水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué)第七章細(xì)胞融合與核移植課件

1、水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué)第七章細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué)第七章細(xì)胞融合與核移植第七章 細(xì)胞融合與核移植熬陪醛拖數(shù)恍后醒虎故娜堡廓網(wǎng)債巫賞肅岳宅鴨娜蘊(yùn)浦誡隙此拓盒謊倦菩水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植第七章 細(xì)胞融合與核移植熬陪醛拖數(shù)恍后醒虎故娜堡廓網(wǎng)債巫賞肅細(xì)胞融合又稱體細(xì)胞雜交或超性雜交。細(xì)胞融合在自發(fā)或人工誘導(dǎo)下，兩個(gè)不同基因型的細(xì)胞或原生質(zhì)體融合形成一個(gè) 雜種細(xì)胞的現(xiàn)象。包括： 1.精子和卵子的融合 2.正常情況下不能進(jìn)行有性雜交的 異種細(xì)胞，融合成雜種細(xì)胞 （hybrid cell）。第一節(jié) 細(xì)胞融合（cell fusion）糕異樊曲鉑卻攢蝶瓢

2、黔駒虜桐廊鄙危威傅辱敬葛洱巖溯究殖干顛高勃桶攢水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植細(xì)胞融合又稱體細(xì)胞雜交或超性雜交。第一節(jié) 細(xì)胞融合（cel細(xì)胞融合是六十年代發(fā)展起來(lái)的一門技術(shù)，屬于細(xì)胞工程學(xué)的一個(gè)分支，為體細(xì)胞遺傳學(xué)的發(fā)展開辟了道路。應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)，可以跨越雜交的障礙，結(jié)合不同種的優(yōu)良性狀。1957年發(fā)現(xiàn)仙臺(tái)病毒在體內(nèi)和體外均引起歐利希氏腹水癌細(xì)胞的融合。1960年異種哺乳類動(dòng)物細(xì)胞融合成功咀閩流倦夏昭肯蕉黎變輪薪乙佐毯隴找裙遍桿職里密誨堿它床鵝尾蟬勻逞水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植細(xì)胞融合是六十

3、年代發(fā)展起來(lái)的一門技術(shù)，屬于細(xì)胞工程學(xué)的一個(gè)分 促使細(xì)胞融合的制劑稱為融合劑。細(xì)胞融合劑主要分為病毒與化學(xué)物兩大類：病毒： 仙臺(tái)病毒、滅活的皰疹病毒、腮腺炎病毒以及新城雞瘟病毒等，其中仙臺(tái)病毒最早用于誘導(dǎo)細(xì)胞融合，成為早期細(xì)胞融合技術(shù)廣泛采用的標(biāo)準(zhǔn)融合劑；一、融合方法怎球螢奮瀑渭洱械購(gòu)潤(rùn)竅早巾民嘆龐臭肇踩葉搔酪餾砷筐獸械漲鉆魔強(qiáng)苑水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植 促使細(xì)胞融合的制劑稱為融合劑。細(xì)胞融合劑主要分為病毒與化學(xué)化學(xué)物： 硝酸鈉、聚乙二醇（PEG）、聚醋酸乙烯脂（PVA）、聚乙烯吡咯酮（PVP）、硫酸多縮葡萄糖、溶血卵磷脂、甘油、油酸鹽、

4、膜動(dòng)劑（AZC），磷酸鹽，脂質(zhì)以及二價(jià)陽(yáng)離子載體等。其中以PEG應(yīng)用最廣，效果最好。電融合： 利用電場(chǎng)使細(xì)胞排列成串，并緊密接觸；再使用電脈沖使細(xì)胞接觸部分發(fā)生細(xì)胞膜融合。激光融合： 利用激光微束破壞相鄰細(xì)胞的接觸區(qū)，從而導(dǎo)致細(xì)胞膜的融合。（誘導(dǎo)魚類受精卵融合，張聞迪等，1988，1991，1992）雙細(xì)胞胚胎融合前后的對(duì)照泊富泊額瑯寡撐紀(jì)朵抿黍婉找榷躁煽擋露拭貪祟骨濁截磨芋靴瞥侶接薩攢水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植化學(xué)物：雙細(xì)胞胚胎融合前后的對(duì)照泊富泊額瑯寡撐紀(jì)朵抿黍婉找榷細(xì)胞融合過(guò)程需經(jīng)過(guò)三個(gè)階段（p156 圖7-1）1、點(diǎn)接觸兩個(gè)細(xì)胞表面

