標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 36843-2018 梨衰退植原體檢疫鑒定方法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),主要針對(duì)梨樹(shù)上發(fā)生的由植原體引起的疾病進(jìn)行檢測(cè)和鑒定。該標(biāo)準(zhǔn)適用于進(jìn)出口、國(guó)內(nèi)調(diào)運(yùn)以及產(chǎn)地檢疫中對(duì)梨衰退病的檢驗(yàn)與鑒定工作。它規(guī)定了從樣品采集到最終結(jié)果判定的一系列技術(shù)要求,包括但不限于采樣方法、樣品處理方式、檢測(cè)技術(shù)和結(jié)果分析等內(nèi)容。

在樣品采集方面,標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)描述了不同生長(zhǎng)階段及發(fā)病程度下的梨樹(shù)枝條、葉片等樣本選取原則,確保所取樣本能夠代表整株植物或整個(gè)果園的情況。同時(shí)強(qiáng)調(diào)了避免交叉污染的重要性,并給出了具體的防護(hù)措施建議。

對(duì)于樣品處理,文件明確了如何制備適合后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作的形式,比如研磨液體制備等步驟的具體條件參數(shù)設(shè)定。此外還涉及到了DNA提取過(guò)程中的注意事項(xiàng),保證獲得高質(zhì)量的遺傳物質(zhì)用于后續(xù)分子生物學(xué)測(cè)試。

該標(biāo)準(zhǔn)采用PCR擴(kuò)增技術(shù)作為核心檢測(cè)手段之一,通過(guò)設(shè)計(jì)特異性引物來(lái)擴(kuò)增目標(biāo)區(qū)域的DNA片段,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)梨衰退植原體的快速準(zhǔn)確識(shí)別。同時(shí),也提供了基于限制性?xún)?nèi)切酶酶切分析的方法,進(jìn)一步確認(rèn)陽(yáng)性結(jié)果的真實(shí)性與可靠性。

結(jié)果判定部分,則是根據(jù)實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)對(duì)比已知標(biāo)準(zhǔn)圖譜或者數(shù)據(jù)庫(kù)信息來(lái)進(jìn)行。只有當(dāng)所有關(guān)鍵指標(biāo)均符合預(yù)期時(shí),才能最終確定樣品中含有梨衰退植原體。

此標(biāo)準(zhǔn)為我國(guó)梨產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展提供技術(shù)支持,有助于早期發(fā)現(xiàn)并控制該類(lèi)病害傳播,減少經(jīng)濟(jì)損失。


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....

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  • 2018-09-17 頒布
  • 2019-04-01 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

ICS6502001

B16..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T36843—2018

梨衰退植原體檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofCandidatusPhytoplasmapyri

2018-09-17發(fā)布2019-04-01實(shí)施

國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T36843—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國(guó)遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局中華人民共和國(guó)福建出入境檢驗(yàn)檢

:、

疫局

。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人王有福李鑫于文濤劉冉馮茜茜于爽王秀芬張寅寅黑多爾劉卉秋

:、、、、、、、、、、

胡強(qiáng)曹冬梅

、。

GB/T36843—2018

梨衰退植原體檢疫鑒定方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了梨衰退植原體Candidatus的檢疫和鑒定方法

Phytoplasmapyri。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于薔薇科及夾竹桃科等植株及其繁殖材料和傳播介體中梨衰退植原體的檢疫和鑒定

2梨衰退植原體基本信息

中文名梨衰退植原體

:

學(xué)名Candidatus

:PhytoplasmapyriSeemüller&Schneider

英文名

:peardecline;Parry?sdisease;peachyellowleafroll;pearleafcurl;pearmoria

分類(lèi)地位細(xì)菌界硬壁菌門(mén)柔膜菌綱非固醇菌原體目

:(Bacteria),(Firmicutes),(Mollicutes),

非固醇菌原體科植原體屬Phytoplasma植

(Acholeplasmatales),(Acholeplasmataceae),(),16SrⅩ-C

原體組

。

其他信息參見(jiàn)附錄

A。

3方法原理

梨衰退植原體癥狀和基因特性作為本標(biāo)準(zhǔn)鑒定方法的依據(jù)

。

4儀器設(shè)備和主要試劑

41儀器設(shè)備

.

定性?xún)x定量?jī)x超凈工作臺(tái)高壓滅菌鍋高速冷凍離心機(jī)臺(tái)式冷凍離心機(jī)純水儀

PCR、PCR、、、、、、

臺(tái)式小型離心機(jī)冰箱旋渦震蕩器微量進(jìn)樣器電泳儀水浴鍋凝膠成像系統(tǒng)等

、、、、、、。

42主要試劑

.

除非另有說(shuō)明在分析中僅使用分析純?cè)噭┖腿ルx子水反應(yīng)體系用雙蒸水提取試

,。PCR。DNA

劑可參照附錄準(zhǔn)備其他試劑比如各種溶液緩沖液和培養(yǎng)基等檢測(cè)方法特有的按附錄附錄

B,,、,C、D

和附錄要求準(zhǔn)備商品化試劑參見(jiàn)其使用說(shuō)明

E。。

植物提取試劑盒預(yù)混液超純水分子量標(biāo)記及

DNA、PCR(PCRPremix)、、DNA(DNAMarker)

提取試劑等

DNA。

核酸提取研磨液三水合磷酸氫二鉀磷酸二氫鉀

(100mL):(K2HPO4·3H2O),2.17g;

蔗糖牛血清白蛋白聚乙烯吡咯烷酮

(KH2PO4),0.41g;,10g;(BSA),0.15g;(PVP-10),2g。pH7.6

高溫滅菌保存

,4℃。

提取液調(diào)至

DNA:Tris-HCl,100mmol/L;EDTA,100mmol/L;NaCl,250mmol/L;pH8.0。

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