全國(guó)病媒生物抗藥性監(jiān)測(cè)方案資料

1、全國(guó)重要病媒生物抗藥性監(jiān)測(cè)（試行）方案 TOC o 1-5 h z 背景 2抗藥性監(jiān)測(cè)在疾病預(yù)防控制中的重要性 2抗藥性概況 2抗藥性監(jiān)測(cè)的基礎(chǔ)條件 3疫情控制的需要 3人民生活和社會(huì)與經(jīng)濟(jì)的需要 3已有的工作基礎(chǔ) 4當(dāng)前抗藥性監(jiān)測(cè)中存在的問(wèn)題 4專業(yè)技術(shù)人員缺乏 4測(cè)定方法不統(tǒng)一 4抗藥性監(jiān)測(cè)結(jié)果的利用率低 4 HYPERLINK l bookmark2 o Current Document 監(jiān)測(cè)目的 5掌握抗藥性水平，指導(dǎo)防制 5制定控制預(yù)案，提高疾控能力 5 HYPERLINK l bookmark4 o Current Document 監(jiān)測(cè)的組織、分工和職責(zé) 5監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò) 5分工和職責(zé)

2、 5中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病所 5省 （自治區(qū)，直轄市）疾病預(yù)防控制部門(mén) 5 HYPERLINK l bookmark6 o Current Document 監(jiān)測(cè)內(nèi)容和方法 5蚊蟲(chóng)抗藥性監(jiān)測(cè) 5靶標(biāo)蚊蟲(chóng)及監(jiān)測(cè)點(diǎn)的選擇 5監(jiān)測(cè)時(shí)間 6試蟲(chóng)采集 6監(jiān)測(cè)藥劑 6設(shè)施和器材 6監(jiān)測(cè)方法 6幼蟲(chóng)浸漬法 6成蚊監(jiān)測(cè)法 7統(tǒng)計(jì)與計(jì)算 7家蠅抗藥性監(jiān)測(cè) 7監(jiān)測(cè)點(diǎn)的選擇 7試蟲(chóng)采集 7監(jiān)測(cè)藥劑 7設(shè)施和器材 8監(jiān)測(cè)方法 8數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 8附錄1淡色庫(kù)蚊對(duì)化學(xué)藥劑的抗藥性測(cè)定原始記錄表 9附錄2白紋伊蚊對(duì)化學(xué)藥劑的抗藥性測(cè)定原始記錄表 10附錄3中華按蚊對(duì)化學(xué)藥劑的抗藥性測(cè)定原始記錄表 11附錄4家蠅對(duì)化學(xué)藥劑的

3、抗藥性測(cè)定原始記錄表 12 HYPERLINK l bookmark8 o Current Document 附錄5中華按蚊測(cè)試基本情況記錄 13附錄6測(cè)試殺蟲(chóng)劑的推薦使用濃度 13附錄7推薦使用敏感基線 13 HYPERLINK l bookmark13 o Current Document 附錄8成蚊測(cè)定用藥紙的計(jì)算 13 HYPERLINK l bookmark15 o Current Document 附錄9關(guān)于化學(xué)殺蟲(chóng)劑對(duì)昆蟲(chóng)的毒力回歸線統(tǒng)計(jì)問(wèn)題 14. 使用國(guó)際通用的統(tǒng)計(jì)軟件POLO PC 14.使用具有我國(guó)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的 DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 15 HYPERLINK l bookma

4、rk19 o Current Document 附錄 10 關(guān)于敏感基線的現(xiàn)狀和設(shè)想 16建立敏感性基線的重要性 16昆蟲(chóng)產(chǎn)生敏感性差異的原因 16如何建立敏感基線 17根據(jù)衛(wèi)生部2007年衛(wèi)生應(yīng)急工作要點(diǎn)中“提高衛(wèi)生應(yīng)急能力”的精神，和衛(wèi)生部發(fā)布的2007 年衛(wèi)生工作要點(diǎn)中“大力開(kāi)展愛(ài)國(guó)衛(wèi)生運(yùn)動(dòng)”的要求，落實(shí)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心的關(guān)于重要病媒生物年度工作計(jì)劃，特制定本方案。方案的實(shí)施能夠指導(dǎo)和推進(jìn) “十一五”期間我國(guó)重要病媒生物控制水平、提升突發(fā)公共衛(wèi)生事件中病媒生物控制技術(shù)支撐水平、規(guī)范我國(guó)重要病媒生物抗藥性監(jiān)測(cè)方法?？顾幮允怯绊懭蚬残l(wèi)生、農(nóng)業(yè)、 林業(yè)、 畜牧業(yè)等領(lǐng)域中有害生物控制的重

