四氯化碳毒理學(xué)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1、四氯化碳毒理學(xué)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)生化系食品082200800602052黃瑞錦引言：在進(jìn)行某一種受試物毒理學(xué)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)前要先認(rèn)識(shí)和了解其有關(guān)知識(shí)。所以，要進(jìn)行四氯化碳毒理學(xué)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)先認(rèn)識(shí)和了解有關(guān)性質(zhì)。一理化性質(zhì)四氯化碳(carbontetrachloride,CCl),化學(xué)式CCl,又稱四氯甲烷44(tetrachloromethane)。是一種比水重，無色、易揮發(fā)、不易燃，易流動(dòng)的液體。具氯仿的微甜氣味，并具有一種令人愉快的氣味。相對(duì)分子量153.84，相對(duì)密度1.595g/cm3(20/4C),沸點(diǎn)76.74C，熔點(diǎn)一22.8C，蒸氣壓15.27kPa(25C),蒸氣密度5.3g/

2、L。四氯化碳的蒸氣有毒，它的麻醉性較氯仿為低，但毒性較高。吸入人體24ml就可使人死亡。四氯化碳在水中的溶解度很小，且遇濕氣及光即逐漸分解生成鹽酸。易溶于各種有機(jī)溶劑，能與醇、醚、氯仿、苯等任意混合。對(duì)于脂肪、油類及多種有機(jī)化合物為一極優(yōu)良的溶劑。四氯化碳用作滅火劑時(shí)，不能滅活潑金屬的火，因?yàn)榛顫娊饘倏梢耘c之反應(yīng)。也會(huì)在高溫下與水反應(yīng)生成有毒物質(zhì)。遇火或熾熱物可分解為二氧化碳、氯化氫、光氣和氯氣等。二污染來源四氯化碳(CCl)是較常用的有機(jī)溶劑。在工業(yè)生產(chǎn)中用作萃取劑、清洗劑、脫4脂劑、制冷劑、滅火劑和驅(qū)蟲劑等。在醫(yī)學(xué)上用作麻藥劑。在日常生活中，用作衣服的洗滌及去脂等。在生產(chǎn)和使用過程中，四氯

3、化碳可釋入空氣而污染環(huán)境。近年來，美國對(duì)供水系統(tǒng)中CCl的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，約2000萬人飲用的水源被4CCl污染。據(jù)估計(jì)美國有近400萬人在生產(chǎn)中暴露于CCl中。44三毒性作用CCl可經(jīng)消化道、呼吸道和皮膚進(jìn)入機(jī)體。吸入量的20%35%可被人及動(dòng)物4機(jī)體吸收。CCl在血液中的濃度與腦中的含量接近，脂肪組織蓄積的量為血液中4的28倍。部分CCl在肝微粒體細(xì)胞色素P450的催化作用下，通過脫鹵素和氧4化作用，解離成Cl和CCl自由基，后者能使生物膜脂質(zhì)過氧化，擾亂干細(xì)3胞脂質(zhì)代謝，引起干細(xì)胞壞死。CCl是典型的肝臟毒物，通過各種途徑進(jìn)入人體后，均可引起肝臟的嚴(yán)重?fù)p4傷如中心小葉壞死及脂肪變性。同時(shí)受

4、損的還有腎臟、肺泡膜及肺血管。腎臟及肺的損傷不及肝臟，通常發(fā)生于肝臟損害之后，因全身代謝失調(diào)而發(fā)生。吸入四氯化碳蒸氣時(shí)若飲酒、冷凍或提高空氣中的含氧量，均可加重毒性作用。另外，四氯化碳可增加心肌對(duì)腎上腺素的敏感性，引起嚴(yán)重心律失常。人對(duì)四氯化碳的個(gè)體易感性差異較大，有報(bào)道口服35ml即可中毒，29.5ml即可致死。在160200mg/m3濃度下可發(fā)生中毒。但也有在12g/m3濃度下接觸3Omin方出現(xiàn)輕度中毒。目前認(rèn)為四氯化碳無致畸和致突變作用，但具有胚胎毒性。根據(jù)IARCl972及1979年資料，四氯化碳長(zhǎng)期作用可以引起嚙齒動(dòng)物的肝癌，被列為對(duì)人類有致癌可能一類的化學(xué)物。CCl能引起皮炎，也

