儀器分析實(shí)驗(yàn)課件

1、儀 器 分 析 實(shí) 驗(yàn)李保新、呂家根、張耀東、劉偉儀器分析實(shí)驗(yàn)組成：光 四個(gè)實(shí)驗(yàn) （紫外-可見、熒光、原子吸收）鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵 紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量原子吸收光譜法測定鈣最佳實(shí)驗(yàn)條件的選擇熒光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的含量色譜 兩個(gè)實(shí)驗(yàn)（氣相色譜、液相色譜）反相色譜法測定樣品中甲苯的含量苯、甲苯、乙苯混合物的分離與定量分析電 六個(gè)實(shí)驗(yàn)電位滴定法測定NaOH pH計(jì)的使用及溶液pH值的測定 離子選擇電極法測定氟離子 庫侖滴定法測定硫代硫酸鹽循環(huán)伏安法測定亞鐵氰化鉀綜合性試驗(yàn) 一個(gè)實(shí)驗(yàn)銀納米粒子的合成及其表征紫外-可見吸收光譜法又稱紫外-可見分光光度法，是以溶液中物質(zhì)

2、的分子或離子對(duì)紫外和可見光譜區(qū)輻射能的選擇性吸收為基礎(chǔ)而建立起來的一類分析方法。紫外光：10-400 nm可見光：400-780 nm，可被人們的眼睛所感覺特點(diǎn)：帶光譜 分子光譜應(yīng)用：定性分析-最大吸收波長 定量分析-朗伯-比爾定律（標(biāo)準(zhǔn)曲線法和標(biāo)準(zhǔn)加入法）定性分析原理吸收曲線：吸收峰的數(shù)目、位置、相對(duì)強(qiáng)度以及吸收峰的形狀儀器組成部件 各種類型的紫外-可見分光光度計(jì)，如下圖所示，從總體上來說是由五個(gè)部分組成，即光源、單色器、吸收池、檢測器和信號(hào)顯示記錄裝置。光源檢 測器信號(hào)顯示 記錄裝置吸收池單色器鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)確定實(shí)驗(yàn)條件的方法，掌握鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵的方

3、法原理。掌握721型分光光度計(jì)的正確使用方法，并了解此儀器的主要構(gòu)造。 在pH=29的溶液中，F(xiàn)e2+與鄰二氮菲(phen)生成穩(wěn)定的桔紅色配合物Fe(phen)32+：此配合物的lgK穩(wěn)=21.3，摩爾吸光系數(shù)510 = 1.1104 Lmol-1cm-1，而Fe3+能與鄰二氮菲生成31配合物，呈淡藍(lán)色，lgK穩(wěn)=14.1。所以在加入顯色劑之前，應(yīng)用鹽酸羥胺(NH2OHHCl)將Fe3+還原為Fe2+，其反應(yīng)式如下：2Fe3+2NH2OHHCl2Fe2+N2+H2O+4H+2Cl-測定時(shí)控制溶液的酸度為pH5較為適宜。用鄰二氮菲可測定試樣中鐵的總量。實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)預(yù)習(xí)鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵的

4、方法原理。了解721型分光光度計(jì)的正確使用方法，并了解此儀器的主要構(gòu)造。721型分光光度計(jì)，1 cm吸收池，10 mL 吸量管，50 mL 比色管（或容量瓶）儀器和試劑儀器1. 打開儀器電源開關(guān)，預(yù)熱。調(diào)解儀器。2. 分別將空白溶液和待測溶液裝入厚度為b的兩個(gè)吸收池中，讓一束一定波長的光分別照射空白溶液和待測溶液，以通過空白溶液的透過光強(qiáng)為I0，通過待測溶液的光強(qiáng)為I，由儀器直接給出吸光度A.3. 吸收曲線的繪制和測量波長的選擇。固定待測液濃度，在440-560nm間，每隔10nm（最大吸收波長處,每隔2nm） 測量一次吸光度，以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸收曲線，選擇測量的最適宜波長