5、要問(wèn)題，是影響媒介生物性傳染病疾病預(yù)防控制的關(guān)鍵因素?？顾幮缘漠a(chǎn)生和發(fā)展與藥劑的使用有非常密切的關(guān)系。開(kāi)展和加強(qiáng)重要病媒生物抗藥性監(jiān)測(cè)，可以指導(dǎo)化學(xué)藥劑的科學(xué)合理使用，提高控制效果，延緩抗藥性發(fā)展速度，減少人畜中毒事件的發(fā)生，保護(hù)有益生物，維持生態(tài)平衡。背景抗藥性監(jiān)測(cè)在疾病預(yù)防控制中的重要性目前，我國(guó)登革熱、瘧疾、鼠疫、腎綜合征出血熱、腸道傳染?。ㄈ缁魜y、細(xì)菌性痢疾）等疫區(qū)處理中，化學(xué)控制是其媒介生物控制的主要措施。通過(guò)對(duì)常用化學(xué)藥劑的敏感性調(diào)查和抗藥性動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，可以選擇并儲(chǔ)備適宜的控制藥劑，針對(duì)疫情種類、疫區(qū)的病媒生物種類、疫情的發(fā)生季節(jié)和生境等背景材料制定 “病媒生物應(yīng)急控制預(yù)案”，提高我

6、國(guó)在傳染病預(yù)防控制中病媒生物控制能力?？顾幮愿艣r據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球幾乎所有病媒生物（如蚊類、蠅類、鼠類、蚤類等）都有產(chǎn)生抗藥性的報(bào)道。據(jù)統(tǒng)計(jì)， 全世界已經(jīng)有90 種蚊蟲(chóng)對(duì)一種或幾種殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生抗性，其中按蚊51 種、庫(kù)蚊20 種、伊蚊19 種。 51 種按蚊中，對(duì)DDT 產(chǎn)生抗性的有49 種，有機(jī)磷抗性24 種，氨基甲酸酯14 種，擬除蟲(chóng)菊酯10 種。產(chǎn)生抗性的庫(kù)蚊有20種。家蠅的抗藥性問(wèn)題在我國(guó)十分突出，對(duì) DDT、六六六等有機(jī)氯類，對(duì)敵百蟲(chóng)、敵敵畏、馬拉硫磷、毒死蜱等有機(jī)磷類，對(duì)殘殺威等有機(jī)磷類，對(duì)二氯苯醚菊酯、胺菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯等擬除蟲(chóng)菊酯類藥劑，都已經(jīng)產(chǎn)生了不同程度的抗藥性。1978

7、年，全國(guó)蚊蟲(chóng)抗性調(diào)查顯示：淡色庫(kù)蚊對(duì)有機(jī)氯類殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生抗性，且無(wú)明顯的區(qū)域性差異；淡色庫(kù)蚊對(duì)有機(jī)磷類殺蟲(chóng)劑抗性在我國(guó)的東部高于西部。中華按蚊對(duì)DDT 的抗性現(xiàn)象發(fā)生普遍。在1984-1986年的調(diào)查顯示，淡色庫(kù)蚊對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯類殺蟲(chóng)劑普遍產(chǎn)生抗性。在二十世紀(jì)90 年代，淡色庫(kù)蚊對(duì)溴氰菊酯的抗藥性趨勢(shì)顯示，東南沿海高于華北和東北，城市高于農(nóng)村。目前，淡色庫(kù)蚊、白紋伊蚊、家蠅、中華按蚊、三帶喙庫(kù)蚊在我國(guó)多數(shù)地區(qū)已經(jīng)產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，印鼠客蚤在廣東省、云南省產(chǎn)生抗藥性，褐家鼠、黃胸鼠、小家鼠在我國(guó)的多數(shù)分布區(qū)也對(duì)抗凝血?jiǎng)┊a(chǎn)生抗性。鑒于目前媒介生物性傳染病發(fā)生的嚴(yán)峻形勢(shì)，必須加強(qiáng)我國(guó)主要病媒生物抗