5、可引起濕疹及麻疹。對(duì)皮膚刺激性比苯強(qiáng)。CCl44可經(jīng)燒傷皮膚多量進(jìn)入機(jī)體。皮膚與CCl接觸30min相當(dāng)于濃度為0.063mg/L4的CCl被人體吸入3h.4動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小鼠、大鼠、豚鼠及家兔急性中毒時(shí)血液中蛋白質(zhì)含量減低、各種蛋白質(zhì)比例失調(diào)、血清多種酶(轉(zhuǎn)氨酶、醛縮酶、精氨酸酶、黃嘌吟氧化酶、谷酰胺酶、氨基移換酶等)活性增加。組織學(xué)檢查顯示，肝臟出現(xiàn)脂肪性肝硬化和腎管狀上皮退化等。這些現(xiàn)象與細(xì)胞膜滲透性或肝臟本身酶反應(yīng)過程的破壞有關(guān)。四臨床表現(xiàn)1.急性中毒急性CCl中毒的病理改變主要在肝臟，同時(shí)累及神經(jīng)系統(tǒng)和腎臟。另外也可4發(fā)生心肌炎、支氣管炎以及大腦中毒退行性病變。臨床癥狀有：潛伏期：一

6、般為13天，也有短至數(shù)分鐘者。潛伏期長(zhǎng)短與接觸劑量及侵入途徑有關(guān)。經(jīng)呼吸道或胃腸道吸收中毒的臨床表現(xiàn)類似；均可出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)麻醉及肝、腎損害癥狀。神經(jīng)系統(tǒng)癥狀：可有頭暈、頭痛、乏力、精神恍惚、步態(tài)蹣珊、短暫意識(shí)障礙或昏迷等。極高濃度吸入時(shí)，可因延髓受抑制而迅速出現(xiàn)昏迷、抽搐，甚至突然死亡。消化道癥狀：口服中毒時(shí)較明顯?？捎袗盒摹I吐、食欲減退、腹痛、腹瀉及黃疸、肝大、肝區(qū)壓痛、肝功能異常等中毒性肝病征象。嚴(yán)重者可發(fā)生暴發(fā)性肝功能衰竭。肝損害癥狀多于發(fā)病第24天出現(xiàn)。腎損害癥狀：可出現(xiàn)蛋白尿、紅細(xì)胞尿、管型尿。嚴(yán)重者出現(xiàn)少尿、無尿、氮質(zhì)血癥等急性腎功能衰竭表現(xiàn)。其他：少數(shù)患者可有心肌損害、心律

7、失常。心室顫動(dòng)及呼吸中樞麻痹多為致死原因。吸入中毒者常伴有眼及上呼吸道刺激癥狀。有時(shí)可引起肺水腫。2慢性中毒慢性接觸CCl的病變也主要在肝臟。慢性中毒的報(bào)道較為少見。長(zhǎng)期反復(fù)接4觸四氯化碳，可有頭暈、乏力、失眠、記憶力減退、食欲不振、惡心、腹瀉和腹痛等?？捎懈未蟆⒏喂δ墚惓?。嚴(yán)重者可發(fā)展為門脈性肝硬化。少數(shù)患者發(fā)生球后視神經(jīng)炎，出現(xiàn)視野縮小，視力減退。此外，國外還有報(bào)道可引起聽力障礙、耳蝸前庭系統(tǒng)功能障礙及再生障礙性貧血等。皮膚長(zhǎng)期接觸，可因脫脂而出現(xiàn)干燥、脫屑和皸裂等。五緊急處理方法吸入：迅速脫離現(xiàn)場(chǎng)至新鮮空氣處。保持呼吸道通暢。如呼吸困難，給輸氧。如呼吸停止，立即進(jìn)行人工呼吸。就醫(yī)。誤食：

8、飲足量溫水，催吐，洗胃。就醫(yī)。皮膚接觸：立即脫去被污染衣著，用肥皂水和清水徹底沖洗皮膚。就醫(yī)。眼睛接觸：立即提起眼瞼，用流動(dòng)清水或生理鹽水沖洗。就醫(yī)。治療方法目前尚無特效解毒劑，主要按一般急救措施及對(duì)癥治療。急性中毒時(shí)，應(yīng)將患者迅速移出現(xiàn)場(chǎng)。脫去被污染的衣物。皮膚、眼睛受污染時(shí)可用清水或2%碳酸氫鈉溶液沖洗，至少l5min以上?？诜卸菊弑仨毤霸缦次?，洗胃前，先用液體石蠟或植物油以溶解四氯化碳?；颊邞?yīng)臥床休息，密切觀察34天，要注意尿常規(guī)、尿量、血肌酐及肝功能情況，及早發(fā)現(xiàn)肝、腎損害征象。早期給氧，給予高熱量，高維生素及低脂飲食。積極防治神經(jīng)系統(tǒng)及肝、腎功能損害，治療原則同內(nèi)科。出現(xiàn)少尿、無尿