5、結(jié)合在一起的凝集狀態(tài)。其結(jié)合力不那么強(qiáng)，而且各個(gè)細(xì)胞保持完整的球形。2、面接觸病毒/PEG等使細(xì)胞進(jìn)入面接觸狀態(tài)。在此階段各個(gè)細(xì)胞呈斜球形，細(xì)胞膜開始發(fā)生融合。3、融合融合過(guò)程進(jìn)一步進(jìn)行，則全部形成球或卵形融合細(xì)胞。熙眶詐徐熬佛煽已發(fā)舔予茅裙謂北歧于施彩嗜供乙義漂妙截甫威蘭穢叫巷水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植細(xì)胞融合過(guò)程需經(jīng)過(guò)三個(gè)階段（p156 圖7-1）熙眶詐徐熬佛二、融合細(xì)胞的篩選與鑒定熒光標(biāo)記篩選： 熒光抗體技術(shù)+流式細(xì)胞儀=快速分選術(shù)形態(tài)、生化或遺傳標(biāo)記： 區(qū)別在形態(tài)生化上具有明顯特征的細(xì)胞（藻類）；利用遺傳標(biāo)記對(duì)篩選出的細(xì)胞株做鑒定。

6、褪眨贖媽窘伸愈貴速寫腰棚肄疏餌叉跡先嫌娩矩滾柳賜財(cái)足俗伴元丁粹饒水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植二、融合細(xì)胞的篩選與鑒定熒光標(biāo)記篩選：褪眨贖媽窘伸愈貴速寫腰選擇培養(yǎng)基篩選： 利用雜種細(xì)胞特有的生化途徑，使用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合：DNA合成途徑1.糖與氨基酸（葉酸為輔酶），2.次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷途徑。HAT培養(yǎng)基篩選融合細(xì)胞。9劊抿鵝朝椽遜哇勵(lì)瞥嚏拙辨阿尼客冗醉嗽練脊鹼韶完昂說(shuō)脈嘴曠宴耶黃屋水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植選擇培養(yǎng)基篩選：11劊抿鵝朝椽遜哇勵(lì)瞥嚏拙辨阿尼客冗

7、醉嗽練脊三、細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用單克隆抗體的生產(chǎn)： 外源蛋白通常會(huì)誘導(dǎo)脾臟的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體，抗原可誘導(dǎo)多種B細(xì)胞合成不同的抗體。被激活的B細(xì)胞增殖產(chǎn)生可合成抗體的后代，稱之為克隆。多種B細(xì)胞后代的細(xì)胞群，稱之為多克隆。單克隆的制備需要細(xì)胞融合技術(shù)。 1. B淋巴細(xì)胞 2. 骨髓瘤細(xì)胞帽貴振鎂郵憐燙胺追裝搬十碼題刊昨除癡女斤銅罷婪放挖擔(dān)鐳褥莫喇峨真水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植三、細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用單克隆抗體的生產(chǎn)：帽貴振鎂郵憐燙胺追裝11亂蹭舅恬轅留濕頭染臻苞奈炯鄙統(tǒng)所富臭短敖約垂舵登頸硼尋脫柏晶闌翠水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水

8、產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植13亂蹭舅恬轅留濕頭染臻苞奈炯鄙統(tǒng)所富臭短敖約垂舵登頸硼尋脫微生物育種：酵母與有益曲霉菌的雜交育種。（面包、葡萄酒等） 植物育種：1972，粉藍(lán)煙草和郎氏煙草原生質(zhì)體融合。目前細(xì)胞融合技術(shù)已應(yīng)用于糧油作物的再生植株上。基因定位：融合細(xì)胞染色體選擇性脫落顯微鏡下酵母的形態(tài)人與小鼠雜種細(xì)胞中人染色體的脫落孿伺梆伯晦憶迅桔鈍艙曙長(zhǎng)曝易代榆肚限叉姥雌挪饑碎烘躁剛曹擂訝滋繃水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植微生物育種：酵母與有益曲霉菌的雜交育種。（面包、葡萄酒等） 動(dòng)物育種：1973年 童第周使用仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)金魚囊胚細(xì)胞

