實(shí)驗(yàn)改良氏法測蛋白含量

1、關(guān)于實(shí)驗(yàn)改良氏法測蛋白含量第一張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)室規(guī)則按規(guī)章操作，保障實(shí)驗(yàn)安全；進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室要著白大衣；禁止大聲喧嘩，保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的安靜；維持實(shí)驗(yàn)室的整潔。第二張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 實(shí)驗(yàn)課的考試 實(shí)驗(yàn)分組 實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生 實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫第三張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)名稱姓名：班級(jí)：學(xué)號(hào)：實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)步驟：文字簡潔，盡可能采用圖表實(shí)驗(yàn)結(jié)果：原始數(shù)據(jù)、計(jì)算過程、結(jié)論實(shí)驗(yàn)討論：結(jié)果分析、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)日期：同組人員：實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫第四張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月一、玻璃儀器的常規(guī)清洗二、試劑瓶、吸量管、試管的

2、放置基 本 操 作三、刻度吸量管的使用第五張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月分光光度計(jì)分光光度計(jì)的原理分光光度計(jì)的操作第六張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 T = I/I0， A = - lg T 1、A1/A2= c1/c22、標(biāo)準(zhǔn)曲線法Lambert-Beer 定律A = KcL分光光度計(jì)的原理I0ILK：吸光系數(shù)c：溶液濃度L：溶液厚度C第七張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月光源I0I單色器樣品池狹縫檢測系統(tǒng)分光光度計(jì)的構(gòu)造第八張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月分光光度計(jì)的使用1. 打開電源，調(diào)節(jié)旋鈕至需要的波長，預(yù)熱2030min2. 1檔（空白管），

3、T模式調(diào)100%，顯示“Blank”、“100”3. 拉桿拉至1.5檔，T模式調(diào)0%，顯示“0.00”4. 切換到A模式，拉至2、3、4檔，讀取各個(gè)樣品的吸光度5. 使用完畢后，置于休息檔（1.5檔）拉桿，1-4檔樣品池讀數(shù)波長第九張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月1檔，空白對照，A=0，T=100%1.5檔，隔板，A=+，T=0%2檔，樣品1，A=？3檔，樣品2，A=？4檔，樣品3，A=？第十張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月1、分清光面、毛面 手只可接觸毛面，光線須從光面通過2、用溶液潤洗2-3次，裝至2/3至4/5體積3、粗紙吸水、柔紙擦亮光面4、從低到高依次測量，不需清

4、洗比色杯5、蒸餾水沖洗3-5次，擦干，倒扣放置比色皿的使用毛面光面第十一張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月改良Lowry氏法測定蛋白質(zhì)含量 實(shí) 驗(yàn) 1第十二張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月實(shí) 驗(yàn) 目 的 1、學(xué)習(xí)改良Lowry氏法測定蛋白質(zhì)含量 的原理及方法2、了解標(biāo)準(zhǔn)曲線在物質(zhì)定量測定中的 應(yīng)用及繪制要點(diǎn)第十三張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)原理 凱氏定氮法 16%紫外吸收 280nm呈色反應(yīng)第十四張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月Pr.Cu2+OH-Pr-Cu2+ 螯合物 (紫紅色) 酚試劑鉬藍(lán)-鎢藍(lán)混合物 (藍(lán)色，深淺與蛋白含量呈正比) （雙縮脲反

5、應(yīng)）Pr.Cu2+改良Lowry法第十五張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月費(fèi)時(shí)較長，而且要精確控制操作時(shí)間。顯色程度與時(shí)間有關(guān)。 專一性較差，干擾物質(zhì)較多。靈敏度高雙縮脲法的檢出限為 0.21.7 mg/ml，而本法的檢出限為0.0150.110 mg/ml。優(yōu) 點(diǎn)缺 點(diǎn)第十六張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月實(shí) 驗(yàn) 步 驟 試劑（ml）蛋白標(biāo)準(zhǔn)品樣品測定管012345Pr標(biāo)準(zhǔn)液00.10.20.40.60.8 待測血清 1.0生理鹽水1.00.90.80.60.40.20試劑A0.9ml, 混勻后，37水浴10min試劑B0.1ml, 混勻后，室溫放置10min試劑C3ml,

6、 立即混勻，37水浴10min第十七張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月0 x1 x2 x3 x4Y3OD650蛋白質(zhì)量（mg）/蛋白濃度（mg/ml）1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制和實(shí)測樣本濃度的求得Y2Y1樣品吸光度樣品濃度實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果第十八張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月2、濃度換算樣品體積實(shí)測蛋白質(zhì)量待測蛋白濃度（g/L）=實(shí)測蛋白濃度稀釋倍數(shù)待測蛋白濃度（g/L）=稀釋倍數(shù)注意終體積相同的前提下，可以用質(zhì)量代表濃度 例如：1號(hào)管中，蛋白質(zhì)量為0.02mg，而其終濃度為0.004mg/ml注意溶液的稀釋倍數(shù) 例如：若以濃度為橫坐標(biāo)，根據(jù)吸光度得到實(shí)測蛋白濃度為0.02mg/ml, 則待測蛋白濃度= 0.02mg/ml x 5 x 1000=100mg/ml 若以質(zhì)量為橫坐標(biāo)，根據(jù)吸光度得到實(shí)測蛋白質(zhì)量為0.1mg, 則待測蛋白濃度= (0.1mg/1ml) x 1000=100mg/ml 第十九張，PPT共二十一頁，創(chuàng)作于2022年6月未知濃度蛋白溶液實(shí)測蛋白溶液 1ml終體積 5ml測吸光度1:1000稀釋加入A、B、C試劑計(jì)算出終濃度 c實(shí)測蛋白濃度為 cx5未知蛋白濃度為 cx5x1000濃度換算過程解析未知濃度蛋白溶液的