常用試劑配方

1、常用試劑配方常用試劑儲(chǔ)存注意事項(xiàng)：儲(chǔ)存于陰涼、通風(fēng)的地方；遠(yuǎn)離火種、熱源。避免光照。室溫不超過30C，相對(duì)濕度不超過80%。包裝必須密封，切勿受潮。應(yīng)與易（可）燃物、還原劑、堿類、醇類、食用化學(xué)品分開存放，切忌混儲(chǔ)，儲(chǔ)區(qū)應(yīng)備有合適的材料收容泄漏物。操作注意事項(xiàng)：盡量在通風(fēng)櫥操作，加強(qiáng)通風(fēng)，避免粉塵擴(kuò)散。遠(yuǎn)離易燃、可燃物，避免與還原劑、堿類、醇類接觸，防止包裝及容器損壞。使用后應(yīng)留意剩余量，注意及時(shí)訂購。8MUrea（尿素）組份濃度：8mol/LUrea（MW：60.07）配制量：1L配制方法：1稱取尿素480g，置于1L的藍(lán)蓋瓶中。加水至1L，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢?。于棕色瓶中?C保存。使

2、用前，先在常溫放置，使析出的尿素溶解。0.25%AgNO（硝酸銀）組份濃度：配制量：配制方法：30.25%（W/V）AgNO（MW：169.87）3500ml1.準(zhǔn)確稱取硝酸銀1.25g。2加入500ml的去離子水，充分溶解。3.于棕色瓶中,常溫保存。0.5MEDTA（PH8.0）組分濃度:0.5mol/LEDTA（MW：372.24）配制量:500ml配制方法：1.稱取93gNaEDTA2H2O置于500ml藍(lán)蓋瓶中。加入400ml的去離子水，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢?。用NaOH調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH值至8.0（約需加入20g固體NaOH），當(dāng)pH接近8.0時(shí)，EDTA方可完全溶解，加入去離子水定容至

3、1L。4高溫高壓滅菌后，室溫保存半年。5MNaCl組份濃度：5mol/LNaCl（MW：58.5）配制量：1L配制方法：1.準(zhǔn)確稱取氯化鈉292.5g，置于1L的藍(lán)蓋瓶中。用去離子水溶解并稀釋至1L。高溫高壓滅菌后，常溫保存。50%甘油組分濃度：配制量：配制方法:50%(V/V)glycerol100ml量取下列試劑，置于250ml藍(lán)蓋瓶中：100%glycerol50ml加入50ml去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻J溫咼壓滅菌，4C保存。使用時(shí)，到超凈臺(tái)分裝。2MCaCl組份濃度：配制量：配制方法:2mol/LCaCl(MW：110.98)250ml準(zhǔn)確稱取氯化鈣4.4g于50ml的conicalt

4、ube中。用去離子水溶解并稀釋至500ml，用0.22口m濾膜過濾除菌濾膜過濾除菌到進(jìn)口的conicaltube。3貯存于4C。2MMgSO4組份濃度：配制量：配制方法：2mol/LMgSO(MW：120.37)450ml1.準(zhǔn)確稱取硫酸鎂4.8g于50ml的conicaltube中。2用去離子水溶解并稀釋至50ml，用0.22口m濾膜過濾除菌到進(jìn)口的conicaltube。3.貯存于4C3MNaOAc（pH5.2）組份濃度:3mol/LCHCOONa（MW:136）配制量:3100mL配制方法：1.稱取40.8gNaOAc3H20置于200mL藍(lán)蓋瓶中，2加入約40mL的去離子水?dāng)嚢枞芙饧尤?/p>

5、冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。加入去離子水將溶液定容至100mL。咼溫咼壓滅菌后，室溫保存。3MKOAc組份濃度:3mol/LCHCOOK（MW:98）配制量:3100mL配制方法：在60ml5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。1MNa2SO4組份濃度:1mol/L(MW:142.04)配制量:500mL配制方法：1.稱取71.02g置于500mL藍(lán)蓋瓶中，加入去離子水將溶液定容至500mL。室溫保存。HEPES1MHEPES：配制量:100mL配制方法：1、將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaO

6、H調(diào)pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。2、如不想加入OH-,可以配200mlHEPES和200mlHEPESsodiumsalt，將HEPESsodiumsalt加入200mlHEPES調(diào)至所需PH。注意:一般長晶體用的HEPES需用后一種方法配制，配一般buffer則可用第一種方法配。50%PEG(聚乙二醇)有分子量400，1000，2000，4000，6000，10000配制量：500mL配制方法：稱取250gPEG加入500ml藍(lán)蓋瓶，加水至500ml,置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢?，完全溶解后，用NALGENE過濾器抽濾，抽濾后用50ml滅菌離心管分裝，存放在-20C底層。2

