限食對老齡大鼠抗衰老效應(yīng)的影響

1、限食對老齡大鼠抗衰老效應(yīng)的影響【關(guān)鍵詞】膳食限制；衰老；肝細(xì)胞凋亡；生物學(xué)效應(yīng)膳食限制dietaryrestritin，DR，即在滿足機(jī)體對各種營養(yǎng)素需要量的前提下，適當(dāng)限制食物的攝入，能明顯延緩衰老的速度，延長實(shí)驗(yàn)動物的壽命。許多實(shí)驗(yàn)不斷證實(shí)，嚙齒類動物從幼年開場，每天限制正常攝食量的10%30%，不但不會引起營養(yǎng)不良，還可以比正常攝食組延長10%30%的平均和最高壽命。從成年開場限食，可以延長小鼠的最高壽限10%20%1。對于老齡期動物的限食研究卻較少有報道。本研究采用老齡期大鼠開場限食，討論其機(jī)體內(nèi)假設(shè)干生物學(xué)效應(yīng)的改變及可能機(jī)制，為抗衰老的研究提供新的實(shí)驗(yàn)根據(jù)。1材料與方法1.1分組本

2、實(shí)驗(yàn)采用清潔級SD大鼠，1011月齡，由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。將68只大鼠隨機(jī)分為三組。對照組，自由攝食，20只，雌雄各半；限食20組，食量攝入為對照組的80%，24只，雌雄各半；限食40組，食量攝入為對照組的60%，24只，雌雄各半；單籠飼養(yǎng)6個月，至1617月齡。動物飼養(yǎng)6個月后經(jīng)股動脈放血處死。低溫別離血清，-20保存，大鼠處死后在75%乙醇中浸泡35in,無菌環(huán)境中取出腦組織、肝臟組織等，稱重后迅速置于液氮中，后移入80冰箱保存?zhèn)溆谩?.2動物飼料本實(shí)驗(yàn)以食物配方飼料作為動物根底飼料。每天稱量對照組動物實(shí)際飼料攝入克數(shù)，并以此計(jì)算第2天實(shí)驗(yàn)組動物的飼料用量，調(diào)整實(shí)驗(yàn)組飼料中維生素和

3、無機(jī)鹽的百分含量，保證各組動物除食量攝入差異外，無機(jī)鹽和維生素等微量營養(yǎng)素每天攝入的克數(shù)均一致。見表1。表1大鼠食物飼料配方(略)1.3試劑1.4指標(biāo)測定1.5細(xì)胞凋亡檢測取適量冷凍的肝組織，用T包埋，制成6厚的冰凍切片，丙酮固定20in,凋亡檢測采用末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法TUNEL。結(jié)果判斷：在光學(xué)顯微鏡400倍視野下，每張切片隨機(jī)選擇5個陽性視野，每個視野計(jì)數(shù)200個肝組織細(xì)胞中的陽性細(xì)胞核數(shù)，以平均計(jì)算陽性細(xì)胞所占百分比，求其均數(shù)值作為凋亡細(xì)胞陽性指數(shù)(AI。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS13.0軟件包建立數(shù)據(jù)庫，并進(jìn)展統(tǒng)計(jì)分析。所有資料均先進(jìn)展正態(tài)性檢驗(yàn)。多

4、組間均數(shù)比擬采用單因素方差分析；各組間的兩兩比擬采用LSD法。2結(jié)果2.1動物的一般情況實(shí)驗(yàn)組大鼠在初期煩躁不安，毛蓬亂少光澤，隨后逐漸正常。實(shí)驗(yàn)組大鼠明顯活潑好動，反響靈敏，對照組大鼠那么顯得遲鈍少動，反響緩慢，缺少靈敏性。在實(shí)驗(yàn)期間，實(shí)驗(yàn)組大鼠由于限食，與初始體重比擬，終末體重有不同程度的下降P0.05，而對照組大鼠體重明顯增加，因此對照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠最終體重有顯著差異P0.01。見表2。表2各組大鼠初始和終末期體重變化比擬(略)2.2不同組大鼠血清SD和DA程度變化雌性大鼠各組SD活性比擬顯示，限食40和限食20組SD活性顯著高于對照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05；各組血清DA含量比擬顯示

5、，限食40組和限食20組均顯著低于對照組(P0.01，P0.05)，且限食20和限食40組間血清SD活性和DA含量的差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0.01。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.雄性大鼠各組SD活性比擬顯示，限食40組SD活性顯著高于對照組P0.01，限食20組SD活性也明顯高于對照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0.05，限食20%和限食40間血清SD活性的差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；各組雄性大鼠血清DA含量比擬顯示，限食40組和限食20組均顯著低于對照組(P0.01)。見表3。表3各組大鼠血清SD和DA含量變化比擬(略)2.4肝細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化光學(xué)顯微鏡下可見正常肝細(xì)胞核呈藍(lán)色，凋亡細(xì)胞的染色特征為，陽性細(xì)胞

6、細(xì)胞核染色呈棕褐色，細(xì)胞變小發(fā)生皺縮，核質(zhì)濃縮，凋亡小體形成。老年對照組可見TUNEL陽性的肝細(xì)胞，而限食組凋亡細(xì)胞較少。見圖1。3討論營養(yǎng)物質(zhì)缺乏、營養(yǎng)過剩和營養(yǎng)素之間的比例失調(diào)，都可能加速機(jī)體的衰老2。膳食為機(jī)體維持生命活動所必需，但能量的攝入應(yīng)限制在一定的程度上，對于老年個體也應(yīng)如此。隨著增齡，抗氧化酶的活性減低，機(jī)體去除自由基的才能減弱，使自由基的產(chǎn)生過多或去除障礙，機(jī)體內(nèi)氧化抗氧化的平衡狀態(tài)被打破，引起正常細(xì)胞功能的退化，是促使機(jī)體衰老的重要原因3。SD是生物體內(nèi)氧自由基去除系統(tǒng)的重要酶系，DA是自由基代謝的最終產(chǎn)物。在限食20%和40%兩種劑量效應(yīng)下，血清SD活性均明顯高于老年對照組，血清DA含量均顯著低于老年對照組。與國外Yu等4的研究結(jié)果一致，說明限食可以進(jìn)步機(jī)體內(nèi)抗氧化酶的活性，增強(qiáng)機(jī)體去除自由基的才能。目前，對于細(xì)胞凋亡和衰老的相關(guān)性研究說明，細(xì)胞凋亡通過破壞重要的不可替代的細(xì)胞對衰老起負(fù)面影響,老年肝的儲藏才能降低,肝的生物轉(zhuǎn)化才能降低,血漿白蛋白明顯減少等變化,均與老年肝組織細(xì)胞數(shù)目的減少有關(guān)9。本研究結(jié)果顯示出，老齡大鼠體內(nèi)肝細(xì)胞的凋亡增多，而限食組的大鼠肝細(xì)胞凋亡明顯減少。Higai等1