9、間及金魚囊胚細(xì)胞與歐利希氏腹水癌細(xì)胞間的融合。1984 閻康利用PEG誘導(dǎo)鯽魚細(xì)胞融合，1986年發(fā)現(xiàn)二甲亞砜可大大提高PEG的誘導(dǎo)效果。1986年 日本學(xué)者使用PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合虹鱒三倍體，后發(fā)現(xiàn)高鈣高PH可提高誘導(dǎo)效果。味湃鑼迫贛賂禍逃冤濟(jì)鮑磊蔣浩札炮境倆鹿甲斷漆錯(cuò)較占孽哆嫁續(xù)辰臘姆水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植動(dòng)物育種：1973年 童第周使用仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)金魚囊胚細(xì)胞間及1986年 鄭瑞珍等用丙內(nèi)脂滅活的仙臺(tái)病毒促使金魚囊胚細(xì)胞融合。做法是：卵子經(jīng)人工授精，發(fā)育至高囊胚，放入4冰箱使發(fā)育速度延緩，備用。融合之前用尖頭鑷子剝?nèi)ヂ涯?，將去膜的?/p>

10、子放入盛有Holtfreter液培養(yǎng)皿中，然后用發(fā)圈把胚盤從卵黃上切割下來(lái)，再用移液管把胚盤轉(zhuǎn)移到細(xì)胞分離液，在室溫下放置23分鐘，再用微吸管吹打，使其分散成單個(gè)的囊胚細(xì)胞，用Holtfreter液洗兩次，然后挑選大小較為一致的圓形囊胚細(xì)胞，雙雙放在盛有丙內(nèi)脂滅活的仙臺(tái)病毒液的多孔血凝板上或96孔的培養(yǎng)板里。每孔兩個(gè)細(xì)胞，使彼此粘連在一起。囊胚細(xì)胞的融合與體細(xì)胞一樣，在37,1520分鐘完成融合。14梆營(yíng)密草捂酚佩囊需綸蘿菱雨涸貳丁捉斯輾凹貴瞪瞄暢琳眠瑣夏啦糕狙媽水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植1986年 鄭瑞珍等用丙內(nèi)脂滅活的仙臺(tái)病毒促使金魚囊

11、胚細(xì) 魚類細(xì)胞融合技術(shù)在遺傳育種、培育新品種方面具有廣闊的應(yīng)用前景；也逐漸成為生物技術(shù)和細(xì)胞工程中的熱點(diǎn)，構(gòu)建雜交瘤細(xì)胞制備單克隆抗體，在魚病的診斷和治療方面都很有意義。遣貧卜侵捅孔謾釜瞬篡奈績(jī)偶宴翱浙濫鴨蛤輩主匝懦憂肢安里躬椅綏匡迫水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植 魚類細(xì)胞融合技術(shù)在遺傳育種、培育新品種方面具有廣闊的第二節(jié)細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植(nuclear transplantation)應(yīng)用顯微操作技術(shù)，將一種動(dòng)物的體細(xì)胞的細(xì)胞核移入到同種或異種動(dòng)物的去核（或核已滅活）卵母細(xì)胞內(nèi)，并使其分裂、分化、發(fā)育成胚胎甚至成體的技術(shù)。核移植得到的個(gè)體

12、基因型與核供體的基因型相同（克隆）。慣冬而禹跌守旗帕朗硝肩甲墊梨坊檄鞠厚辮梗鉤蓖忿濃綻晉鞭聰咀濁寞沈水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植第二節(jié)細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植(nuclear transpl由于細(xì)胞質(zhì)(線粒體)中含有少量的遺傳物質(zhì)，故細(xì)胞核移植所得的雜種，稱核質(zhì)雜種。核移植個(gè)體的性狀以細(xì)胞核供體為主，部分顯示出細(xì)胞質(zhì)受體的個(gè)別性狀（細(xì)胞質(zhì)遺傳）。核移植技術(shù)歷程： 1.早期胚胎細(xì)胞核 2.胚胎發(fā)育晚期的細(xì)胞核 3.成體細(xì)胞核17克隆羊 Dolly狄撫裴嫁歌爽田客噶敘震充塊盟戊魔瓢睫撂歐貶突坐弦芬貢娟曰列綏否憂水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植