5、。4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。改變待測溶液的濃度，記錄不同的A，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。基本操作吸收曲線的繪制和測量波長的選擇： 用吸量管吸取2.00 mL1.010-3mol.L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液，注入50 mL比色管中，加入1.00 mL 10%鹽酸羥胺溶液，搖勻，加入2.00 mL0.15%鄰二氮菲溶液，5.0 mL NaAc溶液，以水稀釋至刻度。在光度計(jì)上用1 cm比色皿，采用試劑溶液為參比溶液，在440-560 nm間，每隔10 nm測量一次吸光度，以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸收曲線，選擇測量的適宜波長。實(shí)驗(yàn)步驟1. 以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸收曲線，選擇測量的最適宜波長條件。2.

6、以鐵濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)試樣的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線求出工業(yè)鹽酸中鐵的含量（以g/mL表示），計(jì)算測量結(jié)果的平均值和相對(duì)偏差。 數(shù)據(jù)處理1. 鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵時(shí)為何要加入鹽酸羥胺溶液？2. 吸收曲線與標(biāo)準(zhǔn)曲線有何區(qū)別？在實(shí)際應(yīng)用中有何意義？3. 透射比與吸光度兩者關(guān)系如何？測定條件指哪些？4. 鄰二氮菲與鐵的顯色反應(yīng)，其主要條件有哪些？5. 加各種試劑的順序能否顛倒？注意事項(xiàng)和問題紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量的原理。掌握紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 掌握TU-1901紫外-可見分光光度計(jì)的使用方法并了解此儀器

7、的主要構(gòu)造。 本實(shí)驗(yàn)采用紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量。蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，因此，蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)，其最大吸收峰位于280 nm附近（不同的蛋白質(zhì)吸收波長略有差別）。在最大吸收波長處，吸光度與蛋白質(zhì)溶液的濃度的關(guān)系服從朗伯-比耳定律。280nm275nm實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)預(yù)習(xí)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量的原理。預(yù)習(xí)紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量的實(shí)驗(yàn)步驟。 了解TU-1901紫外-可見分光光度計(jì)的主要構(gòu)造。TU-1901紫外-可見分光光度計(jì)，比色管，吸量管標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：5.00 mg.mL-1溶液0.9% NaCl溶液，待測蛋白質(zhì)溶液（牛血清白蛋白）儀器與試劑實(shí)

8、驗(yàn)步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 ： 用吸量管分別吸取1.0 、1.5、 2.0 、2.5 、3.0 mL 5.00 mg.mL-1標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液于5只10 mL 比色管中，用0.9% NaCl溶液稀釋至刻度，搖勻。用1 cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液為參比，在280 nm處分別測定各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度A280，記錄所得讀數(shù)。2. 樣品測定： 取待測蛋白質(zhì)溶液3 mL，按上述方法測定280 nm處的吸光度。平行測定三份。1. 以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2. 根據(jù)樣品溶液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測蛋白質(zhì)的濃度。數(shù)據(jù)處理分子發(fā)光分析法分子發(fā)光分析法包括分子熒光分析法，磷

9、光分析法、化學(xué)發(fā)光分析法和生物發(fā)光分析法。實(shí)驗(yàn)原理熒光分析法 常溫下，處于基態(tài)的分子吸收一定的紫外可見光的輻射能成為激發(fā)態(tài)分子，激發(fā)態(tài)分子通過無輻射躍遷至第一激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)，再以輻射躍遷的形式回到基態(tài)，發(fā)出比吸收光波長長的光而產(chǎn)生熒光。 在稀溶液中，熒光強(qiáng)度IF與物質(zhì)的濃度c有以下的關(guān)系： 當(dāng)實(shí)驗(yàn)條件一定時(shí)，熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度成線性關(guān)系： 這是熒光光譜法定量分析的理論依據(jù)。a. 與紫外-可見分光度法比較，熒光分析法具有更高的靈敏度。b. 選擇性好。熒光法既能依據(jù)發(fā)射光譜，又能依據(jù)吸收光譜來鑒定物質(zhì)。c. 所需試樣量少、操作方法簡便。熒光分析法的特點(diǎn)激發(fā)光譜：固定測量波長(選最大發(fā)射