8、藥性監(jiān)測(cè)工作?？顾幮员O(jiān)測(cè)的基礎(chǔ)條件疫情控制的需要媒介生物性傳染病占我國(guó)法定傳染病的1/3，控制病媒是控制這類疾病的有效措施之一，化學(xué)藥劑是快速降低媒介密度的必須手段，其依據(jù)是控制預(yù)案。了解當(dāng)?shù)夭∶綄?duì)常用化學(xué)藥劑的敏感程度、掌握有效藥劑種類及其使用技術(shù)、制定針對(duì)性的控制預(yù)案，以應(yīng)對(duì)可能出現(xiàn)的疫情。人民生活和社會(huì)與經(jīng)濟(jì)的需要隨著社會(huì)和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們的健康意識(shí)增強(qiáng)?？刂颇軌蛴绊懭祟惤】岛蜕畹牟∶缴铮妒芨鹘缛耸康年P(guān)注。無(wú)論在大型活動(dòng)（如奧運(yùn)會(huì)、亞運(yùn)會(huì)、世博會(huì)等） 、大型工程（如三峽工程、南水北調(diào)、青藏鐵路等），還是在市民群眾的出游和日常生活中，對(duì)公共衛(wèi)生要求更高，對(duì)環(huán)境保護(hù)的意識(shí)更強(qiáng)，這些都要

9、求我們既要控制有害生物，又要綠色環(huán)保，抗藥性調(diào)查可以使我們科學(xué)用藥、少用已有的工作基礎(chǔ)由于病媒生物控制在我國(guó)疾病預(yù)防控制中的重要作用，國(guó)家對(duì)此非常重視，全國(guó)愛(ài)國(guó)衛(wèi)生委員會(huì)是我國(guó)的病媒生物控制的積極推動(dòng)者，在此平臺(tái)上開(kāi)展了一系列工作，如于二十世紀(jì)70 年代末進(jìn)行的全國(guó)蚊、蠅、鼠的抗藥性監(jiān)測(cè)，在全國(guó)范圍廣泛進(jìn)行，基本摸清了當(dāng)時(shí)的抗藥性現(xiàn)狀和發(fā)展動(dòng)態(tài)，奠定了抗藥性監(jiān)測(cè)的理論基礎(chǔ)和本底資料，同時(shí)也培養(yǎng)了大量的專業(yè)技術(shù)人員。針對(duì)重要媒介生物性傳染病和具有嚴(yán)重騷擾性的媒介，進(jìn)行抗藥性調(diào)查。調(diào)查以 WHO 的測(cè)定方法為基礎(chǔ)，統(tǒng)一檢測(cè)方法，成果與信息共享。與此同時(shí)，也進(jìn)行抗性機(jī)制、抗性遺傳規(guī)律、抗藥性治理策略

10、等的研究，對(duì)我國(guó)疾病預(yù)防控制和環(huán)境衛(wèi)生的改善起到積極作用。另外， 在全國(guó)重要病媒生物監(jiān)測(cè)正在運(yùn)行，在該平臺(tái)的支持下，使對(duì)抗藥性的監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)化成為可能，可以利用已有的人才、物資和系統(tǒng)資源，豐富各級(jí)疾控系統(tǒng)的病媒生物預(yù)防控制工作，為了實(shí)現(xiàn)病媒生物可持續(xù)控制，提高疾控能力。當(dāng)前抗藥性監(jiān)測(cè)中存在的問(wèn)題專業(yè)技術(shù)人員缺乏二十世紀(jì)90 年代，由于工作經(jīng)費(fèi)緊張和工作重心的轉(zhuǎn)移，全國(guó)抗藥性協(xié)作中斷， 使一些從事抗藥性監(jiān)測(cè)的專業(yè)技術(shù)人員離開(kāi)原工作崗位，使病媒生物控制的發(fā)展受到極大損失。測(cè)定方法不統(tǒng)一抗藥性的檢測(cè)和研究，主要集中在各級(jí)疾控機(jī)構(gòu)、研究所、大學(xué)等領(lǐng)域，通過(guò)對(duì)近 20 多年發(fā)表的文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)，出現(xiàn)試驗(yàn)方法不一致