9、時(shí)應(yīng)及早作血液透析或腹膜透析，以防治尿毒癥、高鉀血癥等。忌用腎上腺素及含乙醇藥物。近年國外曾報(bào)道及早應(yīng)用乙醚半胱氨酸可防止或減輕肝、腎功能損害。還有以高壓氧治療有效的報(bào)道。實(shí)驗(yàn)結(jié)果認(rèn)為高壓氧可減少四氯化碳在肝內(nèi)自由基的形成，從而降低脂質(zhì)過氧化作用，減輕肝損害。但國內(nèi)尚未見報(bào)道?；A(chǔ)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1四氯化碳急性毒性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑榱藴y(cè)試和求出四氯化碳對(duì)SD(sprague-dawley)大鼠的致死量(以LD50表示)，提供四氯化碳的急性毒作用性質(zhì)、可能的靶器官和致死原因、劑量-反應(yīng)關(guān)系，提供四氯化碳的進(jìn)行中毒資料，初步評(píng)價(jià)對(duì)人體產(chǎn)生損害的危險(xiǎn)性，為慢性實(shí)驗(yàn)以及其他道路學(xué)實(shí)驗(yàn)提供接觸劑量和觀察指標(biāo)選擇

10、的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法及步驟通過四氯化碳(CCl4)急性毒性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來進(jìn)行其對(duì)機(jī)體的毒性效應(yīng)的研究。CCl4作為外源化合物，它的毒性作用也是通過生物體表現(xiàn)出來的，所以生物體對(duì)四氯化碳的吸收、排泄及代謝轉(zhuǎn)化過程和生物體本身的種屬品系、年齡、營(yíng)養(yǎng)及健康等機(jī)體狀態(tài)也是影響其毒性作用的重要因素。因此，對(duì)四氯化碳的急性毒性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇及分組、四氯化碳進(jìn)入機(jī)體的劑量和方式及時(shí)間發(fā)布、觀察指標(biāo)和LD50的計(jì)算等內(nèi)容。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇及飼養(yǎng)管理本實(shí)驗(yàn)選用SD大鼠作為研究對(duì)象。因?yàn)榇笫笤诖x和毒性反應(yīng)上與人類較為接近，并且大鼠的繁殖能力較強(qiáng)、價(jià)格較低、體積小(占地少、易操作，、壽命短(實(shí)驗(yàn)期短，食譜與人相

11、似(雜食動(dòng)物，及具有便于分析明確的生物指標(biāo)。因此，我們選用60只雌雄各半，體重為200g左右(相差不超過10g)，未交配和未受孕的健康成年的SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。而且試驗(yàn)前要進(jìn)行12周的檢疫觀察和適應(yīng)期，剔除臨床異常者，所選用的飼料要能滿足實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需求。觀察期間的喂養(yǎng)大鼠和小鼠的室溫控制在（223）C，相對(duì)濕度為30%70%。飼養(yǎng)密度為每籠2只，無對(duì)流風(fēng),人工晝夜環(huán)境，飲水、飼料清潔，保持室內(nèi)衛(wèi)生。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組為盡量降低和消除動(dòng)物的個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，我們將60只雌雄各半的SD大鼠隨機(jī)分成6組，1個(gè)對(duì)照組和5個(gè)不同藥物劑量組，每組10只SD大鼠（雌雄各半）。染毒方法及周期將四氯化碳