10、波長)，化合物發(fā)射的熒光強(qiáng)度與照射光波長的關(guān)系曲線。激發(fā)光譜曲線的最高處，處于激發(fā)態(tài)的分子最多，熒光強(qiáng)度最大。發(fā)射光譜：固定激發(fā)光波長(選最大激發(fā)波長), 化合物發(fā)射的熒光強(qiáng)度與發(fā)射光波長關(guān)系曲線。 固定發(fā)射光波長進(jìn)行激發(fā)光波長掃描，找出最大激發(fā)光波長，然后固定激發(fā)光波長進(jìn)行熒光發(fā)射波長掃描，找出最大熒光發(fā)射波長。激發(fā)光波長和發(fā)射熒光波長的選擇是本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。熒光光譜激發(fā)光譜發(fā)射光譜熒光分析儀器 常用的熒光分析儀器由激發(fā)光源、單色器、液槽、檢測器和顯示記錄器五部分構(gòu)成，如下圖所示：熒光分析儀器與分光光度計(jì)比較主要差別有兩點(diǎn)：a.熒光分析儀器采用垂直測量方式，以消除透射光的影響；b.熒光分析儀器

11、有兩個(gè)單色器，能夠獲得單色性較好的激發(fā)光并消除其它雜散光干擾。液槽顯示器單色器檢測器I0IIf光源單色器a.光源：在熒光計(jì)中常用鹵鎢燈作光源；熒光分度計(jì)常采用高壓汞燈或氙弧燈做光源。b.單色器：熒光計(jì)的單色器是濾光片，只能用于定量分析；熒光分光光度計(jì)采用兩個(gè)光柵單色器，可獲得激發(fā)光譜和熒光光譜。c.檢測器：熒光計(jì)采用光電管作檢測器；熒光分光光度計(jì)采用光電倍增管作檢測器。儀器部件熒光分光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)熒光分光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的分析原理。掌握熒光分光光度計(jì)的操作技術(shù)和測定多維葡萄糖粉中維生素B2 的方法。 維生素B2（又叫核黃素，VB2）是橘

12、黃色無臭的針狀結(jié)晶，其結(jié)構(gòu)式為：維生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有機(jī)溶劑，在中性或酸性溶液中穩(wěn)定，光照易分解，對(duì)熱穩(wěn)定。多維葡萄糖粉中維生素B2含量的測定 維生素B2溶液在430440 nm藍(lán)光的照射下，發(fā)出綠色熒光，其峰值波長為525 nm。VB2的熒光在pH=67時(shí)最強(qiáng)，在pH=11時(shí)消失。維生素B2在堿性溶液中經(jīng)光線照射會(huì)發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為光黃素，光黃素的熒光比核黃素的熒光強(qiáng)的多，故測VB2的熒光時(shí)溶液要控制在酸性范圍內(nèi)，且在避光條件下進(jìn)行。 多維葡萄糖中含有維生素B1、B2、C、D2及葡萄糖，其中維生素C和葡萄糖在水溶液中不發(fā)熒光，維生素B1本身無熒光，在堿性溶液中用鐵氰化鉀氧化后才產(chǎn)生

13、熒光，維生素D2用二氯乙酸處理后才有熒光，他們都不干擾維生素B2的測定。實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)預(yù)習(xí)熒光分光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的分析原理。了解熒光光度計(jì)的操作步驟和測定多維葡萄糖粉中維生素B2 的方法。970CRT熒光光度計(jì)（上海分析儀器總廠）5 mL吸量管1只，2 mL吸量管1只， 50 mL容量瓶7只10.0gmL-1VB2標(biāo)準(zhǔn)溶液（置陰暗處保存），冰乙酸（AR）， 多維葡萄糖粉試樣儀器與試劑1. 打開氙燈，再打開主機(jī)，然后打開計(jì)算機(jī)啟動(dòng)工作站并初始化儀器。2. 儀器初始化完畢后，在工作界面上選擇測量項(xiàng)目，設(shè)置適當(dāng)?shù)膬x器參數(shù)：激發(fā)波長= 440 nm，發(fā)射波長=540 nm。3. 樣品測定