7、0%Glucose(葡萄糖)組份濃度：20%(W/V)Glucose配制量：100ml配制方法：稱取20gGlucose置于150ml的廣口試劑杯中，加入去離子水到100ml后，攪拌溶解。高溫高壓滅菌后，4C保存。100mMATP組份濃度：100mMATP配制量：20ml配制方法：稱取121mgNa2ATP3H20，加入到50ml塑料離心管內(nèi)。加20ml的25mMTris-HCl(pH8.0),攪拌溶解。適量分成小份后，-20C保存。培養(yǎng)基2YT液體培養(yǎng)基放置：NaCl、蛋白胨、酵母粉置于放電子天平的實(shí)驗(yàn)桌上層或在試劑柜底層配方及配法：500ml1L2LNaCl2.5g5g10g蛋白胨（TRY

8、PTONE）8g16g32g酵母粉(YEASTEXTRACT)5g10g20g注意：在通風(fēng)櫥內(nèi)稱量，防止粉末飛起一般用2L三角瓶配2L培養(yǎng)基搖勻溶解后分裝成每瓶500ml。裝好瓶的液體培養(yǎng)基加塞并用錫箔紙包好，121C高溫高壓滅菌。配50ml或100ml2YT液體培養(yǎng)基時(shí)，先用2L瓶配好所需總量，完全溶解后分裝。2YT固體培養(yǎng)基放置：Agar置于放電子天平的實(shí)驗(yàn)桌上層配方及配法：取三個(gè)500ml三角瓶，各加5gAgar（鷺?。?，將配好的1L2YT液體培養(yǎng)基均分成三分加到三個(gè)500ml三角瓶中，用錫箔紙包好，121C高溫高壓滅菌。（不需加塞，因?yàn)榧尤蠓挪贿M(jìn)微波爐）抗生素Amp-氨芐青霉素（鈉鹽

9、）放置：置于4C冰箱配方及配法：配成200mg/ml的1000*溶液儲(chǔ)存（40g溶于200ml蒸餾水中），溶解后在超凈臺(tái)用注射器過濾滅菌分裝，置于-20C冰箱第二層,以1*的終濃度（200ug/ml）加入培養(yǎng)基。Kan-卡那霉素（硫酸根）放置：置于試劑柜配方及配法：配成20mg/ml的1000*溶液儲(chǔ)存（4g溶于200ml蒸餾水中），溶解后在超凈臺(tái)用注射器過濾滅菌分裝，置于-20C冰箱第二層,以1*的終濃度（20ug/ml）加入培養(yǎng)基。Chi-氯霉素放置：置于試劑柜配方及配法：配成34mg/ml的1000*溶液儲(chǔ)存（6.8g溶于200ml100%乙醇中），溶解后在超凈臺(tái)用注射器過濾滅菌分裝，置

10、于-20C冰箱第二層,以1*的終濃度（34ug/ml）加入培養(yǎng)基，注意：如接種到5ml培養(yǎng)基搖不起來，可將Chl用量減半蛋白表達(dá)純化相關(guān)：IPTG（異丙基硫代-B-D-半乳糖苷）放置：置于-20C冰箱頂層配方及配法：1MIPTG的配制：溶解23.8gIPTG溶于水中，定容至100mL溶解后在超凈臺(tái)用注射器過濾滅菌分裝，置于-20C冰箱第二層，一般使用濃度為0.25uM,即500ml培養(yǎng)基加125ul,注意：個(gè)別蛋白表達(dá)提咼IPTG濃度能提咼表達(dá)量DTT（二硫蘇糖醇）放置：置于-20C冰箱頂層配方及配法：1MDTT的配制：溶解7.7gIPTG于50mL水中，溶解后分裝成1。5ml管，置于-20C

11、冰箱第二層使用濃度為1-10mMPepstantin（胃蛋白酶抑制劑）放置：置于-20C冰箱頂層，25mg1mg/mLpepstantin的配制（1000X）:分子量685.89配制直接加25ml異丙醇，蓋緊蓋搖勻，分裝成小份貯存于一20C工作濃度1ug/mLLeupeptin（亮抑酶肽）放置：置于-20C冰箱頂層，25mg1mg/mLleupeptin的配制（1000X）:分子量475.60配制：直接加20ml水，蓋緊蓋搖勻，分裝成小份貯存于一20C工作濃度:1ug/mLL-glutathionereduced（還原型谷胱甘肽）放置：置于4C冰箱200mMglutathionereduced

