膿汁和糞便標本中病原菌的檢測課件

1、膿汁和糞便標本中病原菌的檢測課件膿汁和糞便標本中病原菌的檢測課件微生物學實驗室規(guī)則Lab Safety Regulation 進入實驗室必須穿白大衣，戴帽子。書本、文具放在抽屜里。實驗室內不準吃東西、喝飲料，不準把任何東西放入嘴中，也不要用手撫摸頭臉等部位。凡是廢棄的細菌培養(yǎng)物、帶菌材料，應放在指定地點等待滅菌處理，不得隨便亂放或用水沖洗。一旦發(fā)生意外，造成污染，應立即報告老師進行處理。離開實驗室前,必須洗手。懷疑污染應及時用1新潔而滅泡手。每次實驗后，實驗臺用消毒液擦拭，地板先用濕的拖布拖地以后再掃地，實驗室用紫外線燈照射1小時。 牛牛文庫文檔分享微生物學實驗室規(guī)則Lab Safety Re

2、gulatio實驗分組（40人）倆倆相對4人為一個小組,組號編在電源插座上。每組按從前到后,從左到右的順序，分別編號為甲、乙、丙、丁。 甲 乙 4丙 丁甲 乙 3丙 丁甲 乙 2丙 丁甲 乙 1丙 丁甲 乙 5丙 丁甲 乙 8丙 丁甲 乙 7丙 丁甲 乙 6丙 丁甲 乙 10丙 丁甲 乙 9丙 丁 講 臺左右 牛牛文庫文檔分享實驗分組（40人）倆倆相對4人為一個小組,組號編在電源插座上實驗室器材介紹 牛牛文庫文檔分享實驗室器材介紹 牛牛文庫文檔分享常用器材擺放順序：電源插座試管架酒精燈污物盤。試管架上器材：靠近插座一側第1列放置接種針,第2列放置接種環(huán)，另一側中間兩行放置油性筆和打火機。器材使

3、用后，必須放回原處，依次擺整齊。 牛牛文庫文檔分享常用器材擺放順序：電源插座試管架酒精燈污物盤。器材使普通冰箱(3顆星*)冷藏室(上柜）：溫度48，保存細菌培養(yǎng)物，培養(yǎng)基，常用菌種和抗菌素紙片等。冷凍室（下柜）：溫度18，保存診斷血清、血漿，長期保藏的抗菌素紙片。 衛(wèi)生工具：掃帚,拖布,撮箕,垃圾筐,放在冰箱和水池之間。 牛牛文庫文檔分享普通冰箱(3顆星*)衛(wèi)生工具：隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱：3537，一般細菌培養(yǎng)時間為1824小時。 牛牛文庫文檔分享隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱：3537，www.niuwk.co奧林巴斯 CX21型 生物顯微鏡（實驗柜內，每人一臺）注意：只能橫放，不得豎放。 牛牛文庫文

4、檔分享奧林巴斯 CX21型 生物顯微鏡注意：只能橫放，不得豎放。w 1500W電爐安全警告1.電源插塞與電爐插孔接觸良好插頭插入插座。2.如果培養(yǎng)基暴沸溢出，流入電爐；必須立即切斷電源、拔除插頭；以免觸電，危及生命！東西兩側邊臺各一個電爐，每個電爐可同時放置4個300ml錐形瓶進行加熱。 牛牛文庫文檔分享 1500W電爐安全警告東西兩側邊臺各蒸餾水：配制培養(yǎng)基。1新潔而滅：懷疑病原菌污染，泡手35分鐘。消毒液：擦拭實驗臺臺面。玻片缸：浸泡用過的載玻片。 牛牛文庫文檔分享蒸餾水：配制培養(yǎng)基。 牛牛文庫文檔醫(yī)學微生物學實驗綜合性實驗一Comprehensive Experiment 1 膿汁和糞便

5、標本中病原菌的檢測（P2） Isolation and detection of pathogenic bacteria in pus and stool specimens 培養(yǎng)基的制備P2消毒與滅菌P5細菌的人工培養(yǎng)無菌技術（錄像）擺斜面，傾注平板。 牛牛文庫文檔分享醫(yī)學微生物學實驗綜合性實驗一Comprehensive 膿汁、痰、咽部分泌物觀察菌落特征、溶血性、色素肉湯增菌培養(yǎng)挑取可疑菌落涂片染色鏡檢血平板培養(yǎng)直接涂片、革蘭染色、鏡檢血液、穿刺液純培養(yǎng)培養(yǎng)液涂片染色境檢染色鏡檢生化反應血清學鑒定雙糖鐵培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)血、骨髓挑取可疑菌落SS瓊脂、伊紅美藍平板分離培養(yǎng)糞便常見腸道致病菌的檢查