14、。4. 退出主程序，關(guān)閉計(jì)算機(jī)，先關(guān)主機(jī)，最后關(guān)氙燈。基本操作1. 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)溶液熒光強(qiáng)度的測定： 在六個(gè)干凈的50 mL容量瓶中，分別吸取0.50、1.00、1.50，2.00 、2.50和3.00 mL VB2標(biāo)準(zhǔn)溶液，各加入2.00 mL冰乙酸，稀釋至刻度，搖勻。從稀到濃測量系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度。2. 未知試樣的測定: 稱取0.15-0.20 g多維葡萄糖粉試樣,用少量水溶解后轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中，加2.00 mL冰乙酸，稀釋至刻度，搖勻。用測定標(biāo)準(zhǔn)系列時(shí)相同的條件，測量其熒光強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)步驟1. 用標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的熒光強(qiáng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。2. 根據(jù)待測液的熒光強(qiáng)度，從標(biāo)

15、準(zhǔn)工作曲線上求得其濃度，計(jì)算出試樣中VB2含量。數(shù)據(jù)處理1. 試解釋熒光光度法較吸收光度法靈敏度高的原因。2. 本實(shí)驗(yàn)為何在酸性溶液中測定維生素B2？注意事項(xiàng)和問題原子吸收光譜法原子吸收光譜法(Atomic Absorption Spectrometry，AAS) 是根據(jù)物質(zhì)的基態(tài)原子蒸氣對(duì)特征輻射的吸收作用來進(jìn)行元素定量分析的方法。1.特點(diǎn) (1) 檢出限低，10-1010-14 g； (2) 準(zhǔn)確度高，1%5%； (3) 選擇性高，一般情況下共存元素不干擾； (4) 應(yīng)用廣，可測定70多個(gè)元素（各種樣品中）；2. 缺點(diǎn)：難熔元素、非金屬元素測定困難，不能進(jìn)行多元素同時(shí)測定。 原子吸收光譜儀

16、（原子吸收分光光度計(jì)）主要由銳線光源、原子化器、分光系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和電源同步調(diào)制系統(tǒng)五部分組成。 原子吸收光譜法測定鈣最佳實(shí)驗(yàn)條件的選擇實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)原子吸收光譜法最佳實(shí)驗(yàn)條件選擇的方法。掌握火焰原子吸收分光光度計(jì)的使用方法。 在原子吸收測定中，實(shí)驗(yàn)條件的選擇直接影響到測定的靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度和方法的選擇性。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)一系列實(shí)驗(yàn)條件（包括燃?xì)獾牧髁勘?、燈電流、單色器通帶寬度以及燃燒器高度和位置）等的選擇和優(yōu)化，選定測定鈣的最佳實(shí)驗(yàn)條件。 助燃比不同，火焰的溫度和性質(zhì)不同，因而元素的原子化程度不同。通常固定空氣流量，改變?nèi)細(xì)饬髁縼砀淖冎急?。在不同助燃比時(shí)測定吸光度，吸光度最大的助燃比為最佳

17、助燃比。 實(shí)驗(yàn)原理燃?xì)?、助燃?xì)獾牧髁勘然鹧娴姆N類燃助比火焰的性質(zhì)火焰狀態(tài)應(yīng)用范圍富燃火焰約1：3還原性層次模糊呈亮黃色易氧化而形成難解離氧化物的元素化學(xué)計(jì)量火焰約1：4中性層次清楚藍(lán)色透明大多數(shù)元素皆適用貧燃火焰約1：6氧化性火焰發(fā)暗高度縮小金屬和不易氧化的元素乙炔-空氣火焰的種類 燈電流的選擇要從靈敏度和穩(wěn)定性兩方面來考慮。燈電流過大，易產(chǎn)生自吸作用，多普勒效應(yīng)增強(qiáng)，譜線變寬，測定靈敏度降低，工作曲線彎曲，燈的壽命減小。燈電流低，譜線變寬小，測定靈敏度高，但是燈電流過低，發(fā)光強(qiáng)度減弱，陰極發(fā)光不穩(wěn)定，因而譜線信躁比降低。一般的原則是在保證穩(wěn)定和適當(dāng)?shù)墓鈴?qiáng)輸出的情況下，盡可能選擇較低的燈電流。