11、，即使相同的方法，試驗(yàn)條件不同、試蟲(chóng)不統(tǒng)一、供試藥劑各異、死亡率判斷標(biāo)準(zhǔn)不一致、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法各異等現(xiàn)象，致使獲得資料間可比性差，不能實(shí)現(xiàn)資料的共享?？顾幮员O(jiān)測(cè)結(jié)果的利用率低對(duì)病媒生物的監(jiān)測(cè)是為了指導(dǎo)用藥，科學(xué)合理用藥，進(jìn)而制定抗性治理方案、疫情控制預(yù)案，最終為疾病預(yù)防控制提供理論依據(jù)。由于抗藥性的發(fā)生有區(qū)域性，不同的病媒生物、不同的藥劑類型其抗性機(jī)制不同，只有充分利用抗藥性監(jiān)測(cè)和研究的結(jié)果，實(shí)現(xiàn)成果共享，才能提供資料的利用率，更好地為疾控服務(wù)。2 監(jiān)測(cè)目的了解抗性動(dòng)態(tài)和發(fā)展規(guī)針對(duì)不同疫情、不同地掌握抗藥性水平，指導(dǎo)防制 掌握我國(guó)重要病媒生物對(duì)主要化學(xué)藥劑的抗性水平，律。制定控制預(yù)案，提高疾控能

12、力 為病媒生物控制中藥劑的選擇和使用提供科學(xué)依據(jù)；區(qū)、不同病媒生物制定藥劑的儲(chǔ)備和使用預(yù)案。監(jiān)測(cè)的組織、分工和職責(zé)監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)以中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所媒介生物控制室為依托，以各省（ 自治區(qū)，直轄市） 為監(jiān)測(cè)試點(diǎn)單位，監(jiān)測(cè)點(diǎn)由監(jiān)測(cè)試點(diǎn)設(shè)立。分工和職責(zé)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病所負(fù)責(zé)全國(guó)重要病媒生物抗藥性監(jiān)測(cè)方案（以下簡(jiǎn)稱方案）的制定、組織、 協(xié)調(diào)和督導(dǎo)；承擔(dān)抗藥性監(jiān)測(cè)的技術(shù)指導(dǎo)和培訓(xùn)，提供監(jiān)測(cè)藥劑的標(biāo)準(zhǔn)樣品，負(fù)責(zé)監(jiān)測(cè)信息的收集、整理、分析、總結(jié)和反饋；并進(jìn)行監(jiān)測(cè)工作的督查和質(zhì)量控制。?。ㄗ灾螀^(qū)，直轄市）疾病預(yù)防控制部門(mén)按照 方案 要求， 落實(shí)開(kāi)展轄區(qū)內(nèi)監(jiān)測(cè)工作；確定一名主管領(lǐng)導(dǎo)負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)

13、，督促檢查監(jiān)測(cè)方案落實(shí)；按時(shí)上報(bào)、分析監(jiān)測(cè)結(jié)果。監(jiān)測(cè)內(nèi)容和方法蚊蟲(chóng)抗藥性監(jiān)測(cè)靶標(biāo)蚊蟲(chóng)及監(jiān)測(cè)點(diǎn)的選擇淡色庫(kù)蚊 / 致倦庫(kù)蚊（幼蟲(chóng)）、中華按蚊（成蟲(chóng)）、白紋伊蚊（幼蟲(chóng)）為監(jiān)測(cè)對(duì)象。各監(jiān)測(cè)試點(diǎn)選擇依據(jù)：（ 1）當(dāng)?shù)孛浇樯镄詡魅静〉陌l(fā)生情況；（ 2）相關(guān)疾病媒介生物的種類和發(fā)生強(qiáng)度；（3）病媒生物對(duì)人的騷擾程度等選擇。監(jiān)測(cè)點(diǎn)要考慮地理分布（經(jīng)緯度、生境），每省選兩個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)進(jìn)行。監(jiān)測(cè)點(diǎn)要相對(duì)固定。監(jiān)測(cè)時(shí)間在當(dāng)?shù)氐陌l(fā)生高峰期，每年進(jìn)行一次，年度間的測(cè)定時(shí)間相對(duì)固定。試蟲(chóng)采集淡色庫(kù)蚊：雌成蚊100頭以上，或幼蟲(chóng)300頭以上，或淡色庫(kù)蚊卵塊50個(gè)以上， 以居民區(qū)為主（依據(jù)：自然情況下，昆蟲(chóng)抗藥性的等位基因頻

