即用型SABC免疫組化染色試劑盒

1、即用型SABC免疫組化染色試劑盒兔IgG 使用說明書產品編號：QD82102試劑的保存：短期4可保存，長期-20。工作原理S-Avidin(鏈霉親和素)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質，分子量47000。同親和素一樣，對生物素分子有極高的親和力，是一般抗原抗體親和力的一百萬倍。親和素是一個堿性蛋白質（IP=10），經改造后可以轉變成中性蛋白質。鏈霉親和素等電點接近中性，IP=6.06.5，對組織和細胞的非特異吸附很低，基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即 StreptAvidinBiotin Complex,。根據研究，SABC大約可形成上百個左右的過氧化物酶和數(shù)十個左右的鏈霉親和素所

2、構成的復合物。SABC兼具高敏感性，低背景和操作簡便的優(yōu)點。應用范圍適用于免疫組織化學方法以顯示待測抗原的分布，本試劑盒適用于常規(guī)石蠟包埋切片、冰凍切片，培養(yǎng)固定的細胞切片以及新鮮制備的血涂片、爬片等。試劑盒中內容山羊血清封閉液：1ml(效價1：10，臨用前用TBS或PBS稀釋10倍)。用于組織切片的封閉。二抗：1ml（效價1：10，臨用前用抗體稀釋液稀釋10倍)。親和純化抗體，標記長臂生物素，生物素標記抗兔IgG。SABC：1ml（效價1：10，臨用前用SABC稀釋液稀釋10倍）。鏈酶親和素-過氧化物酶復合物。用戶自備試劑：粘片劑APES或Poly-L-Lysine。0.01M PBS，0.

3、01M 枸櫞酸鹽緩沖液。DAB顯色試劑盒。免疫組化染色程序的選擇：用戶需根據抗原/抗體的特點確定程序，多數(shù)情況下要先比較各程序染色結果。石蠟切片染色程序:載玻片防脫片劑處理:可選擇APES或Poly-Lysine。撈片后置烤箱58-60 30-60分以使切片緊密粘附。切片常規(guī)脫蠟至水。3%H2O2 1份+蒸餾水10份混合,室溫5-10分鐘以滅活內源性酶。蒸餾水洗3次。酶消化程序:滴加復合消化液5-10分鐘。蒸餾水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。熱修復抗原:將切片浸入0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液（PH6.0）,電爐或微波爐加熱至沸騰 后斷電，間隔5-10分鐘后，反復1-2次。冷卻后P

4、BS（pH7.2-7.6）洗滌1-2次。滴加封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 不洗。適當稀釋的一抗（兔IgG），37 2小時左右或4過夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2分鐘3次。（一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關系。一般來說，陽性染色強度不夠時，可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時間；背景過高時，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時間。）加生物素化抗兔IgG, 37 30分鐘。PBS（pH7.2-7.6）洗2分鐘3次。滴加試劑SABC, 37 30分鐘。PBS（pH7.2-7.6）洗5分鐘4次。DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒。取1ml蒸餾水,加試劑盒中A,B,C試劑各50ul,混勻后加

5、至切片。室溫顯色, 顯微鏡下觀察顯色反應，時間一般在3-30分鐘之間。達到合適著色強度時（陽性較強，背景較低），即可終止反應（用蒸餾水洗滌切片）。蘇木素輕度復染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。 注意事項：如果染色背景過高，在SABC反應之后，DAB顯色之前,用加有0.010.02% TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗滌切片4次，單純PBS洗2次，然后DAB顯色。警告：DAB 為可疑致癌物，請采取必要的防范措施。熱修復抗原可選0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多種緩沖液。脫蠟不徹底，容易出現(xiàn)非特異性背景染色，建議免疫組化切片脫蠟與常規(guī)H.E脫蠟分開。如果將本試劑盒用于肝臟與腎臟等含內源性生