18、燈電流 通帶寬度的選擇以能將吸收線和鄰近線分開為原則。通帶較窄，靈敏度較高，但躁聲較大，信躁比不一定高。對(duì)許多元素來說，為了得到最大信躁比、較高的靈敏度以及較寬的校正曲線，要求有0.2 nm通帶寬度。 火焰的部位不同，其溫度和還原氣氛不同，因而被測元素基態(tài)原子的濃度隨火焰高度的不同而不同。在實(shí)驗(yàn)中通過改變?nèi)紵鞲叨炔y定吸光度，以吸光度最大時(shí)的燃燒器高度為最佳燃燒器高度。 單色器通帶寬度燃燒器高度實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)預(yù)習(xí)原子吸收光譜法最佳實(shí)驗(yàn)條件選擇的方法。了解火焰原子吸收分光光度計(jì)的原理和使用方法。TAS-986型原子吸收分光光度計(jì)乙炔鋼瓶，空氣壓縮機(jī)鈣空心陰極燈100.0 g/mL鈣離子儲(chǔ)備液儀器和試

19、劑1. 溶液的配制：5.00 g/mL鈣離子標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確移取 100.0 g/mL鈣離子標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00 mL于100 mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻。 2. 最佳實(shí)驗(yàn)條件的選擇 ：(1) 燃?xì)饬髁康倪x擇 改變乙炔流量為1.2、1.5、1.8、2.0 L/min，在每一乙炔流量下測定5.00 g/mL鈣離子標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。作吸光度-乙炔流量曲線，曲線上最大吸光度所對(duì)應(yīng)的燃?xì)饬髁考礊樽罴讶細(xì)饬髁?。實(shí)驗(yàn)步驟(2) 燈電流的選擇 在選定的最佳助燃比及燃燒器高度條件下，分別在燈電流為2、4、6、8 mA時(shí)噴霧5.00 g/mL 鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液，測量吸光度，并觀察不同燈電流的穩(wěn)定性。讀數(shù)穩(wěn)定及大的

20、吸光度所對(duì)應(yīng)的燈電 流即為最佳燈電流 。(3) 狹縫寬度的選擇 在上述選定的實(shí)驗(yàn)條件下，將狹縫寬度分別置于0.1 nm、0.2 nm、0.4 nm處，噴霧5.00 g/mL鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液，測量吸光度。選擇不引起吸光度減小的最大狹縫為最佳狹縫寬度。 (4) 測量結(jié)束后用高純水沖洗原子化器2min，先關(guān)乙炔氣再關(guān)空氣。(5) 退出工作站，關(guān)閉計(jì)算機(jī)，關(guān)閉Tas986電源開關(guān)。1. 繪制吸光度-乙炔流量曲線，曲線上最大吸光度所對(duì)應(yīng)的燃?xì)饬考礊樽罴褩l件。2. 繪制吸光度-燈電流曲線，讀數(shù)穩(wěn)定且大的吸光度所對(duì)應(yīng)的燈電流即為最佳燈電流。 3. 繪制吸光度-狹縫寬度曲線，吸光度最大處的狹縫寬度為最佳條件。 4.

21、 綜合上述條件，得出測鈣的最佳實(shí)驗(yàn)條件。 數(shù)據(jù)處理分離與分析技術(shù) 色譜法是一種分離技術(shù)。試樣混合物的分離過程也就是試樣中各組分在稱之為色譜分離柱中的兩相間不斷進(jìn)行著的分配過程。 其中的一相固定不動(dòng)，稱為固定相； 另一相是攜帶試樣混合物流過此固定相的流體（氣體或液體），稱為流動(dòng)相。 氣相色譜：流動(dòng)相為氣體（稱為載氣）；按固定相的不同又分為：氣固色譜和氣液色譜 液相色譜：流動(dòng)相為液體（稱為淋洗液）。按固定相的不同分為：液固色譜和液液色譜。氣相色譜法的特點(diǎn)（1）分離效率高： 復(fù)雜混合物，有機(jī)同系物、異構(gòu)體。手性異構(gòu)體。（2） 靈敏度高： 可以檢測出g.g-1(10-6)級(jí)甚至ng.g-1(10-9)