12、用0.1%1%橄欖油或精致花生油配制所需濃度，采用灌胃方法（灌藥前要隔夜禁食，灌藥后24h復(fù)食）,實(shí)驗(yàn)組按0.5ml/100g體重1次給受試物，對(duì)照組按0.5ml/100g體重一次給0.1%1%橄欖油或精致花生油。觀察期為14d.劑量選擇查相關(guān)資料已知四氯化碳的半數(shù)致死量為2.92g/kg（大鼠，經(jīng)口），本實(shí)驗(yàn)以此作為計(jì)算四氯化碳對(duì)SD大鼠一次灌胃的半數(shù)致死量LD的中間劑量。由四氯化50碳對(duì)SD大鼠的半數(shù)致死量LD為2。92g/kg（大鼠，經(jīng)口）可知，四氯化碳屬低毒50物質(zhì)，劑量選擇時(shí)組距應(yīng)較大，所以本實(shí)驗(yàn)的組距對(duì)數(shù)值選lg1.6=0.2,上下各推兩個(gè)劑量組，則四氯化碳SD大鼠灌胃一次實(shí)驗(yàn)的劑

13、量設(shè)計(jì)見下表。表1四氯化碳SD大鼠灌胃一次實(shí)驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)組別劑量/(g/kg)對(duì)數(shù)值11.160.065421.840.265432.920.465444.620.665457.330.8654毒性觀察中毒癥狀全面觀察中毒的發(fā)生、發(fā)展過程和規(guī)律以及中毒特點(diǎn)和毒作用的靶器官。觀察的系統(tǒng)包括：表2嚙齒類動(dòng)物急性中毒表現(xiàn)的觀察內(nèi)容系統(tǒng)和器官觀察項(xiàng)目中毒后常見表現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)行為體位異常、叫聲異常、活動(dòng)異常、多動(dòng)或呆臥軀體運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)運(yùn)動(dòng)狀態(tài)少動(dòng)、震顫、痙攣、抽搐麻痹、僵直、運(yùn)動(dòng)失調(diào)對(duì)刺激反應(yīng)性易興奮、反應(yīng)過敏或遲鈍、反應(yīng)低下或過咼腦、脊髓反射減弱或消失肌肉張力松弛或緊張自主神經(jīng)系統(tǒng)瞳孔擴(kuò)大或縮小呼吸系統(tǒng)

14、鼻鼻孔流液、鼻翼扇動(dòng)呼吸表現(xiàn)呼吸深緩、過速、困難、衰竭心血管系統(tǒng)心區(qū)觸診、聽診震顫、心動(dòng)過速或過緩、心律不齊等腸胃系統(tǒng)排便腹瀉、便秘腹部外形膨隆、凹陷糞便硬度與顏色不成形、黃色、灰白色泌尿生殖系統(tǒng)陰道口、乳腺、陰莖腫脹、分泌物增多、會(huì)陰部污穢、脫出、遺精皮膚和被毛顏色、張力皮膚松弛、皺褶、發(fā)紅、皮疹、潰瘍、被毛蓬松黏膜結(jié)膜、口腔分泌物增多、充血、水腫、蒼白、紫紺眼睛眼瞼上瞼下垂眼球眼球突出、震顫、充血角膜角膜混濁、血腥分泌物其他直腸溫和腳爪、皮膚溫升高或降低一般情況姿勢(shì)異常、消瘦等死亡與死亡時(shí)間給藥后立即觀察并記錄動(dòng)物的中毒表現(xiàn)，癥狀出現(xiàn)和消失的時(shí)間及死亡時(shí)間，重點(diǎn)觀察和記錄每只動(dòng)物的死亡時(shí)間

15、，特別是最早出現(xiàn)死亡的時(shí)間以及各個(gè)劑量組動(dòng)物的死亡數(shù)。給藥當(dāng)日應(yīng)連續(xù)觀察，其后，每日至少觀察2次，觀察期為14d.體重給藥前、死亡時(shí)各稱量以體重、觀察期間每3d稱量一次。病理檢查及時(shí)剖檢死亡動(dòng)物，肉眼觀察主要臟器的大小、外觀、色澤、有無充血、出血、水腫或其他病變，對(duì)有病理變化的組織及臟器應(yīng)做組織病理學(xué)檢查。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)各劑量組存活動(dòng)物和對(duì)照組動(dòng)物也應(yīng)該進(jìn)行病理學(xué)檢查。根據(jù)文獻(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行的病理學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目有：（1）檢測(cè)、比較不同染毒劑量組及對(duì)照組之間反映肝壞死損傷的指標(biāo)如血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（ALT）活力和反應(yīng)脂肪變性損傷的指標(biāo)如肝甘油三酯（TG）的含量。（2）檢測(cè)、比較不同染毒劑量組及對(duì)照