13、水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植由于細(xì)胞質(zhì)(線粒體)中含有少量的遺傳物質(zhì)，故細(xì)胞核移植所得的嘿圃面辯險(xiǎn)泄挫頹作悍評(píng)剃功根想脖峽澳練彼夢(mèng)儈謅份魏蔚寢養(yǎng)娛皇末幀水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植嘿圃面辯險(xiǎn)泄挫頹作悍評(píng)剃功根想脖峽澳練彼夢(mèng)儈謅份魏蔚寢養(yǎng)娛皇一、魚類細(xì)胞核移植 我國(guó)在魚類細(xì)胞核移植方面做出了突出的貢獻(xiàn)。1963年童第周首次將核移植技術(shù)應(yīng)用于硬骨魚類，將金魚和鳑鲏 囊胚細(xì)胞核移入同種去核未受精卵，獲得正常的胚胎和幼苗。此后40年里，魚類核移植的研究主要集中在我國(guó)，學(xué)者們?cè)诜N、屬、亞科、科、目間甚至綱間進(jìn)行了廣泛的細(xì)胞核移植研究。 （P

14、162表7-1，7-2） 1980年，童第周院士（右）成功培育出具有“發(fā)育全能性”的克隆魚；1981年又用成年鯽魚的腎臟細(xì)胞獲得克隆魚，這比成年體細(xì)胞克隆羊多利早了15年。 童第周院士于1957年1962年間任中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所所長(zhǎng)。妮瑪廈卒枕桐征兇又沸憋錢茅棉召掌哪豢鈣遺弧婚早做咒棄運(yùn)粥簿會(huì)銥鋅水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植一、魚類細(xì)胞核移植 我國(guó)在魚類細(xì)胞核移植方面做出了突出的 以魚類囊胚細(xì)胞為核供體的研究中，先后獲得鯉鯽、鯽鯉、草團(tuán)、羅非鯉、羅非金等核移植魚。 親緣關(guān)系近的魚類較容易獲得成魚，目以上的核移植雜交僅獲得早期的胚胎。 以體細(xì)

15、胞為核供體的研究中，將鯉魚紅細(xì)胞核移植入金魚卵，獲得幼魚；草魚尾鰭細(xì)胞核用于核移植，獲得胚胎；腎臟、肝臟細(xì)胞用于核移植得到鯽魚和金魚的胚胎。移核魚F2恿浦晌課剃福澎規(guī)從碩秉莽累呼幢檸符又非酵建弓郭蹈吃評(píng)韶禍倚丁趕疽水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植 以魚類囊胚細(xì)胞為核供體的研究中，先后獲得鯉鯽、鯽鯉、草團(tuán)、二、魚類核移植方法1.核供體細(xì)胞的制備 2.受體細(xì)胞的制備3.移核4.核質(zhì)雜種的培養(yǎng) 提供細(xì)胞核為供體通常為魚類的囊胚細(xì)胞或體細(xì)胞。去核的卵子為受體用魚類成熟的卵細(xì)胞。一般可采用人工催產(chǎn)的方法得到。卵子在接受供體核前，先要被激活以獲得發(fā)育能力。魚

16、卵擠入水中即被激活。汗閻臟柒傅欲吐淹謾兄缺截它銻壕吼蹄尹持狡最等炭緞樞拇遂冤展愈煮劉水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植二、魚類核移植方法1.核供體細(xì)胞的制備汗閻臟柒傅欲吐淹謾兄缺兩者在發(fā)育時(shí)間上要配合好，要求受體成熟卵剛產(chǎn)出時(shí)，供體受精卵正好發(fā)育至囊胚期，否則無(wú)法進(jìn)行核移植。供體與受體配合的辦法：可以用超低溫保存供體囊胚細(xì)胞；用溫度控制供體受精卵的發(fā)育速度。22證梗民虧飼擎饞用寫白膝餓詳鱉伺聯(lián)煉邏伯絆毀藕覆保懇佃蔭傣伊廣姓辜水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植兩者在發(fā)育時(shí)間上要配合好，要求受體成熟卵剛產(chǎn)出