22、級(jí)的物質(zhì)量.（3） 分析速度快： 一般在幾分鐘或幾十分鐘內(nèi)可以完成一個(gè)試樣的分析。（4） 應(yīng)用范圍廣： 適用于沸點(diǎn)低于400的各種有機(jī)或無機(jī)試樣的分析。 不足之處： 不適用于高沸點(diǎn)、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分析。 被分離組分的定性較為困難。氣相色譜流程1-載氣鋼瓶；2-減壓閥；3-凈化干燥管；4-針形閥；5-流量計(jì);6-壓力表；4-針形閥；5-流量計(jì);6-壓力表；9-熱導(dǎo)檢測器；10-放大器；11-溫度控制器；12-記錄儀；1. 載氣系統(tǒng)：包括氣源、凈化干燥管和載氣流速控制;2. 進(jìn)樣系統(tǒng)：進(jìn)樣器及氣化室；3. 色譜柱：填充柱（填充固定相）或毛細(xì)管柱（內(nèi)壁涂有固定液）；4. 檢測器：可連接各種檢

23、測器，以熱導(dǎo)檢測器或氫火焰檢測器最為常見；5. 記錄系統(tǒng)：放大器、記錄儀或數(shù)據(jù)處理儀；6. 溫度控制系統(tǒng)：柱室、氣化室的溫度控制。高效液相色譜是20世紀(jì)70年代初發(fā)展起來的一種新型分離分析技術(shù)。他是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上，引入氣相色譜理論，在技術(shù)上采用高壓輸壓泵、梯度洗脫技術(shù)、新型高效填充劑及各種高靈敏度監(jiān)測器。高效液相色譜與氣相色譜比較，可供選擇的流動(dòng)相種類較多，從有機(jī)溶劑到水溶劑，既能用純?nèi)軇┯挚捎枚蚨嘣旌先軇⒖扇我庹{(diào)配比例，通過改變?nèi)軇O性或強(qiáng)度繼而改變色譜柱效能、分離選擇性和組分的容量因子，最后實(shí)現(xiàn)改善色譜系統(tǒng)分離度的目的。高效液相色譜1. 分析速度快。2. 分離效率高。3.

24、 靈敏度高、易于實(shí)現(xiàn)操作自動(dòng)化。4. 適用于高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜儀流程示意圖進(jìn)樣裝置 流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置， 其結(jié)構(gòu)如圖所示： 紫外光度檢測器（UV）：最小檢測量10-9gmL-1，對(duì)流量和溫度的波動(dòng)不敏感，可用于梯度洗脫。 最常用的檢測器。定性方法：1. 利用純物質(zhì)定性的方法 利用保留值定性：通過對(duì)比試樣中具有與純物質(zhì)相同保留值的色譜峰，來確定試樣中是否含有該物質(zhì)及在色譜圖中位置。不適用于不同儀器上獲得的數(shù)據(jù)之間的對(duì)比。 利用加入法定性：將純物質(zhì)加入到試樣中，觀察各組分色譜峰的相對(duì)變化。2.利用文

25、獻(xiàn)保留值定性常用的幾種定量方法 （1）歸一化法：若試樣中含有n個(gè)組分，且各組分均能洗出色譜峰，則其中某個(gè)組分的質(zhì)量可按下式計(jì)算 特點(diǎn)及要求： 歸一化法簡便、準(zhǔn)確； 進(jìn)樣量的準(zhǔn)確性和操作條件的變動(dòng)對(duì)測定結(jié)果影響不大； 僅適用于試樣中所有組分全出峰的情況。（2）內(nèi)標(biāo)法：在一定試樣中加入一定量的內(nèi)標(biāo)物，根據(jù)待測組分和內(nèi)標(biāo)物的峰面積及物質(zhì)量計(jì)算待測物質(zhì)質(zhì)量的方法。 內(nèi)標(biāo)物要滿足以下要求：（1）試樣中不含有該物質(zhì)；（2）與被測組分性質(zhì)比較接近；（3）不與試樣發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；（4）出峰位置應(yīng)位于被測組分附近，且無組分峰影響。 試樣配制：準(zhǔn)確稱取一定量的試樣W，加入一定量內(nèi)標(biāo)物mS計(jì)算式：內(nèi)標(biāo)法特點(diǎn) (1)內(nèi)

