欖香烯聯(lián)合生物大分子合成抑制劑對(duì)HcaF肝癌的作用

1、欖香烯團(tuán)結(jié)生物大分子合成按捺劑對(duì)Hca-F肝癌的作用作者:郭連英，陳駿，沈潔，邢嶸1，施廣霞，錢(qián)振超【摘要】目的本實(shí)行接納欖香烯與生物大分子合成按捺劑團(tuán)結(jié)處置懲罰小鼠肝癌細(xì)胞Ha-F，不雅察腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡和形態(tài)學(xué)的變革，探究按捺/滋擾腫瘤細(xì)胞的DNA、RNA或卵白質(zhì)合成對(duì)欖香烯抗瘤作用的影響，以期為斷定欖香烯作用的大概靶點(diǎn)提供線(xiàn)索與根據(jù)。要領(lǐng)將Ha-F肝癌細(xì)胞用欖香烯50g/l、吡柔比星THP10l/l、單獨(dú)和復(fù)合處置懲罰，設(shè)單獨(dú)瘤細(xì)胞不處置懲罰為陰性比擬。Ha-F細(xì)胞濃度均為1106/l，每個(gè)不雅察時(shí)間點(diǎn)均設(shè)3支復(fù)管，用臺(tái)盼藍(lán)拒染法盤(pán)算細(xì)胞存活率，在透射電鏡下不雅察欖香烯與THP團(tuán)結(jié)處置

2、懲罰對(duì)腫瘤細(xì)胞超微布局的影響，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期。效果欖香烯團(tuán)結(jié)吡柔比星處置懲罰Ha-F比單獨(dú)利用兩種藥物的抑瘤率都高。結(jié)論本實(shí)行所用生物大分子合成按捺劑不克不及阻斷欖香烯的抗瘤作用，提示欖香烯抗腫瘤作用對(duì)新的卵白質(zhì)表達(dá)依靠性較低。團(tuán)結(jié)欖香烯處置懲罰后瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變革，提示欖香烯大概作用于腫瘤細(xì)胞膜或細(xì)胞中的某些卵白質(zhì)如酶等而直接殺傷腫瘤靶細(xì)胞，使對(duì)欖香烯抗瘤作用靶點(diǎn)的熟悉又進(jìn)了一步。本實(shí)行效果表白欖香烯和THP適用可使抗癌作用加強(qiáng)，這對(duì)欖香烯團(tuán)結(jié)其他藥物治療腫瘤大概有必然參考意義?！娟P(guān)鍵詞】欖香烯；按捺劑；肝細(xì)胞癌Theeffetfeleenebinedithinhibit

3、rsfarleularsynthesisfrhepatianer【Abstrat】bjetiveInthisexperientfHa-Fells(aurinehepatiellarina)eretreateditheleenebinedithinhibitrsfarleularsynthesis，thEirprliferatin，survival，ellyle，apptsisandrphlgyerebserved.TlarifytheinfluenesfinhibitinfDNA，RNAandprteinntheantitureffetsfeleeneandtfindthepssibletar

4、getsitefeleene.ethdsTheHa-Fellseresingledringledtreateditheleene50g/l，alnerbinedithTHP10l/l，theHa-Fells(ithuttreatent)ereusedtbethenegativepare.TheendnsistenefHa-Fellsis1106/l，threetublesineverytiepint.Talulatetheprprtinfsurvivalithtrypanblue，andbservetheipatntheultrastruturefHa-Fellstreateditheleen

5、eandTHPintransissineletrnirspe，andexainetheapptsisandellylesinflyteter.ResultsTheinhibitinratefprliferatinfHa-FtreateditheleeneandTHPashigherthanthatfHa-Ftreateditheleenenly.nlusinTheseresultsshedthattheantitureffetsfeleeneuldntablishedbybinedtreatentrpretreatentiththeinhibitrsfDNA，RNA，prteinsynthes

6、is，hihsuggestthattheantitureffetsfeleeneaybeindependentntheirsynthesis.binedusagefeleeneithTHPtanertherapyisadvisable.【Keyrds】eleene；inhibitr；hepatellulararina欖香烯(eleene)是從中藥溫莪術(shù)經(jīng)斷定為我國(guó)特有新種定名為溫郁金，uruaenyujin揮發(fā)油中提取的抗癌有用身分，它是一種僅含碳?xì)?15H24)，分子量只有204的小分子、脂溶性的倍半萜類(lèi)化合物，此類(lèi)物質(zhì)有抗癌活性屬我國(guó)首報(bào)1。動(dòng)物實(shí)行與臨床應(yīng)用均表白欖香烯的抗癌作用確切，并

7、且不良反響很低。我們已往的研究表白欖香烯處置懲罰除可按捺腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡外，還能加強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫原性，欖香烯處置懲罰能加強(qiáng)腫瘤細(xì)胞膜HSP70的表達(dá)，用表達(dá)譜基因芯片技能的研究表白欖香烯處置懲罰引起基因表達(dá)譜的變革。已往對(duì)欖香烯抗癌作用機(jī)制的研究?jī)H限于欖香烯對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、分化和凋亡、免疫原性等的影響，關(guān)于它的作用靶點(diǎn)及其信號(hào)傳導(dǎo)通路迄今研究很少。本實(shí)行在上述研究的底子上，接納欖香烯與生物大分子合成按捺劑團(tuán)結(jié)處置懲罰小鼠肝癌細(xì)胞Ha-F，不雅察腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡和形態(tài)學(xué)的變革，探究按捺或滋擾腫瘤細(xì)胞的DNA、RNA或卵白質(zhì)合成對(duì)欖香烯抗瘤作用的影響，以期為斷定欖香烯作用的大概靶點(diǎn)提供