17、時(shí)，供體受精卵受精后已發(fā)育到高囊胚或低囊胚的魚卵去膜后，置于底部涂有瓊脂，并盛有Holtfreter氏液的培育皿中，置于解剖顯微鏡下，用玻璃針發(fā)圈切下位于動(dòng)物性極的囊胚細(xì)胞團(tuán)，這些細(xì)胞在23分鐘內(nèi)能分散成游離細(xì)胞。如果細(xì)胞暫時(shí)分不開，可用一支細(xì)吸管吸水后輕輕沖擊它們，以幫助細(xì)胞分離。郝氏液的配方NaCl0.35g KCl0.005g CaCl2 0.01g NaHCO30.02g 雙蒸水 100mlpH7.01.供體細(xì)胞的準(zhǔn)備治堿鏈晦凡懷孽速廷憐貫怪翟襄越板痙兼喲潛瓜漆契傈受朱穿不烘縮勒汪水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植受精后已發(fā)育到高囊胚或低囊

18、胚的魚卵去膜后，置于底部涂有瓊脂，移核前，魚卵需先去膜。最常用的方法是用磨尖的不銹鋼鑷子在解剖鏡下剝開卵膜，游離出卵子。剝膜應(yīng)于排卵后23分鐘，在盛有消毒水的培育皿中進(jìn)行。剝粘性卵時(shí)，一般只需一手持鑷，用鑷尖夾住卵膜的一處，迅速把膜撕裂，裂口越大越好；剝浮性卵時(shí)，卵膜吸水后膨脹，卵周隙很大，所以可用雙手持鑷，同時(shí)夾住卵膜上的一處，迅速把卵膜向外撕裂。也可用Holtfreter氏溶液配 制的0.250.5%胰蛋白酶液 軟化卵膜，并在換液過(guò)程中 輔于輕微的搖動(dòng)，這樣可使 卵子從中脫出。2.受體細(xì)胞的制備氛壓曲陀梁棗從岸殿不匠裙罰鉚泥梧吾謾伯褲隕攫毒朵吞嗚盟琵兆倉(cāng)侖拌水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合

19、與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植移核前，魚卵需先去膜。最常用的方法是用磨尖的不銹鋼鑷子在解剖用極細(xì)的玻璃微針挑去核。 也有人認(rèn)為，受體卵可不去核，單倍體核會(huì)在移核手術(shù)后的發(fā)育過(guò)程被排斥掉。姆濁炳二撩況驗(yàn)丑詣捆員方敵餐差菇蕾進(jìn)兼舒昏東曹蛋貿(mào)蹄氟牙冊(cè)輝這遮水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植用極細(xì)的玻璃微針挑去核。姆濁炳二撩況驗(yàn)丑詣捆員方敵餐差菇蕾進(jìn) 將分離的的囊胚細(xì)胞立即用吸管移至盛有去核卵的培育皿中內(nèi)備用。移核時(shí)，把盛有去核卵和分離細(xì)胞的培養(yǎng)皿置于解剖顯微鏡下，用發(fā)圈將它們撥到視野內(nèi)，然后將操縱臺(tái)移近解剖顯微鏡的一側(cè)，調(diào)節(jié)移動(dòng)上的位移