6、程序P48：常見病原性球菌的檢查程序P47：生化反應動物實驗藥敏實驗 牛牛文庫文檔分享膿汁、痰、咽部分泌物觀察菌落特征、溶血性、色素肉湯增菌培養(yǎng)挑膿汁和糞便標本中病原菌的檢測實驗流程(6次課12學時）培養(yǎng)基的制備細菌的分離培養(yǎng)細菌的純培養(yǎng)細菌的形態(tài)學檢查細菌的生化試驗等細菌的血清學試驗、結果分析實驗論文撰寫 牛牛文庫文檔分享膿汁和糞便標本中病原菌的檢測實驗流程(6次課12學時）培培養(yǎng)基的制備 Preparation of Culture Media組號培養(yǎng)基稱量水量煮沸分裝備注（40人份）1營養(yǎng)瓊脂11.4g300ml-4瓶，500ml瓶，平板24營養(yǎng)瓊脂2.9g75ml3次5ml15支3，中

7、試管，斜面57營養(yǎng)肉湯1.1g50ml1次3ml15支3，小試管，肉湯810半固體瓊脂1.7g60ml3次4ml15支3，小試管，高層公共培基，勿作標記！請在30分鐘內完成！ 牛牛文庫文檔分享培養(yǎng)基的制備 Preparation of Culture 培養(yǎng)基隔石棉網煮沸，使完全溶解。營養(yǎng)肉湯煮沸1次，含瓊脂的培養(yǎng)基煮沸3次(煮至剛剛冒泡,立即放置臺面，半分鐘后再煮)。加熱時,常搖動。沸騰時，不能搖動！ 牛牛文庫文檔分享 培養(yǎng)基隔石棉網煮沸，使完全溶解。營養(yǎng)肉湯煮沸1次，含瓊用洗耳球和刻度吸管分裝培養(yǎng)基。棉塞1/2塞入試管口內，松緊合適。培養(yǎng)基趁熱分裝培養(yǎng)基裝筐待滅菌放置試管筐內，罩上硫酸紙牛皮

8、紙，用橡皮筋扎好。 牛牛文庫文檔分享用洗耳球和刻度吸管分裝培養(yǎng)基。培養(yǎng)基趁熱分裝培養(yǎng)基裝筐待滅菌各組邊臺柜子內器材量筒錐形瓶砝碼干粉培養(yǎng)基試管筐天平 牛牛文庫文檔分享各組邊臺柜子內器材量筒錐形瓶砝碼干粉培養(yǎng)基試管筐天平www.各組邊臺抽屜內器材試管刻度吸管洗耳球稱量皿2個藥勺厘米尺硫酸紙、牛皮紙、橡皮筋 牛牛文庫文檔分享各組邊臺抽屜內器材試管刻度吸管洗耳球稱量皿2個藥勺厘米尺硫酸 稱量皿置于左盤，游碼移至標尺左端“0”點位置上，指針應對準中線，取得平衡。否則將杠桿兩端的調整螺母旋動調節(jié)平衡。 秤物時“左物右碼”，砝碼置右盤，物品置左盤，盡可能放在秤盤中心。天平保持干燥、清潔。用過的藥勺、稱量皿

9、清洗干凈。 牛牛文庫文檔分享 稱量皿置于左盤，游碼移至標尺左端“0”點位置上，指針培養(yǎng)基配制器材內蓋蓋好外蓋扭緊 牛牛文庫文檔分享培養(yǎng)基配制器材內蓋蓋好 牛牛文庫文培養(yǎng)基的制備 Preparation of Culture Media組號培養(yǎng)基稱量水量煮沸分裝備注（40人份）1營養(yǎng)瓊脂11.4g300ml-4瓶，500ml瓶，平板24營養(yǎng)瓊脂2.9g75ml3次5ml15支3，中試管，斜面57營養(yǎng)肉湯1.1g50ml1次3ml15支3，小試管，肉湯810半固體瓊脂1.7g60ml3次4ml15支3，小試管，高層公共培基，勿作標記！請在30分鐘內完成！ 牛牛文庫文檔分享培養(yǎng)基的制備 Prepar

10、ation of Culture 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享Preparation of Culture media Group formation: Four students each form one group Total of 10 groups (10 4= 40) Each group will prepare the media according to the instruction given in next slide. 牛牛文庫文檔分享Preparation of Culture media GPreparation of Culture MediaGroupn