12、：分子量307.33配制:稱取3.07gglutathionereduced溶解于50ml的水中，分裝成小份貯存于-20C。工作濃度：10mMB-0G放置：置于-20C冰箱Stock濃度：100mM使用濃度：12mMThrombin放置：置于-20C冰箱配制溶液：50mMsodiumcitrate,pH6.5,200mMNaCl,0.1%PEG-10000,50%glycerol單位：0.51U/mlSpermidine（亞精胺）100mMSpermidine的配制：分子量254.6配制稱取0.077gSpermidine溶解于3ml的水中，分裝成300ul貯存于-20C。Spermine（精

13、胺）100mMSpermine的配制：分子量348.2配制稱取0.105gSpermine溶解于3ml的水中，分裝成300ul貯存于-20C。Imidazole（咪唑）放置：試劑柜1MImidazole配制：分子量:68.08配制：稱取34.04gImidazole溶解于450ml的水中，用HCl調(diào)PH至7.5,補(bǔ)足水至500mlPMSF（苯甲基磺酰氟）放置：試劑柜0.1MPMSF的配制：分子量174.19保存室溫保存，配成PMSF溶液后需-20C保存。配制溶解0.87g的PMSF于足量的異丙醇中，定容到50ml。分成小份貯存于一20C。工作濃度1mM注意：有毒，對(duì)呼吸道粘膜、眼睛和皮膚有很強(qiáng)

14、的危害性，配制時(shí)請(qǐng)?jiān)谕L(fēng)櫥進(jìn)行，并穿實(shí)驗(yàn)服及戴一次性手套。GSTlysisbuffer:50mMTris（pH8.0）500mMNaCl10%Glycerol5mMEDTA5mMB-ME/DTTproteaseinhibitors（1mMPMSF,1000 xpepstantin,1000 xleupeptin）1L配方：1MTris（pH8.0）50ml5MNaCl100ml100%Glycerol100ml0.5MEDTA10ml14.4MB-ME357ul加水至1L保存4保存注意proteaseinhibitors及DTT須現(xiàn)用現(xiàn)加。GSTElutionBuffer：保存現(xiàn)配現(xiàn)用配制取一

15、定體積的200mMglutathionereduced,在GSTlysisbuffer中稀釋20倍，此時(shí)濃度即為(10mMglutathionereduced)GSTElutionBuffer。注意：proteaseinhibitors及DTT須現(xiàn)用現(xiàn)加。His-taglysisbuffer:50mMTris(pH8.0)500mMNaCl10%Glycerol20mMImidazole5mMB-MEproteaseinhibitors(1mMPMSF,1000 xpepstantin,1000 xleupeptin)IL配方：1MTris(pH8.0)50ml5MNaCl100ml100%G

16、lycerol100ml1MImidazole20ml14.4MB-ME357ul加水至1L保存4保存注意proteaseinhibitors須現(xiàn)用現(xiàn)加。His-tagElutionBuffer：保存：4C冰箱配制方法：分4種，Imidazole濃度分別為50mM,100mM,200mM,500mM,50mlElutionBuffer加入IMImidazole量分另U為：2.5ml,5ml,10ml,25ml,其他成分與His-taglysisbuffer一樣，50ml配方：TOC o 1-5 h z1MTris(pH8.0)2.5ml HYPERLINK l bookmark8 5MNaCl

17、5ml100%Glycerol5ml14.4MB-ME17.85ul注意:proteaseinhibitors須現(xiàn)用現(xiàn)加。HiTrapTMSP/QFF(Q使用Tris；S使用HEPES)BufferA20mMTris8.0BufferB2mMEDTA2mMB-ME20mMTris8.02mMEDTA2mMB-ME1.5MNaCl1L配方：BufferA1MTris(pH8.0)20ml0.5MEDTA4ml14.4MB-ME142.85ul加水至1LBufferB1MTris(pH8.0)20ml0.5MEDTA4ml14.4MB-ME142.85ul5MNaCl333ml加水至1L保存：貯存

18、于4C層析柜滅菌方式：超濾滅菌，滅菌后抽氣處理HICBufferA40mMTris8.03mMB-ME1.5MammoniumsulfateBufferB40mMTris8.03mMB-ME500ml配方：BufferA1MTris(pH8.0)20ml14.4MB-ME107.14ulammoniumsulfate99.1g加水至500mlBufferB1MTris(pH8.0)20ml14.4MB-ME107.14ul加水至500mlGelFiltration20mMTris(pH8.0)100mMNaCl300mMammoniumacetatemMEDTAmMB-ME1L配方：1MTri

