金邊瑞香活性成分瑞香黃烷Ⅰ瑞香素對SMMC7721和 MCF7細(xì)胞作

1、金邊瑞香活性成分瑞香黃烷-，瑞香素對SMMC-7721和 MCF-7細(xì)胞作【摘要】目的研究金邊瑞香活性成分瑞香黃烷-(E002)、瑞香素(E003)抗腫瘤活性，為進(jìn)一步研究抗腫瘤機(jī)制提供根據(jù)。方法用噻唑藍(lán)(TT)法檢測不同濃度E002、E003對S-7721和F-7細(xì)胞的抑制率。結(jié)果E002、E003濃度為2501.95g/l時(shí),作用S-7721細(xì)胞，兩者的抑制率為：(86.92.2)%(50.80.6)%。E002濃度為25062.5g/l時(shí),作用F-7細(xì)胞，其抑制率為：(72.32.1)%(52.481.65)%。E002對S-7721和F-7細(xì)胞的I50值分別為：(1.960.03)和(

2、22.893.04)g/l;E003對S-7721細(xì)胞的I50值為：(1.230.11)g/l。結(jié)論金邊瑞香活性成分瑞香黃烷-對S-7721、F-7細(xì)胞,瑞香素對S-7721細(xì)胞的增殖均有顯著抑制作用，且呈現(xiàn)良好的劑量依賴性?！娟P(guān)鍵詞】金邊瑞香;抗腫瘤;噻唑藍(lán)法Abstrat：bjetiveTstudytheantiturativityfDaphnedrvar.arginataextrats-E002(daphndrinI)andE003(daphnetin)invitr.ethdsF-7andS-7721ellseretreatedrespetivelyithE002andE003atdif

3、ferentnentratins,thegrthinhibitryeffetsfE002,E003ereassessedusingtheTTassay.Results(1)Bthinhibitinrate(%)erefr86.92.2t50.80.6,henS-7721ellseretreatedithE002,E003inthenentratinrangef2501.95(g/l).(2)Inhibitinrate(%)erefr72.32.1t52.481.65,henF-7ellseretreatedithE002inthenentratinrangef25062.5(g/l).(3)I

4、50valueE002nS-7721andF-7ells(g/l)ere1.960.03and22.893.04;I50valueE003nS-7721ells(g/l)as:1.230.11.nlusinDaphndrinIhassignifiantinhibitryeffetnF-7andS-7721ellsinadse-dependentinvitr.DaphnetinhassignifiantinhibitryeffetnS-7721ellinadse-dependentinvitr.Keyrds：Daphnedrvar.arginata;Antitur;TTassay金邊瑞香(Dap

5、hnedravar.arginata)，又名睡香，具有抗炎、抑菌、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫、抗缺氧、抗脂質(zhì)過氧化延緩衰老等藥理活性17，其主要活性成分為雙黃酮類和香豆素類化合物8。本研究中所用瑞香黃烷-(E002)、瑞香素(E003)系從金邊瑞香中提取的兩種單體化合物，前者為雙黃酮類化合物，后者為香豆素類化合物。本研究觀察了E002、E003對兩種人實(shí)體瘤細(xì)胞人肝癌S-7721細(xì)胞及人乳腺癌F-7細(xì)胞的增殖抑制作用，為進(jìn)一步研究抗腫瘤機(jī)制提供根據(jù)。1材料1.1藥物藥物E002(瑞香黃烷，daphndrinI，純度99.7%)和E003(瑞香素，daphnetin，純度99.6%)均為由南昌大學(xué)分析化學(xué)系

6、采用高速逆流色譜技術(shù)從金邊瑞香中進(jìn)展別離純化并提供的單體化合物(分子構(gòu)造見圖1)。其中瑞香黃烷是首次從該種植物中別離得到。藥物濃度均為1g/l，臨用前用1640培養(yǎng)液行12個(gè)梯度倍比稀釋，使終濃度為250，125，62.5，31.25，15.62，7.81，3.90，1.95，0.97，0.48，0.24，0.12g/l。圖1E002、E003分子構(gòu)造1.2細(xì)胞F-7細(xì)胞株購自南京凱基生物公司，S-7721細(xì)胞株由江西省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所提供，采用常規(guī)培養(yǎng),培養(yǎng)液為含10%小牛血清的RPI1640，在37,5%2飽和濕度的孵箱中培養(yǎng),細(xì)胞處于對數(shù)生長期時(shí)用于實(shí)驗(yàn)。2方法2.1細(xì)胞培養(yǎng)將細(xì)胞復(fù)蘇后，