8、線(xiàn)索與根據(jù)。1質(zhì)料與要領(lǐng)11動(dòng)物Balb/系小鼠，引自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京藥物研究所，由本室自行生殖提供。12瘤株小鼠腹水型肝癌H22的高淋巴道轉(zhuǎn)移亞系Ha-F2，由本校病理學(xué)教研室凌茂英傳授贈(zèng)予，本室通例傳代、保種。1.3重要藥品和試劑1%欖香烯注射液(eleene，大連市醫(yī)藥科學(xué)研究所)。吡柔比星(Pirarubiin，THP，深圳萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)消費(fèi))。RPI1640造就基GIB，USA。1.4Ha-F細(xì)胞懸液的制備將傳代保種的Ha-F腹水型肝癌細(xì)胞通例接種于小鼠腹腔，0.2l/只，網(wǎng)絡(luò)第78天的腹水腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)最茂盛時(shí)期，殞命細(xì)胞和紅細(xì)胞含量較少，HS液排除紅細(xì)胞，PBS洗3次，計(jì)活細(xì)胞數(shù)，用含

9、20%小牛血清RPI1640造就液調(diào)細(xì)胞數(shù)至所需濃度。1.5Ha-F肝癌細(xì)胞的處置懲罰將Ha-F肝癌細(xì)胞用欖香烯50g/l、吡柔比星10l/l按本室通例要領(lǐng)單獨(dú)或復(fù)合處置懲罰，設(shè)單獨(dú)瘤細(xì)胞不處置懲罰比擬。Ha-F細(xì)胞濃度均為1106/l，每個(gè)不雅察時(shí)間點(diǎn)均設(shè)3支復(fù)管，參加相應(yīng)的藥品，以臺(tái)盼藍(lán)拒染法于差異時(shí)間計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，盤(pán)算存活率。1.6單純欖香烯處置懲罰和欖香烯團(tuán)結(jié)THP處置懲罰對(duì)Ha-F增殖的影響用TT法測(cè)其D值。1.7欖香烯團(tuán)結(jié)THP處置懲罰對(duì)瘤細(xì)胞超微布局的影響3Ha-F細(xì)胞用欖香烯、THP單一或復(fù)合處置懲罰，細(xì)胞濃度和處置懲罰要領(lǐng)同前，處置懲罰時(shí)間為1h，收細(xì)胞，用PBS洗3次，以2

10、.5%戊二醛結(jié)實(shí)，通例包埋制片，鈾鉛雙染色，透射電鏡下不雅察攝片。1.8細(xì)胞凋亡的檢測(cè)和細(xì)胞周期的測(cè)定細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)同前，用PBS洗3次，參加PI染色液染色30in避光、室溫。上機(jī)檢測(cè)，ellquest軟件低速獲齲用dfit2.0軟件闡發(fā)。2實(shí)行效果2.1欖香烯團(tuán)結(jié)THP處置懲罰對(duì)Ha-F存活的影響單純用欖香烯處置懲罰，Ha-F的存活率就顯著低落，在30in1h的時(shí)間內(nèi)，細(xì)胞殞命率隨著藥物濃度增長(zhǎng)而增長(zhǎng)表1，單用THP處置懲罰，也可導(dǎo)致Ha-F細(xì)胞殞命、藍(lán)染，其細(xì)胞殞命率也隨著藥物濃度增長(zhǎng)而增長(zhǎng)，欖香烯團(tuán)結(jié)THP處置懲罰，腫瘤細(xì)胞殞命率可達(dá)100%。表1欖香烯單獨(dú)或團(tuán)結(jié)THP處置懲罰對(duì)Ha-F細(xì)胞存

11、活的影2.2欖香烯和THP團(tuán)結(jié)處置懲罰對(duì)Ha-F細(xì)胞周期與凋亡的影響實(shí)行效果表白欖香烯與THP團(tuán)結(jié)處置懲罰對(duì)Ha-F細(xì)胞周期變革的影響及凋亡細(xì)胞百分率變革與單用THP比擬也無(wú)顯著區(qū)別，欖香烯處置懲罰與不處置懲罰Ha-F比擬組細(xì)胞各時(shí)相百分率及凋亡細(xì)胞百分率變革無(wú)顯著區(qū)別見(jiàn)表2和圖1。表2欖香烯團(tuán)結(jié)THP處置懲罰對(duì)Ha-F細(xì)胞周期與凋亡的影響2.3欖香烯團(tuán)結(jié)THP處置懲罰對(duì)Ha-F細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響見(jiàn)圖2。圖2可示：當(dāng)欖香烯與THP團(tuán)結(jié)處置懲罰的腫瘤細(xì)胞形態(tài)產(chǎn)生了顯著的變革，細(xì)胞核染色質(zhì)濃縮，核縮小，細(xì)胞腫脹破碎，細(xì)胞完備性受到顯著粉碎，而單純用THP處置懲罰的30in內(nèi)大多數(shù)沒(méi)有顯著改變，受損細(xì)胞形態(tài)學(xué)變革不典范，偶可見(jiàn)到凋亡、壞死的細(xì)