流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座

1、流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第1頁總覽 流式細(xì)胞術(shù)基礎(chǔ)知識(shí) 流式細(xì)胞儀組成 數(shù)據(jù)采集與分析流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第2頁流式細(xì)胞技術(shù)是什么？流式細(xì)胞術(shù)在流動(dòng)狀態(tài)中檢測細(xì)胞或顆粒各項(xiàng)特征特異性強(qiáng)，靈敏度高，速度快，并能實(shí)現(xiàn)多參數(shù)分析可檢測樣本種類多樣：外周血，骨髓，細(xì)胞穿刺液，洗脫液，實(shí)體組織，培養(yǎng)細(xì)胞，微生物Flow CytometryFlow:Fluid Cyto:Cell Metry:Measurement流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第3頁流式細(xì)胞術(shù)檢測樣本0.4um40um流式

2、細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第4頁流式細(xì)胞術(shù)檢測指標(biāo)流式細(xì)胞術(shù)提供信息： - 相對(duì)細(xì)胞大小 - 相對(duì)細(xì)胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度 - 染色過細(xì)胞相對(duì)熒光強(qiáng)度流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第5頁細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞粒度DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量染色體分析細(xì)胞功效細(xì)胞表面/胞漿/核特異性抗原細(xì)胞活性細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子酶活性激素結(jié)合位點(diǎn)細(xì)胞受體細(xì)胞凋亡在上述信號(hào)基礎(chǔ)上細(xì)胞分選流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第6頁流式細(xì)胞儀組成液流系統(tǒng)：形成層流系統(tǒng)，聚焦細(xì)胞光學(xué)系統(tǒng)：產(chǎn)生和搜集光學(xué)信號(hào)電子系統(tǒng)：光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，進(jìn)行信號(hào)處理流式

3、細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第7頁Fluidics DiagramSheath Flowsheath tankSample Flowsheathinterior reservoirwasteinterior reservoirsheath filtersample injectiontube (SIT)test tubeor plateflow cellinterrogation pointbubble filterwaste tank流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第8頁液流系統(tǒng)流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第9頁光學(xué)系統(tǒng)激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)包含:-

4、 激光器- 透鏡和反射鏡，將激光引導(dǎo)到檢測區(qū)域搜集光學(xué)系統(tǒng)包含:濾光片，將產(chǎn)生光信號(hào)引導(dǎo)到對(duì)應(yīng)光學(xué)接收器流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第10頁流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第11頁流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第12頁光學(xué)系統(tǒng)流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第13頁流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第14頁光學(xué)系統(tǒng)-濾光片460 500 540460 500 540460 500 540SP 500LP 500BP500/50LongpassShortpassBandpass流式細(xì)胞儀bd-facscanto-

5、ii知識(shí)講座第15頁流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第16頁流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第17頁電子系統(tǒng)LaserLaserLaserTimeVoltageTimeVoltageTimeVoltage流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第18頁電子系統(tǒng)流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第19頁電子系統(tǒng)流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第20頁Review懸浮狀態(tài)細(xì)胞單個(gè)流過流動(dòng)室細(xì)胞被激發(fā)產(chǎn)生散射光和熒光 信號(hào)信號(hào)被采集轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)存放于電腦上液流系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)電子系統(tǒng)流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第

6、21頁回顧流式細(xì)胞儀三大組成個(gè)別？濾光片LP600代表什么意思？BP400/40呢？流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第22頁數(shù)據(jù)采集三種數(shù)據(jù)： - 前向散射光FSC - 側(cè)向散射光SSC - 各種熒光散射光FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3，F(xiàn)L4流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第23頁當(dāng)使用激光光源時(shí)，在前向方向（和激光行進(jìn)方向相同）上可用前向散射光接收通道接收到一定量散射光前向散射光強(qiáng)度是和細(xì)胞或其它檢測顆粒大小、形狀親密相關(guān)數(shù)據(jù)采集-前向散射光流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第24頁當(dāng)激光光源被使用時(shí)，側(cè)向也有一定量散射光產(chǎn)生， 能夠用90o 角側(cè)向散

7、射光檢測通道來采集側(cè)向散射光強(qiáng)度和細(xì)胞或其它檢測顆粒顆粒密度、內(nèi)部復(fù)雜程度親密相關(guān)數(shù)據(jù)采集-側(cè)向散射光流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第25頁外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖 顆粒雜質(zhì)、氣泡對(duì)檢測影響流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第26頁細(xì)胞標(biāo)識(shí)上熒光物質(zhì)后，這種熒光物質(zhì)要求特定波長激發(fā)光來激發(fā)，同時(shí)發(fā)出特定波長光熒光物質(zhì)被激發(fā)以后產(chǎn)生發(fā)射光將由特定熒光通道來接收特定檢測是經(jīng)過光學(xué)濾片和透鏡來控制數(shù)據(jù)采集-熒光信號(hào)熒光強(qiáng)度是和細(xì)胞上標(biāo)識(shí)上熒光染料量正相關(guān)流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第27頁數(shù)據(jù)采集流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座

8、第28頁電壓信號(hào)放大方式：log、lin信號(hào)類型：A,W,H電壓調(diào)整:依據(jù)陰性對(duì)照管來調(diào)整流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第29頁閾值能夠以任意參數(shù)及多個(gè)參數(shù)組合作為閾值大多數(shù)樣本都能夠設(shè)定FSC/SSC閾值以下信號(hào)不存放依據(jù)陰性對(duì)照管來調(diào)整目標(biāo)是將不需要雜質(zhì)信號(hào)，噪音信號(hào)，無用細(xì)胞信號(hào)等扣除，使搜集到都是有用信號(hào)流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第30頁流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第31頁流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第32頁賠償賠償方式：任意兩個(gè)通道之間，能夠采取手動(dòng)或自動(dòng)賠償。賠償調(diào)整:依據(jù)單染對(duì)照管來調(diào)整流式細(xì)胞儀bd

9、-facscanto-ii知識(shí)講座第33頁流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第34頁流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第35頁流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第36頁流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第37頁流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第38頁1.) Compensation - Too Little; Too Much流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第39頁2.) Basic Principles of Compensation - % Compensation is independent of

10、fluorescence intensity流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第40頁3.) Compensation- Too Dim, Too Bright Compensation ControlsSmall errors in compensation of a dim control (A) can result in large compensation errors with bright reagents (B & C).流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第41頁數(shù)據(jù)分析 流式數(shù)據(jù)直方圖散點(diǎn)圖等高線圖密度圖三維圖統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第42頁直方圖直方圖(Distribution Histogram)橫坐標(biāo)代表熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度，單位是對(duì)數(shù)，能夠是線性或?qū)?shù)坐標(biāo)?？v坐標(biāo)普通是細(xì)胞數(shù)。流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第43頁散點(diǎn)圖散點(diǎn)圖(Dot Plot)X坐標(biāo)為該細(xì)胞一參數(shù)相對(duì)含量，Y坐標(biāo)為該細(xì)胞另一參數(shù)含量，能夠?qū)⒓?xì)胞亞群分開。流式細(xì)胞儀bd-facscanto-ii知識(shí)講座第44頁等高線圖和密度圖