11、umberName of Medium to prepareQuantity weightingDistilled waterBoilDispensing quantity in containerContainer to dispense1Nutrient agar11.4g300ml4 bottles ，Petri dishes24Nutrient agar2.9g75ml35ml153 tubes ，agar slants57Nutrient broth1.1g50ml13ml153 tubes ，broth tubes810Semi-solid agar1.7g60ml34ml153

12、tubes ，agar deepsMelt agar into solution in the microwave or electric stove 牛牛文庫文檔分享Preparation of Culture MediaGr玻璃器材的洗刷無污染器皿:洗滌劑洗刷流水沖洗10次晾干。病原菌污染的器材高壓蒸汽滅菌趁熱倒出污物洗滌劑浸泡瓶子、試管、吸管用毛刷，平皿用紗布，洗刷干凈流水沖洗10次晾干。瓶刷試管刷吸管刷去污粉紗布 牛牛文庫文檔分享玻璃器材的洗刷無污染器皿:洗滌劑洗刷流水沖洗10次晾干。收拾器材，放回邊臺柜內，依次擺整齊!量筒錐形瓶砝碼干粉培養(yǎng)基試管筐天平量筒罩紙?zhí)?，扎皮?。錐形瓶洗干

13、凈，塞棉塞，罩紙?zhí)?，扎皮?。干粉培養(yǎng)基內外蓋子，必須蓋好扭緊！ 牛牛文庫文檔分享收拾器材，放回邊臺柜內，依次擺整齊!量筒錐形瓶砝碼干粉培養(yǎng)基收拾器材，放回抽屜內，依次擺整齊!試管刻度吸管洗耳球稱量皿藥勺厘米尺硫酸紙、牛皮紙、橡皮筋藥勺、稱量皿、刻度吸管洗刷干凈，甩去水滴，放回邊臺抽屜內。 牛牛文庫文檔分享收拾器材，放回抽屜內，依次擺整齊!試管刻度吸管洗耳球稱量皿藥 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享細菌培養(yǎng)基 Culture Media 用人工的方法，將多種營養(yǎng)物質，根據各種微生物生長繁殖的需要而合成的一種營養(yǎng)制品。它的主要成分是蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉和水，pH7.47.6。培養(yǎng)基制備的一般

14、程序： 調配溶化 矯正pH 分裝滅菌檢定保存。 干粉培養(yǎng)基蒸餾水加熱溶化分裝滅菌檢定 保存。培養(yǎng)基的制備原則： (1)適當的營養(yǎng)成分,(2)合適的酸堿度,(3)配制后必須滅菌。 牛牛文庫文檔分享細菌培養(yǎng)基 Culture Media 用人工的方培養(yǎng)基的種類（按物理性狀分類）液體培養(yǎng)基:不含凝固劑(瓊脂),用于增菌，純培養(yǎng),保種。固體培養(yǎng)基:含12瓊脂，用于分離培養(yǎng),純培養(yǎng),保種。半固體培基（瓊脂高層）:含0.30.5瓊脂，用于動力檢測,保種。營養(yǎng)肉湯 broth tube 瓊脂斜面 agar slant 瓊脂高層 agar deepDifferent forms of culture medi

15、a. 牛牛文庫文檔分享培養(yǎng)基的種類（按物理性狀分類）營養(yǎng)肉湯 broth tube培養(yǎng)基的種類（按用途分類）P3基礎培養(yǎng)基:含一般細菌生長繁殖所需的基本營養(yǎng)成分，可作為一些特殊培養(yǎng)基的基礎成分，如普通平板。營養(yǎng)培養(yǎng)基：在基礎培養(yǎng)基中加入血液、生長因子等特殊成分，供營養(yǎng)要求較高的細菌和須要特殊生長因子的細菌生長，如血平板。增菌培養(yǎng)基：促進目的菌的生長，適用于含菌量較少的標本，如葡萄糖肉湯。選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入抑制劑抑制雜菌生長，有助于目的菌的生長，如EMB、SS平板。鑒別培養(yǎng)基：利用細菌分解能力及代謝產物的不同，在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑，用來試驗細菌的生化反應、代謝產物，如糖發(fā)