14、率為 106108, 抗性個(gè)體百分率為101。）。白紋伊蚊：幼蟲(chóng)采集在150頭以上，成蚊誘集在30頭以上（伊蚊捕獲成蚊的 難度較大）。中華按蚊：在牲口棚內(nèi)采集成蚊 100頭以上、或在稻田、積水等處采集 300 頭以上幼蟲(chóng)?？顾幮员O(jiān)測(cè)，在采集試蟲(chóng)的當(dāng)代或室內(nèi)飼養(yǎng)的12代進(jìn)行。監(jiān)測(cè)藥劑擬除蟲(chóng)菊酯類澳鼠菊酯、氯氟菊酯、氯菊酯；有機(jī)磷類敵敵畏、毒死婢、 倍硫磷；氨基甲酸酯類 殘殺威。根據(jù)當(dāng)?shù)赜盟幥闆r進(jìn)行藥劑的選擇。 （需要好 好討論）設(shè)施和器材配備抗性監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室，有測(cè)試室或光照培養(yǎng)箱（可以調(diào)解溫濕度和光周期）， 蚊蟲(chóng)飼養(yǎng)室，有通風(fēng)櫥、烘箱、防蚊驅(qū)避劑、防蚊罩等防護(hù)用品，誘蚊燈、吸蚊 器、采集勺等蚊蟲(chóng)的

15、采集器具。有電子天平（感量為0.1毫克），200散開(kāi)、1000散開(kāi)移7器，200ml燒杯等。有計(jì)算機(jī)、數(shù)據(jù)處理軟件。監(jiān)測(cè)方法幼蟲(chóng)浸漬法以4齡初幼蟲(chóng)為測(cè)試對(duì)象，以丙酮將原藥稀釋，將待測(cè)藥劑配置57個(gè)系 列濃度，即在200ml的燒杯中加入99ml脫氯水和1ml相應(yīng)的藥液（最后一次稀 釋用水為溶劑），加入30頭試蟲(chóng)，以200ml脫氯水為對(duì)照。試蟲(chóng)在25C、相對(duì) 濕度為800%的條件下放置24小時(shí)，調(diào)查并記錄各處理的死亡數(shù)。 死亡判斷標(biāo)準(zhǔn)，用銳器觸動(dòng)不能逃逸的幼蟲(chóng)為死亡。試驗(yàn)重復(fù)3次。對(duì)照死亡率超過(guò)20%,試驗(yàn)無(wú)效。成蚊監(jiān)測(cè)法藥紙的制備 將白油和乙醴（AR）按1 : 2比例混合作為溶劑。殺蟲(chóng)劑按需要量

16、 溶解其中，配成一定濃度（附錄 4）,吸取2.14毫升均勻滴于16厘米X 12.5厘 米的新華1號(hào)濾紙或其他質(zhì)量相近的濾紙上。2小時(shí)后待乙醴完全揮發(fā)即可應(yīng)用。藥紙制備后應(yīng)在6小時(shí)內(nèi)使用，如需要可以把1020張藥紙用大小相同的 玻璃板夾緊，用橡皮膏把間縫封實(shí)，再裝入黑紙袋中，在較低溫下大約可以存放 一個(gè)月，但一經(jīng)開(kāi)啟即不能儲(chǔ)存，必須在兩三天內(nèi)用完，如果已經(jīng)裝入接觸筒， 就只能用一次。先把恢復(fù)筒接裝在放隔板的一面，用吸蚊器吸取12只雌蚊吹入筒內(nèi)，然后 關(guān)閉隔板，在隔板另一面裝上已襯貼藥紙的接觸筒， 把隔板抽開(kāi)，將恢復(fù)筒內(nèi)蚊 蟲(chóng)輕吹入接觸筒，迅速關(guān)上隔板，將筒平放，即開(kāi)始計(jì)算接觸時(shí)間，完畢后再抽 開(kāi)