19、s5MNaCl(pH8.0)20ml20mlammoniumacetate23.12g0.5MEDTA2ml14.4MB-ME142.86ul加水至1L10XTEBuffer(pH8.0)組份濃度:100mMTris-HCl，10mMEDTA配制量:1L配置方法1.量取下列溶液，置于1L藍(lán)蓋瓶中。1.0MTris-HClBuffer(pH8.0)100mL0.5MEDTA(pH8.0)20mL向藍(lán)蓋瓶中加入約800mL的去離子水，均勻混合。將溶液定容至1L，高溫高壓滅菌。室溫保存半年。注意：此為貯存液，使用時(shí)稀釋100倍，用于PCR純化和質(zhì)粒提取后產(chǎn)物保存。高效感受態(tài)轉(zhuǎn)化緩沖液組分濃度：55m

20、MMnCl215mMCaCl2250mMKCl10mMPIPE(PH6.7)1L配方:10.88g2.2g18.65gMnCl-4HO22CaCl-HO22KCl0.5MPIPES(PH6.7)10ml加水至1L0.5MPIPES(PH6.7)配制量:10ml(MW:302.4)配制方法:稱取1.5g，加入到15ml塑料離心管內(nèi)。加8ml的水，攪拌溶解。用5MKOH調(diào)PH至6.70.22um濾膜過濾，-20C保存。電泳相關(guān)1.5MTris-HCl（pH8.8）組份濃度：1.5mol/LTris-HCl配制量：1L配制方法：1.稱取181.7g的Tris-base(MW：121.14)置于1L藍(lán)

21、蓋瓶中。2.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。將溶液定容至1L。高溫高壓滅菌后，室溫保存半年。1.0MTris-HCl(pH8.0)組分濃度:1.0mol/LTris-HCL配制量:1L配制方法：1稱取121g的Tris-base(MW：121.14)于山藍(lán)蓋瓶中，2加入900ml的去離子水，充分?jǐn)嚢杈鶆?，用濃鹽酸調(diào)pH值至8.0,每升約需40-50ml濃鹽酸，用水調(diào)整終體積至1L。如需其他PH的Tris，根據(jù)所要求的pH(25C下)加一定量的濃鹽酸。高溫高壓滅菌后，室溫保存半年。注意：測PH時(shí)需使用溫度補(bǔ)償電極，因?yàn)闇囟茸兓瘜?duì)Tris的PH有很大影響。濃

22、鹽酸的體積(ml)pH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.210SDS組份濃度：10(W/V)SDS配制量：500mL配置方法1.稱量50g高純度的SDS置于500mL藍(lán)蓋瓶中，加入約400mL的去離子水，68C加熱溶解。滴加數(shù)滴濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2。3將溶液定容至500mL后，室溫保存。注意：SDS為固體粉末狀，吸入會(huì)對(duì)肺造成損害，應(yīng)在通風(fēng)櫥中稱取SDS。溶解時(shí)，SDS易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢琛?0APS（過硫酸銨）組份濃度：30（W/V）APS配制量：1mL配制方法：1.準(zhǔn)確稱取0.3gAPS。加入0.8mL的去離

23、子水溶解。3貯存于4C。注意：30%的過硫酸胺溶液在4C保存時(shí)間可使用2周左右，超過期限會(huì)失去催化作用。10XSDSRunningBuffer配制量：1L配制方法：1.稱量下列試劑，置于1L藍(lán)蓋瓶中。TOC o 1-5 h zTris20gGlycine144g10%SDS100ml加入約700ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻６ㄈ葜?L，混勻，室溫保存。10XNATIVERunningBuffer(PH8.5)配制量：1L配制方法：1.稱量下列試劑，置于1L藍(lán)蓋瓶中。Tris30gGlycine142.7gEDTA3.92g加入約800ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻６ㄈ葜?L，混勻，室溫保存。10XTric

24、ineSDSRunningBufferlOxAnode(Lower)buffer外層緩沖液(2MTris/cl,PH8.9)Tris121.1gWatermakeupto5OOmlPHto8.9withHCLlOxCathode(Upper)buffer內(nèi)層緩沖液(lMTris/cl,lMTricine,l%SDS,PH8.25)Tris6O.6gTricine89.6gSDS5gWatermakeupto5OOml注:不用調(diào)PH值使用時(shí)稀釋至1XIXTricineSDSGelBuffer(3.0MTris,pH8.45/0.3%SDS)Tris181.7g10%SDS15mlWatermak

25、eupto500mlPHto8.45withHCL15%Tricine分離膠2mlseparatingacrylamide2mlgelbuffer2ml50%glycerol50ul10%APS5ulTEMED10%Tricine分離膠1.22mlseparatingacrylamide2mlgelbuffer2ml50%glycerol0.78mlwater50ul10%APS5ulTEMEDTricine濃縮膠0.25mlstackingacrylamide0.75mlgelbuffer2.0mlwater20ul10%APS2ulTEMED50XTAEBuffer(pH8.5)組分濃度：2MTris-base，100mME