藥典培訓(xùn)微生物課件

1、中國藥典2015年版主要增修訂內(nèi)容（微生物檢驗(yàn)部分）2、修訂：中國藥典2010版附錄【無菌】“.用于燒傷或嚴(yán)重創(chuàng)傷的XX劑，照無菌檢查法.”修訂為：“.用于燒傷（除輕度燒傷I或II外）、嚴(yán)重創(chuàng)傷的XX劑，依照無菌檢查法（通則1101）檢查.” 。 注意：用于燒傷治療如為非無菌制劑的，應(yīng)在標(biāo)簽上標(biāo)明“非無菌制劑” ；產(chǎn)品說明書中應(yīng)注明“本品為非無菌制劑”，同時(shí)在適應(yīng)證下應(yīng)明確“ 用于程度較輕的燒傷( I 或淺II)” ；注意事項(xiàng)下規(guī)定“應(yīng)遵醫(yī)囑使用”。 包括：0109軟膏劑 乳膏劑 0112噴霧劑0113氣霧劑0114凝膠劑0115散劑 0118涂劑0119涂膜劑 3、新增： 0111吸入制劑：

2、吸入液體制劑【無菌】依照（通則1101）；可轉(zhuǎn)變成蒸汽的制劑【微生物限度】照非無菌產(chǎn)品微生物限度檢査：微生物計(jì)數(shù)法（通則1105)和控制菌檢查法（通則1106)及非無菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)（通則1107)檢査，應(yīng)符合規(guī)定。 4、分列： 0127洗劑0128沖洗劑0129灌腸劑：分開列，沖洗劑做【無菌】【內(nèi)毒素】或【熱源】，其他制劑做【微生物限度】。 0117搽劑0118涂劑0119涂膜劑，搽劑做【微生物限度】，其余做【無菌】或【微生物限度】。 2、名稱變化：“選擇性培養(yǎng)基”改為“中和或滅活用培養(yǎng)基” 3、培養(yǎng)基靈敏度檢查： 菌液制備：金葡、銅綠、枯草的培養(yǎng)物在胰酪大豆胨培養(yǎng)基 上進(jìn)行（10版為營

3、養(yǎng)瓊脂和營養(yǎng)肉湯）；白色念珠菌、黑曲霉的培養(yǎng)物在沙氏培養(yǎng)基上進(jìn)行（10版為改良馬丁） 接種量的變化：硫乙和胰酪大豆胨均改為7支，枯草接種至胰酪大豆胨培養(yǎng)。（10版枯草接種至硫乙） 方法適用性試驗(yàn)： 1、名稱：（10版方法驗(yàn)證試驗(yàn)）改為方法適用性試驗(yàn)。 2、操作：薄膜過濾法：將培養(yǎng)基加至濾筒內(nèi)培養(yǎng)，刪除“取出濾膜接種至.培養(yǎng)基的操作”。直接接種法：接種量硫乙和胰酪大豆胨均改為6支，枯草接種至胰酪大豆胨培養(yǎng)。（10版枯草接種至硫乙） 3、培養(yǎng)時(shí)間：不得超過5天，（10版為35天） 其他 ： 供試品的無菌檢查： 1、檢驗(yàn)數(shù)量：整合原二，三部抽樣要求。要求基本不變 2、陽性對照：陽性對照管培養(yǎng)要求為7

4、2小時(shí)內(nèi)應(yīng)生長良好（10版為4872小時(shí)應(yīng)生長良好） 3、薄膜過濾法：一般應(yīng)采用封閉式薄膜過濾器，刪除了“也可使用一般薄膜過濾器”。明確了設(shè)備使用要求。水溶液供試品：混合至含不少于100ml適宜稀釋液的無菌容器中.（10版為“混合至含適量稀釋液的無菌容器中.”），規(guī)定了稀釋液最低量。生物檢查法 非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：修訂思路：將中國藥典2010年版一、二、三部的相關(guān)內(nèi)容合并參考EP7.0 USP35 JP XV標(biāo)準(zhǔn)，修訂限度標(biāo)準(zhǔn)生物檢查法 非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查： 1105微生物計(jì)數(shù)法： 主要變化： 細(xì)分：將10版一二部附錄 微生物限度檢查法 分為三部分：1105非無菌產(chǎn)品檢查：微生物計(jì)

