。收獲前15天停止使用。期結(jié)束，池*進(jìn)行化學(xué)清塘后10天，將水排到3m深時(shí)，再均勻潑灑一次。 消毒劑、殺備劑混合使用。在化學(xué)消毒劑、殺蔔劑使用1周后方可使

6、用。殳育苗水體積的1%。2%。的比例直臀潑灑在水中。. 5%01%0的比例與成品餌料拌勻爲(wèi)直接投喂。拌入菌劑的餌料應(yīng)當(dāng)天喂育苗時(shí)作開 放苗后凈化 于池塘放苗前:口飼料和放苗后凈化水質(zhì)。，水質(zhì)。戦養(yǎng)殖周期結(jié)束后，與泥沙混合拋嶄在池底。DB12/T 3342007 A. 1原理附錄A（規(guī)范性附錄）微生物數(shù)量顯微鏡直接浦?jǐn)?shù)法物細(xì)胞數(shù)量聶常釆用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法和平板計(jì)數(shù)法。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法適用于各種含 單細(xì)胞菌體的X培養(yǎng)懸浮*,寬，其中間又,個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)分測(cè)定微生o血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上由4條槽構(gòu)成3個(gè)平臺(tái)。 被一短橫槽分隔成兩半，每個(gè)為16個(gè)大方格（大方格用三線瞞開），而每個(gè)大方格又

7、分成25個(gè)小方格;中間的平臺(tái)較兩種：一種是另一種是一個(gè)訴數(shù)區(qū)分成個(gè)大方格（大方格之間用雙線分開），而每個(gè)大方格又分成16個(gè)小方格。 不管計(jì)數(shù)區(qū)是相一種構(gòu)造，1mm,則計(jì)數(shù)區(qū)所以每個(gè)計(jì)數(shù)K的體積為0.使用血球*數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)品）中微生物國胞的數(shù)量。：數(shù) K=4X106 o每毫升菌*中含有細(xì)胞項(xiàng)=每個(gè)小格中細(xì)胞平均數(shù)（N） XA.2設(shè)備和材屈多邊上面各有一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)。計(jì)數(shù)區(qū)的刻度有孕們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，即計(jì)數(shù)區(qū)都由400個(gè)小方格組成。計(jì)數(shù)區(qū)邊長為 的面積為Imk每個(gè)小方格的面積為l/400mii2olmm每個(gè)小方格的體積為l/4000hm3o，先要測(cè)定每個(gè)小方格中微生物的imm3蓋上蓋玻片后，計(jì)數(shù)區(qū)的高

8、度為0. 1mm,數(shù)量，再換算成每毫升菌液（或每克樣 體積應(yīng)含有小方格數(shù)為1000mn7（l/4000nin3）=4X106個(gè)小方格，即系系數(shù)（K） X菌液稀釋倍數(shù)（d）顯微鏡、應(yīng)球計(jì)數(shù)板、蓋玻片（22mmX22mm）、吸水紙、計(jì)數(shù)器、滴管、擦鏡紙。A.3操作步驟將待測(cè)菌懸液加無菌水遺當(dāng)稀釋，以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊，在計(jì)數(shù)區(qū) 上蓋上一塊蓋?！熬壍稳胍恍〉危? 去溝槽中流出的 以免加蓋蓋玻片 數(shù)板置載物臺(tái)上 水的折光率相近片。將菌懸滿搖勻，用滴管吸取少許，從計(jì)數(shù)板甲間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊 計(jì)數(shù)區(qū)，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸不宜過多），I多余菌懸液。可以將菌懸液直

9、接滴加在計(jì)數(shù)區(qū)上，不要使計(jì)數(shù)區(qū)兩邊平臺(tái)沾上菌懸液, ,后，造成計(jì)*區(qū)深度的升高，然后加蓋蓋玻片（倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換髙倍篋觀察并計(jì)數(shù)。由于活細(xì)胞的折光率和 ,觀察時(shí)應(yīng)彼弱光照強(qiáng)度。讓菌懸液利用液體的表面張力充滿勿使產(chǎn)生氣泡）。靜置片刻，將血球計(jì).夾穩(wěn)，先在低A. 4計(jì)數(shù)擊16個(gè)大方組成，按對(duì)角線方位，數(shù)左上、季下、右上、右下的4個(gè)大方格（gpiOO 小格）的菌數(shù)。血果是25個(gè)大方格組成的計(jì)數(shù)區(qū)，除數(shù)上述四個(gè)。如菌體位宇大方格的雙線上，計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少若計(jì)數(shù)區(qū)是大方格外，還需數(shù)中央1個(gè)大方格的菌數(shù)（即80個(gè)小格誤差。每個(gè)樣品童復(fù)計(jì)數(shù)2（每次數(shù)值不應(yīng)相差過大，否

10、則應(yīng)重新操作），求出每一個(gè)小格中細(xì)胞公式計(jì)算出尋毫升菌懸液所含細(xì)菌的數(shù)量。測(cè)故完畢，取下蓋玻片，用水將血球計(jì)數(shù) 板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦。平均數(shù)（N）,按DB12/T 3342007附錄B（規(guī)范性附錄）細(xì)菌懸液吸光度值測(cè)定法B. 1原理分光光序計(jì)釆用一個(gè)甲以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源，通過系劃分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過測(cè)的樣品后，章分光源被吸收，計(jì)算樣品的吸光商從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的商度成正比。豪驗(yàn)室確定細(xì)菌生長密度和生長期可以釆用分光光度計(jì)準(zhǔn)確測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞必須針對(duì)每種微生物和每臺(tái)儀器宙顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，做岀校正曲線。密度。為了保證正確操作,752可見一紫外分光光度計(jì)，比色杯，無菌蒸餡水。B.3操作步!按752可関一紫外分光 用細(xì)菌的培養(yǎng)&作對(duì)照