16、組之間肝臟抗氧化指標(biāo)如氧化物歧化酶（SOD）活力和還原性谷胱甘肽（GSH）含量及肝臟過氧化指標(biāo)如脂質(zhì)過氧化（LPO）含量。分析脂質(zhì)過氧化指標(biāo)變化與肝損傷指標(biāo)變化之間的關(guān)系。（3）檢測(cè)、比較不同染毒劑量組及對(duì)照組之間血液中蛋白質(zhì)含量、各種蛋白質(zhì)含量、血清多種酶（轉(zhuǎn)氨酶、醛縮酶、精氨酸酶、黃嘌呤氧化酶、谷酰胺酶、氨基移換酶等）活性。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄及LD的計(jì)算50根據(jù)各組的大鼠死亡數(shù)，用改良寇式法法計(jì)算動(dòng)物半數(shù)死亡劑量（LD）及其95%50的可信限。當(dāng)最大劑量死亡率為100%,最小劑量的死亡率為0；各組動(dòng)物數(shù)相等；各劑量組的組距等比或劑量對(duì)數(shù)差相等時(shí)，用(4-1)公式計(jì)算LD:50TOC o 1-5

17、h zLD=lg-iXm-i(Ep-0.5)(4-1)50當(dāng)不含0和100%死亡率時(shí)，用下面公式：LD=lg-iXm-i(Ep-3pmpn)(4-2)504S=i呂四(4-3)lgLD50nLD的95的可信限=lg-1(lgLD1.96xS)(4-4)5050lgLD50以上公式中：i為組距，即相鄰兩組劑量對(duì)數(shù)劑量之差；Xm為最大劑量對(duì)數(shù)；p為各劑量組死亡率(用小數(shù)表示)；Pm為最高死亡率；q為各劑量組存活率；p為最低n死亡率；Ep為各劑量組死亡率之和；n為各組動(dòng)物數(shù)；S為lgLD標(biāo)準(zhǔn)誤。lgLD5050假設(shè)四氯化碳對(duì)SD大鼠一次灌胃染毒急性毒性試驗(yàn)結(jié)果如表3所示。計(jì)算LD組別動(dòng)物數(shù)n齊U量/

18、(g/kg)劑量對(duì)數(shù)死亡數(shù)n死亡率p存活率qp.q1101.160.065400.01.00.002101.840.265420.20.80.163102.920.465440.40.60.244104.620.665480.80.20.165107.330.8654101.00.00.00i=0.2Ep=2.4表3四氯化碳對(duì)SD大鼠一次灌胃染毒急性毒性試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄50。將上表結(jié)果代入4-1式得LD=lg-i0.8654-0.2(2.4-0.5)50=lg-10.4854=3.058(g/kg)S二工凹=0.0473lgLD50nLD的95的可信限=lg-1(lgLD1.96xS)=lg-1(

19、0.48545050lgLD501.96x0.0473)=2.463.79(g/kg)因此，四氯化碳SD大鼠的灌胃LD為3.058(g/kg),其95%的可信范圍為2.46503.79(g/kg)。1.5結(jié)果評(píng)價(jià)SD大鼠灌胃給藥按改良寇式法算得LD50為3.058(g/kg)，按國內(nèi)通用的毒性分級(jí)系統(tǒng)(表4)表明四氯化碳屬低毒級(jí)。表4毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(以大鼠一次經(jīng)口的LD50)單位：mg/kg微毒低毒中等毒咼毒劇毒500050050111.6注意事項(xiàng)（1）不同受試物其染毒劑量不同，根據(jù)其LD或其他因素綜合考慮或通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確50定染毒劑量。（2）四氯化碳具有揮發(fā)性，可由呼吸道吸收，對(duì)人體有一定毒性，

20、操作時(shí)應(yīng)注意。（3）四氯化碳與溶劑橄欖油或植物油必須充分?jǐn)嚢?，需完全均勻溶解后方可染毒?.四氯化碳慢性毒性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)2.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑橛^察SD大鼠連續(xù)口服四氯化碳所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及其程度，以提供毒性反應(yīng)的靶器官及其損害的可逆性，確定無毒性反應(yīng)劑量，為臨床安全用藥提供參考劑量。2.2實(shí)驗(yàn)方法及步驟2.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇及飼養(yǎng)管理我們選用120只雌雄各半，體重為60g左右（組內(nèi)動(dòng)物個(gè)體體重相差應(yīng)不超過平均體重的10%,組間平均體重相差不超過5%），出生34周，健康的初斷奶的SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。所用飼料能滿足實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需求，嚴(yán)格控制有毒、有害物質(zhì)對(duì)飼料的污染；動(dòng)物飼養(yǎng)房中不得使用消毒劑、殺蟲劑