7、接種于已加有67l含1640完全培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于37，5%2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每兩天換液一次，當(dāng)細(xì)胞生長至密度70%80%時(shí)，用0.25%胰蛋白酶消化傳代。待細(xì)胞養(yǎng)至第3代后，消化細(xì)胞調(diào)整到所需濃度備用。2.2抑瘤實(shí)驗(yàn)采用TT比色法，取1.0105/l的對數(shù)生長期細(xì)胞，以每孔100l接種于96孔培養(yǎng)板中。12h后，于各實(shí)驗(yàn)孔中參加不同濃度相應(yīng)藥物100l/孔，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)平行孔;同時(shí)設(shè)陽性對照孔(參加12.5g/l阿霉素)、細(xì)胞對照孔、溶劑對照孔和空白對照孔。培養(yǎng)至44h時(shí)，每孔參加5g/l的TT20l。繼續(xù)培養(yǎng)4h后，棄去全部上清，每孔參加150l二甲基亞楓(DS)，振蕩后，在酶標(biāo)

8、儀492n波長處測D值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)兩次。然后計(jì)算細(xì)胞生長抑制率：抑制率(%)=(1-加藥孔平均D值/對照孔平均D值)100%;然后計(jì)算出半數(shù)抑制濃度(I50)。2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果E002、E003為250，125，62.5，31.25，15.62，7.81，3.90，1.95g/l濃度時(shí)，作用于S-7721細(xì)胞，前者的抑制率(%)為：85.133.72，83.060.56，80.881.67，74.231.12，67.630.90，62.581.09，56.151.68，50.80.63;后者的抑制率(%)為：86.92.2

9、3，83.42.47，80.352.22，78.010.41，74.533.46，69.052.83，60.012.68，51.461.63。見圖2A。取E002為：250，125，62.5g/l濃度時(shí)，作用于F-7細(xì)胞，其抑制率(%)為：72.32.10，54.312.43，52.481.65。(見圖2B);E003對F-7細(xì)胞增殖抑制作用不明顯。E002作用于S-7721和F-7細(xì)胞的I50值(g/l)分別為：1.960.03和22.893.04;E003作用于S-7721細(xì)胞的I50值(g/l)為：1.230.11。4討論瑞香素(Daphnetin)系香豆素類化合物，具有強(qiáng)心、抗血栓形成

10、、鎮(zhèn)痛、抗炎、鎮(zhèn)靜催眠、抗瘧疾、殺蚜蟲及抗菌等多種作用。瑞香黃烷系雙黃酮類化合物。已有研究說明：雙黃酮類化合物和香豆素類化合物均具有良好的抗腫瘤活性9，10。但關(guān)于瑞香黃烷-和瑞香素的抗腫瘤活性卻鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用TT法，用從我省盛產(chǎn)植物金邊瑞香中提取的瑞香黃烷和瑞香素作用于人的兩種實(shí)體瘤細(xì)胞人肝癌S-7721細(xì)胞及人乳腺癌F-7細(xì)胞，觀察其是否具有抗腫瘤作用。結(jié)果說明瑞香黃烷-對S-7721、F-7細(xì)胞,瑞香素對S-7721細(xì)胞的增殖均有顯著抑制作用，且呈現(xiàn)良好的劑量依賴性;瑞香素對F-7細(xì)胞抑制作用不明顯。提示瑞香黃烷和瑞香素均具有一定的體外抗腫瘤活性，其詳細(xì)抗瘤機(jī)制還有待進(jìn)一步深化研究

11、，而其抗腫瘤作用是否具有實(shí)用價(jià)值，還需動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1葉和楊，曾靖，楊敬格，等.金邊瑞香的抗炎癥作用J.贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，22(1)：7.2徐靜，傅穎媛.金邊瑞香對小鼠免疫細(xì)胞的影響J.廣東醫(yī)學(xué)，2022，26(9)：1207.3葉和楊，曾靖，胡曉，等.金邊瑞香的耐缺氧作用J.贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，22(4)：329.4葉和楊，汪秀榮，胡志萍，等.金邊瑞香對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用J.贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2022，25(5)：579.5葉和楊，熊小琴，王中平，等.金邊瑞香提取液鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究J.贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2022，24(5)：505.6葉和楊，周俐，曾靖，等.金邊瑞香對小鼠SD活性及DA含量的影響J.贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2022，23(3)：246.7陳水親，徐靜，黃彬紅，等.植物藥金邊瑞香對小鼠腸道Peyers法