《形態(tài)學(xué)綜合實驗》課程教學(xué)大綱

1、形態(tài)學(xué)綜合實驗實驗教學(xué)大綱課程代碼：CLMD3027課程名稱：形態(tài)學(xué)綜合實驗 英文名稱：Synthetic Experiment of Morphology實驗室名稱：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教學(xué)實驗中心（省級）形態(tài)學(xué)實驗室課程學(xué)時：54實驗學(xué)時：54一、本課程實驗教學(xué)目的與要求開設(shè)醫(yī)學(xué)形態(tài)學(xué)綜合實驗課程，著重培養(yǎng)醫(yī)學(xué)生醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)知識系統(tǒng)整合能力及應(yīng)用于科研實踐的能力，為將來開展專業(yè)研究工作打下基礎(chǔ)。本實驗采用小鼠為研究對象，以制作血吸蟲病和H22小鼠肝癌細胞腫瘤動物模型為主干線，設(shè)血吸蟲病動物模型組、小鼠肝癌細胞腫瘤動物模型組和正常對照組。要求學(xué)生在綜合實驗中掌握感染性疾病和腫瘤動物模型制作；H22小鼠肝癌細

2、胞細胞分離、培養(yǎng)；正常對照組動物及血吸蟲病和小鼠肝癌細胞腫瘤實驗動物模型病理解剖、取材、包埋、切片、染色和分析；掌握ELISA檢測血吸蟲病動物模型血清抗體；掌握腫瘤的免疫組織化學(xué)法鑒定及其注意事項；掌握血液標本中常見病原菌的檢驗程序及檢驗方法；掌握免疫熒光技術(shù)，能夠正確使用熒光顯微鏡及對其結(jié)果的進行識別；掌握PCR檢測基因的技術(shù)。綜合分析實驗結(jié)果，并寫出綜合性實驗報告。二、主要儀器設(shè)備及現(xiàn)有臺套數(shù)1、捷達互動顯微系統(tǒng)軟件 1套/每人 2、教師用計算機 清華同方 超越E380 1臺/每室3、學(xué)生用計算機 清華同方 超越E200 1臺/每人4、數(shù)碼顯微鏡 CX21 1臺/每室5、數(shù)碼顯微鏡 CX3

3、1 1臺/每人6、倒置顯微鏡2臺7、熒光顯微鏡1臺8、石蠟切片機4臺9、冰凍切片機2臺10、可調(diào)移液器10支 11、氣泵1臺12、真空泵 1臺13、酶標儀 1臺14、流式細胞儀 1臺15、CO2培養(yǎng)箱 2臺16、冷凍離心機 4臺17、醫(yī)用超凈臺 12套18、恒溫水浴箱 4臺19、PCR檢測儀 4臺20、-20冰箱 2臺三、實驗課程內(nèi)容和學(xué)時分配序號實驗項目名稱目的、要求實驗內(nèi)容學(xué)時分配實驗類型每組人數(shù)必開選開1血吸蟲病動物模型制備掌握釘螺逸出血吸蟲尾蚴條件,挑取感染性尾蚴,鏡下計數(shù)，固定家兔,接種尾蚴。1、逸尾蚴并計數(shù)2、計數(shù)尾蚴接種家兔3、檢測模型血吸蟲卵3創(chuàng)新性1必開2血吸蟲病的病原學(xué)及免

4、疫學(xué)檢測掌握采血,分離血清;進行環(huán)卵沉淀試驗;固相免疫酶染、免疫熒光檢測血吸蟲肝、腸、肺、腦蟲卵肉芽腫及其蟲卵周圍的抗原復(fù)合物分布，酶標檢測抗體滴度。1、采血制備血清2、用環(huán)卵沉淀試驗檢測血吸蟲病模型抗體3、用免疫熒光法和酶標法檢測血吸蟲卵肉芽腫周圍免疫復(fù)合物及血吸蟲抗體3創(chuàng)新性1必開3血吸蟲病淋巴細胞分離純化和培養(yǎng)掌握從外周免疫器官中獲取不同淋巴細胞的取材部位、制備方法及關(guān)鍵操作。1、分離純化出T淋巴細胞，2、采用免疫熒光及流式細胞儀技術(shù)對T淋巴細胞表面的特異性分子進行鑒定。3、將鑒定后的細胞加入不同的刺激劑如PHA或T細胞活化相關(guān)的抗體如激發(fā)型的CD3和CD28等培養(yǎng)。觀察T細胞的活化與增

5、殖狀況。3創(chuàng)新性1必開4淋巴細胞的免疫熒光分析掌握細胞膜型分子的分析方法及原理，能夠正確使用熒光顯微鏡及對實驗結(jié)果的分析。以T淋巴細胞或B淋巴細胞或轉(zhuǎn)基因細胞為靶細胞，采用免疫熒光技術(shù)分析細胞表面特定分子表達的陽性率及表達的密度。3創(chuàng)新性1必開5血涂片的制作掌握血涂片的制作方法；掌握血液的組成、各種血細胞與血小板的形態(tài)特點。熟悉Wright和Giemsa染色過程。1、觀看教學(xué)光盤：血液；2、自己制作并觀察血涂片3綜合性設(shè)計性1必開6正常動物的組織切片制作掌握石蠟切片HE染色標本制作方法；熟悉組織學(xué)與胚胎學(xué)的其他研究方法；了解組織學(xué)與胚胎學(xué)研究的最新進展。1、收集正常對照組實驗動物，處死動物及取