21、等藥物。實(shí)驗(yàn)期間大鼠是采用單籠飼養(yǎng)，且各組動(dòng)物飼養(yǎng)條件（籠具、溫度、光照、飼料等）嚴(yán)格一致。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組為盡量降低和消除動(dòng)物的個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，我們將120只雌雄各半的SD大鼠隨機(jī)分成4組，1個(gè)對(duì)照組和3個(gè)不同藥物劑量組，每組30只SD大鼠（雌雄各半）。染毒方法及周期將四氯化碳用0.1%1%橄欖油或精致花生油配制所需濃度，按照沒天一次，經(jīng)灌胃染毒，連續(xù)6個(gè)月。劑量選擇與分組根據(jù)四氯化碳對(duì)SD大鼠一次灌胃急性毒性試驗(yàn)計(jì)算所得的LD為3.058g/kg，50確定本實(shí)驗(yàn)的染毒劑量的分別為L(zhǎng)D的1/10、1/20、1/40，即實(shí)驗(yàn)組的高、中、低劑50量分別為0.3058、0.1529、0.07

22、645g/kg。給藥方式均采用等容量不等濃度給藥，連續(xù)6個(gè)月經(jīng)口灌胃染毒，1次/d；對(duì)照組給予等體積的0.1%1%橄欖油或精致花生油灌胃。觀察指標(biāo)（1）實(shí)驗(yàn)期間每周用電子秤稱量大鼠體重，每日觀察大鼠的活動(dòng)、進(jìn)食情況、中毒癥狀、毛色、對(duì)外反應(yīng)、糞便等方面的變化，并進(jìn)行詳細(xì)記錄。（2）每周稱量一次體重。（3）在用藥期（4個(gè)月）各組隨機(jī)處死8只（雄雌各4只）進(jìn)行病理剖檢以及各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。在最后一次給藥后24小時(shí)，各組隨機(jī)處死16只（雄雌各8只）動(dòng)物，進(jìn)行血液學(xué)指標(biāo)檢查：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）,血紅蛋白（Hb）,血小板計(jì)數(shù)（BPC）、凝血時(shí)間（CT）,白細(xì)胞總數(shù)（WBC）及其分類：中性白細(xì)胞（N）、淋巴

23、細(xì)胞（L）、嗜酸性白細(xì)胞（E）、單核細(xì)胞（M）。血液生化檢查：天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST），丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT），堿性磷酸酶（ALP），尿素氮（BUN），總蛋白（TP），白蛋白（ALB），血糖（GLU）,總膽紅素（T-BIL），肌酐（Crea）,總膽固醇（CTHO）。（4）系統(tǒng)尸檢和病理組織學(xué)檢查：系統(tǒng)尸檢：全面細(xì)致的尸檢，為組織學(xué)檢查提供依據(jù)；臟器系數(shù)：心、肝、脾、腎、肺、腦、腎上腺、甲狀腺、睪丸、卵巢、子宮、前列腺；組織學(xué)檢查：心、肝、脾、腎、肺、腦及視神經(jīng)、骨髓、垂體、腎上腺、甲狀腺、胰腺、胃、十二指腸、回腸、結(jié)腸、胸骨（骨和脊髓）、胸腺、淋巴結(jié)、膀胱、子宮、卵巢、前列腺、睪丸（連附睪）。（5）各組剩下6只（雄雌各3只）大鼠繼續(xù)觀察2個(gè)星期后處死，剖殺，同樣進(jìn)行上述各項(xiàng)目檢查，以便了解所出現(xiàn)短線反應(yīng)的可逆程度以及可能出現(xiàn)的延遲性短線反應(yīng)。結(jié)果評(píng)價(jià)查閱相關(guān)文件可知，四氯化碳是典型的肝臟毒物，所以，四氯化碳對(duì)大鼠的毒性主要表現(xiàn)在肝臟部位，除此之外，腎臟及肺也有一定的損傷。四氯化碳