26、標(biāo)法的準(zhǔn)確性較高，操作條件和進(jìn)樣量的稍許變動(dòng)對(duì)定量結(jié)果的影響不大。 (2)每個(gè)試樣的分析，都要進(jìn)行兩次稱量，不適合大批量試樣的快速分析。 (3)若將內(nèi)標(biāo)法中的試樣取樣量和內(nèi)標(biāo)物加入量固定，則： （3）外標(biāo)法外標(biāo)法也稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線法。特點(diǎn)及要求： 外標(biāo)法不使用校正因子，準(zhǔn)確性較高; 操作條件變化對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性影響較大; 對(duì)進(jìn)樣量的準(zhǔn)確性控制要求較高，適用于大批量試樣的快速分析。實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諝庀嗌V法分離多組分混合物的方法。練習(xí)用歸一化法定量測定混合物中各組分的含量。苯、甲苯、乙苯混合物的分離和定量分析定量方法： 歸一化法：若試樣中含有n個(gè)組分，且各組分均能洗出色譜峰，則其中某個(gè)組分的質(zhì)量可按下式計(jì)算

27、。 了解氣相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)及操作步驟。掌握利用歸一化法分析混合物中各組分含量的方法。實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)1. 色譜儀: 氣相色譜儀，熱導(dǎo)池檢測器，微量注射器（10mL）2. 色譜柱：2 m5 mm3. 固定相: 15%鄰苯二甲酸二壬酯；102白色擔(dān)體6080目，載氣：氮?dú)?. 苯、甲苯、乙苯。三組分混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：苯、甲苯、乙苯重量比為：1：1：2。三組分混合樣品。儀器與試劑基本操作1. 打開電腦主機(jī)，再打開氣相色譜的模塊，啟動(dòng)工作站并初始化儀器。2. 開機(jī)調(diào)試，按下列參考色譜條件將儀器調(diào)至所需工作狀態(tài)。氣化室溫度：150; 柱溫：100 ; 檢測器溫度: 200 橋流：120mA 載氣：氮?dú)?，流?40

28、 mL/min ，紙速：1cm/min，5 cm/min衰減：自選3. 運(yùn)行程序，清洗色譜柱，直至基線平穩(wěn)，然后進(jìn)樣，進(jìn)行測定。4. 測定結(jié)束后，依次用純水、100%甲醇洗滌20分鐘，退出主程序，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。定性分析：儀器穩(wěn)定后，用10mL注射器進(jìn)2.0mL混合樣品和5mL空氣，記錄色譜圖（I）。在完全相同的條件下，分別進(jìn)苯、甲苯、乙苯等純?cè)噭?，每次進(jìn)樣0.501.0mL試劑和5.0mL空氣，記錄色譜圖（II）。測定校正因子 進(jìn)2.0mL三組分混合標(biāo)準(zhǔn)試劑和5.0mL空氣，記錄色譜圖（III）?；旌衔锏亩?進(jìn)2.0mL三組分混合樣品和5.0mL空氣，記錄色譜圖（IV）。實(shí)驗(yàn)步驟數(shù)據(jù)處理1. 準(zhǔn)確測量色譜圖IIV各峰的保留時(shí)間tR和死時(shí)間t0,比較個(gè)純是基于混合物中各峰的保留值，確定各峰是什么物質(zhì)。2. 計(jì)算甲苯和乙苯的校正保留時(shí)間和對(duì)苯的保留值。3. 測量各峰的峰面積，以苯為標(biāo)準(zhǔn)，求出其余兩組分的相對(duì)重量校正因子（