5、數(shù)法、1106非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法、1107非無菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)。 試驗(yàn)環(huán)境：應(yīng)符合微生物限度檢查的要求。 方法適用性：主要是判斷標(biāo)準(zhǔn)變化，樣品回收率在0.52；方法適用性試驗(yàn)更為詳細(xì)，（供試品制備方法的增加變化）；增加MPN法方法適用性：采用M P N法時(shí)，試驗(yàn)組菌數(shù)應(yīng)在菌液對照組菌數(shù)的95%置信限內(nèi)。 3、供試品檢查： 檢驗(yàn)量：檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從2 個以上最小包裝單位中抽取供試品，大蜜丸還不得少于4 丸，膜劑還不得少于4 片。 培養(yǎng)基：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于測定需氧菌總數(shù)；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于測定霉菌和酵母菌總數(shù)。非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查： 11

6、06控制菌檢查法：培養(yǎng)基適用性 培養(yǎng)基變化：如營養(yǎng)瓊脂變?yōu)橐壤掖蠖闺耍牧捡R丁變?yōu)樯呈系取?控制菌檢查：耐膽鹽革蘭陰性菌替代大腸菌群大腸埃希氏菌檢查方法變化，TSB增菌，不用MUG了非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查： 1107非無菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)一、限度標(biāo)準(zhǔn)：更為清楚明了（共8項(xiàng)4個表） 1、制劑通則、品種項(xiàng)下要求無菌的制劑及標(biāo)示無菌的制劑和原輔料 應(yīng)符合無菌檢查法2、用于手術(shù)、燒傷或嚴(yán)重創(chuàng)傷的局部給藥制劑 應(yīng)符合無菌檢查法3、非無菌化學(xué)藥品制劑、生物制品制劑、不含藥材原藥粉的中藥制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)注意需氧菌總數(shù)概念，10版為“菌落總數(shù)”4、非無菌含藥材原粉的中藥制劑微生物限度標(biāo)準(zhǔn)注意 檢查控制

7、菌種類 A以原材料種類來決定：如口服給藥制劑（是否含豆豉、神曲等原料）大腸埃希、沙門、耐鹽G- B以給藥部位來決定：如表皮粘膜 金葡 銅綠5、非無菌的藥用原料及輔料微生物限度標(biāo)準(zhǔn)6、中藥提取物及中藥飲片的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)10版為：中藥提取物及輔料參照相應(yīng)制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。 7. 有兼用途徑的制劑 應(yīng)符合各給藥途徑的標(biāo)準(zhǔn)。二、可接受最大菌數(shù)最大可接受限度值遵守2倍規(guī)則，及101 CFU最大可接受為20藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則前言：藥品微生物實(shí)驗(yàn)室“規(guī)范”指導(dǎo)原則，改為.“質(zhì)量管理”指導(dǎo)原則；包括內(nèi)容為：人員、培養(yǎng)基、試劑、菌種、環(huán)境、設(shè)備、樣品、檢驗(yàn)方法、污染廢棄物處理、檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)

8、量保證檢測過程質(zhì)量控制、試驗(yàn)記錄、結(jié)果的判斷和檢測報(bào)告、文件等。（內(nèi)容更豐富）。人員：實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室生物安全方面的培訓(xùn)，保證自身安全，防止微生物在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部污染；培養(yǎng)基：1、制備：容器的要求，不得影響培養(yǎng)基質(zhì)量，一般為玻璃容器.環(huán)境：1、實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行生物安全：活菌操作區(qū)應(yīng)該配備生物安全柜，以避免危害性的生物因子對試驗(yàn)人員和實(shí)驗(yàn)環(huán)境造成的危害；病原菌微生物的分離鑒定應(yīng)在二級生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。布局：明確規(guī)定無菌檢查應(yīng)在B級背景下的A級單向流潔凈區(qū)域或隔離器系統(tǒng)中進(jìn)行，微生物限度檢查應(yīng)在不低于D級背景下的B級單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。AB區(qū)域的空氣供給應(yīng)通過終端高效空氣過濾器人員進(jìn)場：對微