16、酵管。厭氧培養(yǎng)基：氧化還原電勢低，表面用凡士林和石蠟封住，與空氣隔絕，成為無氧環(huán)境，如庖肉培養(yǎng)基。 牛牛文庫文檔分享培養(yǎng)基的種類（按用途分類）P3 牛培養(yǎng)基的滅菌 在冷空氣完全排盡的情況下，蒸汽壓103.43 kPa ,溫度可達到121.3 ,維持1530分鐘，可以殺滅包括細菌芽胞在內的所有微生物?；A培養(yǎng)基：121高壓蒸汽滅菌1530分鐘。含糖培養(yǎng)基：115滅菌15分鐘。雞蛋、牛奶培養(yǎng)基:7510030分鐘，3次(1天1次)。不耐高溫的液體成分：濾菌器濾過除菌EK型蔡氏濾器、 G5或G6玻璃濾器、0.45um或0.22um微孔濾膜。 牛牛文庫文檔分享培養(yǎng)基的滅菌 在冷空氣完全排盡的情況下，蒸

17、汽壓1瓊脂平板 agar plate 含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌以后，冷卻5060（溫度越高，冷凝水越多，越易污染 ），以無菌操作，傾注平皿10ml（直徑7厘米平皿），瓊脂凝固后形成瓊脂平板。 平板主要用于細菌的分離培養(yǎng)和藥敏試驗。平板儲存待用或做細菌培養(yǎng)時，為什么要倒置？防止平板水分蒸發(fā)丟失。防止冷凝水滴于平板表面，影響單菌落形成。 牛牛文庫文檔分享瓊脂平板 agar plate 含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌以后，瓊脂斜面 agar slant 含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌以后，趁熱斜放，培基不超過試管長度的2/3，瓊脂凝固以后形成一個傾斜的表面。 斜面主要用于純菌移種和菌種保存。 斜面底部的冷凝水有利于純菌移種、菌苔

18、形成和菌種保藏。 牛牛文庫文檔分享瓊脂斜面 agar slant 含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌以后怎樣檢查培養(yǎng)基是否合格?無菌試驗：將待檢培養(yǎng)基置于3537培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時，無任何細菌生長為合格。效果試驗：將已知的標準參考菌株，接種于待檢培養(yǎng)基中，檢查細菌的生長繁殖狀況和生化反應是否與預期的結果相符合。 牛牛文庫文檔分享怎樣檢查培養(yǎng)基是否合格? 牛牛文庫細菌生長繁殖的方式和速度細菌繁殖方式：以二分裂方式進行無性繁殖。繁殖速度：多數2030分鐘繁殖1代，結核桿菌1820小時繁殖一代。細菌生長繁殖曲線 牛牛文庫文檔分享細菌生長繁殖的方式和速度細菌繁殖方式：以二分裂方式進行無性繁細菌的生長曲線細菌數量的對數

19、培養(yǎng)時間（小時）5 10 15 20 25 30 6.06.57.07.58.08.59.0活菌數總菌數遲緩期對數生長期穩(wěn)定期衰退期 牛牛文庫文檔分享細菌的生長曲線細菌數量的對數培養(yǎng)時間5 1細菌生長曲線意義遲緩期：一般14h，細菌代謝活躍，但不繁殖。對數期：維持48h，細菌快速繁殖，數目呈幾何級數增加，細菌形態(tài)、染色性、生理活性最典型、對抗菌素最敏感。細菌鑒定選用此期為佳。穩(wěn)定期： 通常維持10h，活菌數和死菌數幾乎相等，代謝產物形成較多。衰亡期：培養(yǎng)18 24 h以后，代謝逐漸停滯,死菌數超過活菌數。 牛牛文庫文檔分享細菌生長曲線意義遲緩期：一般14h，細菌代謝活躍，但不繁殖玻璃器材的洗刷

20、無污染器皿:洗滌劑洗刷流水沖洗10次晾干。病原菌污染的器材高壓蒸汽滅菌趁熱倒出污物洗滌劑浸泡瓶子、試管、吸管用毛刷，平皿用紗布，洗刷干凈流水沖洗10次晾干。瓶刷試管刷吸管刷去污粉紗布 牛牛文庫文檔分享玻璃器材的洗刷無污染器皿:洗滌劑洗刷流水沖洗10次晾干。試管用毛刷，上下、旋轉刷洗內壁和管底。字跡用濕紗布，粘去污粉擦拭。管口朝向相同，流水沖洗10次。洗干凈的試管，倒扣在筐內，晾干。平皿用紗布，旋轉擦拭內外側，字跡用紗布粘去污粉擦拭。流水沖洗10次。逐個倒扣在筐內，晾干。 牛牛文庫文檔分享試管用毛刷，上下、旋轉刷洗內壁和管底。字跡用濕紗布，粘去玻璃器材洗干凈的標準1.洗滌時觀察:洗后的玻璃器材附著在內壁上的水不是個別水珠,而是一層極薄的