20、旋鈕和微型吸管的角度，使之對(duì)準(zhǔn)分離的囊胚細(xì)胞，輕輕向后旋動(dòng)注射器上的微分筒，該細(xì)胞隨培養(yǎng)液被吸入管內(nèi)破裂，但細(xì)胞質(zhì)不能分散，應(yīng)仍緊包圍著其中的細(xì)胞核，否則細(xì)胞核直接與液體接觸會(huì)受損傷。細(xì)胞被吸入管內(nèi)的位置，以剛進(jìn)行管口一小段距離為宜，以免將它注入卵時(shí)帶入過(guò)多的培養(yǎng)液。 3.移核膽梅漣偏侈委皚感覺最匆賜巍臆連胸延座吊炭少扔豐鍵碼罰苔內(nèi)鄭檬圾它水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植 將分離的的囊胚細(xì)胞立即用吸管移至盛有去核卵的培育皿中內(nèi)Removal of the nucleus surrounded by a small amount of ooplas

21、m from a mouse germinal vesicle oocyte.Takeuchi T et al. Hum. Reprod. 1999;14:1312-1317 European Society of Human Reproduction and Embryology巡轎車舅忿剮宰滬縮遁針娛甭爆闌扁攢塔絹臃鈴姚玄棠蛻推韋飽莢伶販瀕水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植Removal of the nucleus surrounOocyte in the process of nuclear transfer28 然后用發(fā)圈撥動(dòng)去核卵，使胚

22、盤朝上，再把已吸有細(xì)胞核的吸管對(duì)準(zhǔn)此胚盤的近中央處剌入，并把細(xì)胞核（連同核外微量細(xì)胞質(zhì)一起）注入胚盤內(nèi)。仍嗆蛹蓑鎊復(fù)枕證獸魁跑陣禽隧慨渤塌涼朗檬腕狂揚(yáng)聰喬騁姚君茹史潤(rùn)皿水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植Oocyte in the process of nucleA grafted oocyte (couplet of a karyoplast and cytoplast) aligned between two microelectrodes.Takeuchi T et al. Hum. Reprod. 1999;14:1312-1317 Euro

23、pean Society of Human Reproduction and Embryology隱凝鋸傻耳恨恭辮懦耕慘拒撬攝喂佯啃纂江呆象覺秀馱樹糖室鋅審虧讒邁水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植A grafted oocyte (couplet of a雌烘炒療忱繁端氧泰別湃夫訴匪統(tǒng)瘍勞掀窿濾每伎捷凍參伏淤鋸概睬褒審水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植雌烘炒療忱繁端氧泰別湃夫訴匪統(tǒng)瘍勞掀窿濾每伎捷凍參伏淤鋸概睬核移植操作系統(tǒng)目吾嗜洛茸鏡打扭摸抗榜組穿伐咋列適孝游袍蓖澆弓橇堯裕橋愚靳親蠱現(xiàn)水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué)

24、第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植核移植操作系統(tǒng)目吾嗜洛茸鏡打扭摸抗榜組穿伐咋列適孝游袍蓖澆弓 魚類核移植雜種細(xì)胞由于卵外膠膜被破壞，需在等滲的Holtfreter液中培養(yǎng)一段時(shí)間，然后逐漸轉(zhuǎn)入低滲溶液，早期胚胎發(fā)育過(guò)后可入曝氣水中培養(yǎng)。4.核質(zhì)雜種細(xì)胞的培養(yǎng)雕胚慚盯麻掛泥泣滅輻等約漂豎贈(zèng)寇歲杜區(qū)渙陰旗讀掂舉襯葛鈴展傣殉囪水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植 魚類核移植雜種細(xì)胞由于卵外膠膜被破壞，需在等滲的H三、細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用1.培育新品種獲得核質(zhì)雜種2.沖破遠(yuǎn)緣雜交難以進(jìn)行和雜交后代不育的屏障3.保持并復(fù)制優(yōu)良個(gè)

25、體的基因型4.產(chǎn)生雄核純合二倍體5.基礎(chǔ)研究摳彥牟空起哺耀蕩剝墻堯鯉救驢涯棉膝琳娜當(dāng)贛心媳翼掉羽軟拭服驚艇統(tǒng)水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植三、細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用1.培育新品種獲得核質(zhì)雜種摳彥牟1.培育新品種獲得核質(zhì)雜種 1980年，中科院動(dòng)物研究所細(xì)胞遺傳研究組的鯉鯽移核魚，表現(xiàn)出部分父母的性狀。在生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)、蛋白質(zhì)含量上超過(guò)雙親，表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)。 1981年，童第周將培養(yǎng)30多天的成熟銀鯽的腎細(xì)胞核移入去核卵中，得到1尾性成熟的銀鯽，時(shí)稱“試管魚”。這是世界第一例體細(xì)胞核移植克隆的脊椎動(dòng)物。餃馬酥特亞塵筏脖棲幅冪丙喀墾飽廉雄泵苔嫡肪俺塘懂粘

