高效液相色譜測定法標準操作規(guī)程

1、SOP-02-QC-014/0.0SOP-02-QC-014/0.0高效液相色譜測定法標準操作規(guī)程第 頁共7頁SOP-02-QC-0140.0SOP-02-QC-0140.0高效液相色譜測定法標準操作規(guī)程第4頁共7頁W、1W、1當對測定結(jié)果有異議時，色譜柱的理論板數(shù)（n）和分離度（R）均以峰寬（W）的計算結(jié)果為準。靈敏度用于評價色譜系統(tǒng)檢測微量物質(zhì)的能力，通常以信噪比（S/N）來表示。通過測定一系列不同濃度的供試品或?qū)φ掌啡芤簛頊y定信噪比。定量測定時，信噪比應(yīng)不小于10；定性測定時，信噪比應(yīng)不小于3。系統(tǒng)適用性試驗中可以設(shè)置靈敏度實驗溶液來評價色譜系統(tǒng)的檢測能力。拖尾因子（T）用于評價色譜峰的

2、對稱性。拖尾因子計算公式為：TWT0.05h2di式中：W.0為5%峰高處的峰寬；d為峰頂在5%峰高處橫坐標平行線的投影點至峰前沿與此平行線交點的距離（如圖）。r4=/r71m1以峰高作定量參數(shù)時，除另有規(guī)定外，T值應(yīng)在0.95T.05之間。以峰面積作定量參數(shù)時，一般的峰拖尾或前伸不會影響峰面積積分，但嚴重拖尾會影響基線和色譜峰起止的判斷和峰面積積分的準確性，此時應(yīng)在品種正文項下對拖尾因子作出規(guī)定。重復(fù)性用于評價色譜系統(tǒng)連續(xù)進樣時響應(yīng)值的重復(fù)性能。采用外標法時，通常取各品種項下的對照品溶液，連續(xù)進樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標準偏差應(yīng)不大于2.0%，采用標法時，通常配制相當于80

3、%、100%和120%的對照品溶液，加入規(guī)定量的標溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別至少進樣2次，計算平均校正因子，其相對標準偏差應(yīng)不大于2.0%。4.3測定法4.3.1標法按品種正文項下的規(guī)定，精密稱（量）取對照品和標物質(zhì)，分別配成溶液，各精密量取適量，混合配成校正因子測定用的對照溶液。取一定量進樣，記錄色譜圖。測量對照品和標物質(zhì)的峰面積或峰髙，按下式計算校正因子：校正因子（f）=as/CsA/cRR式中A為標物質(zhì)的峰面積或峰高；SA為對照品的峰面積或峰高；Rc為標物質(zhì)的濃度；Sc為對照品的濃度。R再取各品種項下含有標物質(zhì)的供試品溶液，進樣，記錄色譜圖，測量供試品中待測成分和標物質(zhì)的峰面積或

4、峰高，按下式計算含量：含量）二fXA/cSS式中A為供試品的峰面積或峰高；Xc為供試品的濃度；XA為標物質(zhì)的峰面積或峰高；Scs為標物質(zhì)的濃度；f為標法校正因子。采用標法，可避免因供試品前處理及進樣體積誤差對測定結(jié)果的影響。4.3.2外標法按各品種項下的規(guī)定，精密稱（量）取對照品和供試品，配制成溶液，分別精密取一定量，進樣，記錄色譜圖，測量對照品溶液和供試品溶液中待測物質(zhì)的峰面積（或峰高），按下式計算含量：含量(c)=cXX式中各符號意義同上。由于微量注射器不易精確控制進樣量，當采用外標法測定時，以手動進樣器定量環(huán)或自動進樣器進樣為宜。4.3.3加校正因子的主成分自身對照法測定雜質(zhì)含量時，可采

5、用加校正因子的主成分自身對照法。在建立方法時，按各品種項下的規(guī)定，精密稱（量）取待測物對照品和參比物質(zhì)對照品各適量，配制待測物校正因子的溶液，進樣，記錄色譜圖，按下式計算待測物的校正因子。BB式中c為待測物的濃度；AA為待測物的峰面積或峰髙；Ac為參比物質(zhì)的濃度；BA為參比物質(zhì)的峰面積或峰髙。B也可精密稱（量）取主成分對照品和雜質(zhì)對照品各適量，分別配制成不同濃度的溶液，進樣，記錄色譜圖，繪制主成分濃度和雜質(zhì)濃度對其峰面積的回歸曲線，以主成分回歸直線斜率與雜質(zhì)回歸直線斜率的比計算校正因子。校正因子可直接載入各品種項下，用于校正雜質(zhì)的實測峰面積。需作校正計算的雜質(zhì)，通常以主成分為參比，采用相對保留

6、時間定位，其數(shù)值一并載入各品種項下。測定雜質(zhì)含量時，按各品種項下規(guī)定的雜質(zhì)限度，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限度相當?shù)娜芤?，作為對照溶液；進樣，記錄色譜圖，必要時，調(diào)節(jié)縱坐標圍（以噪聲水平可接受為限）使對照溶液的主成分色譜峰的峰高約達滿量程的10%25%。除另有規(guī)定外，通常含量低于0.5%的雜質(zhì)，峰面積的相對標準偏差（RSD）應(yīng)小于10%；含量在0.5%2%的雜質(zhì)，峰面積的RSD應(yīng)小于5%；含量大于2%的雜質(zhì)，峰面積的RSD應(yīng)小于2%。然后，取供試品溶液和對照溶液適量，分別進樣，除另有規(guī)定外，供試品溶液的記錄時間，應(yīng)為主成分色譜峰保留時間的2倍，測量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積，分別乘以相應(yīng)的

7、校正因子后與對照溶液主成分的峰面積比較，計算各雜質(zhì)含量。4.3.4不加校正因子的主成分自身對照法測定雜質(zhì)含量時，若無法獲得待測雜質(zhì)的校正因子，或校正因子可以忽略，也可采用不加校正因子的主成分自身對照法。同上述4.3.3法配制對照溶液、進樣調(diào)節(jié)縱坐標圍和計算峰面積的相對標準偏差后，取供試品溶液和對照品溶液適量，分別進樣。除另有規(guī)定外，供試品溶液的記錄時間應(yīng)為主成分色譜峰保留時間的2倍，測量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積并與對照溶液主成分的峰面積比較，依法計算雜質(zhì)含量。4.3.5面積歸一化法按各品種項下的規(guī)定，配制供試品溶液，取一定量進樣，記錄色譜圖。測量各峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計算各峰面積占總峰面積的百分率。用于雜質(zhì)檢