9、生物實(shí)驗(yàn)室使用權(quán)限要求限于經(jīng)授權(quán)的工作人員，實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)了解潔凈區(qū)進(jìn)出程序、更衣流程，該區(qū)域的限制要求等溫度測量設(shè)備：培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、冰箱、低溫冰箱等稱量設(shè)備容量測定設(shè)備：移液器、移液管潔凈設(shè)備的性能監(jiān)控生物安全柜、超凈工作臺、高效過濾器安裝調(diào)試后的現(xiàn)場檢測和定期再驗(yàn)證，保存相關(guān)記錄和測試結(jié)果（結(jié)合環(huán)境監(jiān)測記錄）其他設(shè)備懸浮粒子計(jì)數(shù)器、浮游菌采樣器定期校準(zhǔn)PH計(jì)、濕度計(jì)、定時(shí)器等對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響的關(guān)鍵參數(shù)檢測的儀器進(jìn)行校準(zhǔn)總結(jié)一：全面與國際接軌：新藥典參考EP7.0、USP35、JPXV標(biāo)準(zhǔn)，修訂中國藥典的微生物標(biāo)準(zhǔn)；參考?xì)W美日藥典標(biāo)準(zhǔn)修訂菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)表達(dá)方式；以需氧菌總數(shù)替代細(xì)菌數(shù)、耐膽鹽的

10、格蘭陰性菌替代大腸菌群等等，并增加新的概念：如含菌量較低的供試品細(xì)菌總數(shù)測定使用最大可能數(shù)法、分散均勻并非一定要溶解等等，同時(shí)新藥典引入的偏差調(diào)查概念和內(nèi)容更具體等等方面說明，微生物檢驗(yàn)技術(shù)與國際標(biāo)準(zhǔn)要求接軌已成定勢。二：實(shí)驗(yàn)環(huán)境的修訂：2015年版藥典中對無菌檢查環(huán)境潔凈度規(guī)定：無菌檢查應(yīng)在B 級背景下的A 級單向流潔凈區(qū)域或D級背景下的隔離器中進(jìn)行。限度檢查要求在受控潔凈環(huán)境下的局部不低于B級單向流空氣區(qū)域進(jìn)行。環(huán)境的提升，除了設(shè)備硬件的要求提高，還有驗(yàn)證和維持環(huán)境要求的提高。潔凈或無菌室應(yīng)配備獨(dú)立的空氣機(jī)組或空氣凈化系統(tǒng)，以滿足相應(yīng)的檢驗(yàn)要求，包括溫度和濕度的控制，壓力、照度和噪聲等都應(yīng)

11、符合工作要求?？諝膺^濾系統(tǒng)應(yīng)定期維護(hù)和更換, 并保存相關(guān)記錄。微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)劃分成相應(yīng)的潔凈區(qū)域和活菌操作區(qū)域，同時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，在時(shí)間或空間上有效分隔不相容的實(shí)驗(yàn)活動，將交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)降低到最低?；罹僮鲄^(qū)應(yīng)該配備生物安全柜，以避免危害性的生物因子對實(shí)驗(yàn)人員和實(shí)驗(yàn)環(huán)境造成的危害。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境監(jiān)測要求提高，增加人員進(jìn)出表面微生物的監(jiān)測，以降低人員操作時(shí)帶來的風(fēng)險(xiǎn)。對微生物室使用的消毒劑和清潔劑進(jìn)行驗(yàn)證，從而有效控制微生物，保證無菌環(huán)境達(dá)到要求。微生物實(shí)驗(yàn)室需要加強(qiáng)人員在環(huán)境監(jiān)測時(shí)的操作規(guī)范，保證環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。而且實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室生物安全方面的培訓(xùn)，保證自身安全，防止微生物在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部污染。三：培養(yǎng)系統(tǒng)的修訂：培養(yǎng)基系統(tǒng)的修訂提升了培養(yǎng)基的靈敏