26、弄誼題拘淋凡烹水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植1.培育新品種獲得核質(zhì)雜種 1980年，中科院動(dòng)物 對(duì)荷包紅鯉核與鯽細(xì)胞質(zhì)雜交的移核魚子一代、子二代、子三代生長(zhǎng)趨勢(shì)的觀察，以及對(duì)子三代的生產(chǎn)性能對(duì)比試驗(yàn)證明， 子三代比作為供體核的荷包紅鯉生長(zhǎng)速度快14.74-22.47，養(yǎng)殖產(chǎn)量高22，肌肉蛋白高3.78，含脂量低5.88。當(dāng)年魚苗即能養(yǎng)到商品規(guī)格，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益和生產(chǎn)推廣價(jià)值。助淖扳攣能偉紳工臃丘牧海岳壯尚峻洗硅沿?fù)v挺欠罷慘浩往柔慧宋肅坦隱水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植 對(duì)荷包紅鯉核與鯽細(xì)胞質(zhì)

27、雜交的移核魚子一代、子二代、子穎鯉 穎鯉是采用細(xì)胞工程技術(shù)與常規(guī)雜交技術(shù)的有機(jī)結(jié)合新的綜合育種方法而獲得的育種新秀，80年代培育而成的。 該法是先將荷包紅鯉核移入鯽去核卵，獲得鯉鯽移核魚，以鯉鯽移核魚第二代為父本，黑龍江的散鱗鏡鯉為母本雜交，其雜交種即是穎鯉。鴻渴任方戳此停傲惶斬紊咯再擦運(yùn)磐綱追囤蚤飛押丘愚美扛價(jià)癸拷摹禮窟水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植穎鯉 穎鯉是采用細(xì)胞工程技術(shù)與常規(guī)雜交技術(shù)的有機(jī)結(jié)合新 穎鯉具有生長(zhǎng)快、含肉率高、肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美、抗寒力強(qiáng)、容易起捕等優(yōu)良性狀。與其他雜交鯉相比，生長(zhǎng)速度快30以上，當(dāng)年可達(dá)1-2公斤(長(zhǎng)江以

28、南地區(qū))。 當(dāng)年穎鯉個(gè)體增重比父本快67，比母本快27.1，體內(nèi)蛋白質(zhì)含量比雙親高1-1.4，可見穎鯉具有較強(qiáng)的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)和營(yíng)養(yǎng)性能。休鞏叉糞瘧崩謙抹腿抑被蹲井因櫥玖卑饅清孺跺坍酋夠纖弧鉆扔眠霄揖芹水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植 穎鯉具有生長(zhǎng)快、含肉率高、肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美、抗寒力強(qiáng)2.沖破遠(yuǎn)緣雜交難以進(jìn)行和雜交后代不育的屏障 雜交是培育新品種的方法之一，有些雜交在自然界是無(wú)法直接進(jìn)行的。 比如鳑鮍魚金魚在自然條件或人工受精條件下均無(wú)法進(jìn)行雜交，可通過(guò)核移植卻可以得到0.5%左右的幼魚。雄鰟鮍準(zhǔn)備排出精子嗅簧勺摸蝎攬脾資載恥陜鏡坯流肘茵膽減褥紗只敷瀾治司墜郭資建渝嫡爆水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植水產(chǎn)動(dòng)物育種學(xué) 第七章 細(xì)胞融合與核移植2.沖破遠(yuǎn)緣雜交難以進(jìn)行和雜交后代不育的屏障 雜交是培育3.保持并復(fù)制優(yōu)良個(gè)體的基因型優(yōu)良個(gè)體的基因型保持很難借助細(xì)胞核移植技術(shù)可以將這種優(yōu)良的基因型保持下去（相當(dāng)于無(wú)性繁殖）These