6、材；2、組織塊經(jīng)固定、脫水、包埋、切片、染色等步驟，制備組織切片。3、在互動實驗室觀看切片，采集圖片，遞交電子版實驗報告。9*綜合性設(shè)計性1必開7H22小鼠肝癌細胞的分離與培養(yǎng)掌握H22小鼠肝癌細胞的分離與培養(yǎng)方法，了解小鼠解剖技術(shù)。1、H22小鼠肝癌細胞的分離與培養(yǎng)2、細胞的換液和傳代3創(chuàng)新性1必開8H22小鼠肝癌實體瘤動物模型制備掌握動物皮下接種方法；掌握實驗動物解剖；掌握實驗動物腫瘤的觀察及腫瘤的取材；了解實驗動物腫瘤的形態(tài)特點。1、H22小鼠肝癌細胞懸液制備2、小鼠皮下注射3、腫瘤大小觀察3創(chuàng)新性1必開9實驗動物腫瘤切片的制備掌握腫瘤的一般形態(tài)、生長方式、擴散及轉(zhuǎn)移的途徑。1、實驗動物

7、腫瘤的觀察及腫瘤的取材2、實驗動物腫瘤的形態(tài)特點。3、腫瘤的一般形態(tài)、生長方式、擴散及轉(zhuǎn)移途徑；4、常規(guī)HE染色方法。6*創(chuàng)新性1必開10腫瘤的免疫組織化學(xué)法鑒定及其結(jié)果判斷了解腫瘤研究的常見方法；掌握免疫組織化學(xué)檢查的方法；掌握免疫組織化學(xué)陽性的判斷方法及其意義；掌握免疫組織化學(xué)方法在腫瘤研究中的重要性。1、免疫組織化學(xué)的實驗方法及其注意事項，主要檢測與肝細胞癌相關(guān)抗原AFP、與肝細胞增殖相關(guān)的基因PCNA、與肝細胞癌凋亡相關(guān)因子Fas的在H22小鼠肝癌實體瘤中的表達。2、免疫組織化學(xué)染色后的結(jié)果定位判斷（胞漿、胞核以及胞膜）及其意義。5*創(chuàng)新性1必開11血吸蟲病動物模型的病變觀察（大體及切

8、片）通過對動物模型的解剖和病變觀察，掌握血吸蟲病主要病變部位及基本病變。解剖血吸蟲動物模型并觀察主要病變部位（肝、腸、肺）的主要病變，并觀察病變切片。2創(chuàng)新性1必開12H22小鼠肝癌體內(nèi)TGF-1基因檢測及分析了解細胞基因組DNA的分離與提純，掌握PCR檢測技術(shù)。1、熟悉PCR技術(shù)原理、實驗步驟。2、采用PCR技術(shù)檢測荷瘤小鼠體內(nèi)TGF-1基因表達。3、分析實驗結(jié)果。3創(chuàng)新性1必開13血液標本中常見病原菌的分離培養(yǎng)與鑒定掌握血液標本中常見病原菌的檢驗程序及檢驗方法。熟悉血液標本中常見微生物的種類。了解血液標本的采集要點及注意事項。1、血液標本采集原則及方法2、血液標本的增菌培養(yǎng)3、血培養(yǎng)陽性標

9、本的分離培養(yǎng)4、鑒定（革蘭染色鏡檢、培養(yǎng)特性、凝固酶試驗、觸酶試驗、氧化酶試驗、O/F試驗、IMViC試驗、動力試驗、脲酶試驗、甘露醇發(fā)酵試驗、Optochin敏感試驗、桿菌肽敏感試驗、新生霉素耐藥試驗、玻片凝集試驗）5、藥物敏感試驗：紙片擴散法6、鑒定結(jié)果及分析討論8*綜合性設(shè)計性1必開* 實驗時間安排在周末為9學(xué)時，其實驗有連續(xù)性，需要一定的時間，所以超過3學(xué)時四、考核方式1、實驗報告：紙質(zhì)版、電子版的實驗報告及心得體會（1）每項實驗的實驗報告（紙質(zhì)版）（2）實驗成果，即組織切片及血涂片2、考核方式（評分標準）（1）綜合實驗學(xué)習(xí)心得體會30分（2）病理學(xué)15分（3）組織學(xué)15分（4）微生物學(xué)10分（5）寄生蟲學(xué)10分（6）細胞生物學(xué)10分（7）免疫學(xué)10分五、實驗教材、參考書1、教材：醫(yī)學(xué)形態(tài)學(xué)綜合實驗（自編教材）2005年2、參考書：（1）高小聯(lián)主編免疫學(xué)雙語實驗技術(shù)指導(dǎo)科學(xué)出版社 2004年.（2）李允鶴主編寄生蟲病免疫學(xué)及免疫診斷江蘇科學(xué)出版社 1991年. （3）吳觀陵主編人體寄生蟲學(xué) 人民衛(wèi)生出版社 2005年.（4