17、隔板將蚊蟲(chóng)再吹入恢復(fù)筒，關(guān)上隔板，將筒直放，用浸有5%葡萄糖水的棉花團(tuán)置于尼龍網(wǎng)上。室溫27 1C,無(wú)論測(cè)定時(shí)間的長(zhǎng)短，皆從接觸完畢后 24小 時(shí)計(jì)算死亡率。為了便于蚊蟲(chóng)在恢復(fù)筒內(nèi)停留，可用白紙襯貼在筒內(nèi)上端1/2或2/3,空出下端，以便于觀察死亡掉下的蚊蟲(chóng)。每劑量應(yīng)至少測(cè) 40只蚊，實(shí) 驗(yàn)重復(fù)3次。統(tǒng)計(jì)與計(jì)算用POL欲件或DP漱件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，獲得致死中濃度（LG。）值及其95% 置信限，LG。及其95%置信限，毒力回歸線的斜率b值。家蠅抗藥性監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的選擇監(jiān)測(cè)點(diǎn)要考慮地理分布（經(jīng)緯度、生境），每省選兩個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)進(jìn)行。監(jiān)測(cè)點(diǎn) 要相對(duì)固定。試蟲(chóng)采集成蠅100頭以上、幼蟲(chóng)300條以上，以居民區(qū)為

18、主。監(jiān)測(cè)藥劑擬除蟲(chóng)菊酯類 澳鼠菊酯、氯氟菊酯、氯菊酯;有機(jī)磷類敵敵畏、辛硫磷、毒死蜱；氨基甲酸酯類殘殺威。設(shè)施和器材 有抗性測(cè)試室或光照培養(yǎng)箱，有能夠控制溫濕度的家蠅飼養(yǎng)室。電子天平（感量0.1毫克），200微升、1000微升移液器，0.050.1小微 量點(diǎn)滴器；500mL 燒杯；飼養(yǎng)缸；養(yǎng)蠅籠。在溫度為251C,相對(duì)濕度7080%勺條件下飼養(yǎng)，成蠅羽化后供給奶粉和白糖（比例為1:1 ） 。監(jiān)測(cè)方法用丙酮（分析純）將原藥配成 57個(gè)系列濃度。取35日齡，體重為18 20mg 的家蠅成蟲(chóng)。把含有乙醚（分析純）的棉球?qū)⒅感喂芸诙氯?、輕度麻醉后，選健康雌蟲(chóng)，每處理30 只置于平皿中，用點(diǎn)滴器（類型）

19、將藥液按濃度由低到高的順序，點(diǎn)滴于中胸背板上，放入加有少量奶粉的500 mL 潔凈的燒杯中，以5mL燒杯內(nèi)放置海綿供水，在溫度為 251C,相對(duì)濕度60%70%的條件下飼 養(yǎng)24 h0記錄各處理的死亡蟲(chóng)數(shù)。對(duì)照以丙酮處理，死亡率超過(guò) 20%時(shí)需要重 新進(jìn)行。試驗(yàn)重復(fù)3 次。死亡判斷標(biāo)準(zhǔn)：凡腹部上翻，六足抽搐，用探針觸之不能翻身爬行者判為死亡。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)用POL欲件或DP漱件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，獲得致死中濃度（LG。）值及其95% 置信限，LG。及其95%置信限，毒力回歸線的斜率b值。附錄2白紋伊蚊對(duì)化學(xué)藥劑的抗藥性測(cè)定原始記錄表 附錄1淡色庫(kù)蚊對(duì)化學(xué)藥劑的抗藥性測(cè)定原始記錄表 試蟲(chóng)名稱： 蟲(chóng)源地名：約

20、劑名稱： 英文約名：測(cè)定人: 處理日期： 年_月_日至_月_日蟲(chóng)態(tài)： ；蟲(chóng)齡： 測(cè)定室溫： C；濕度： %測(cè)定培育溫度： q；濕度：%處理濃度單位：重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3合計(jì)死蟲(chóng)數(shù)總蟲(chóng)數(shù)死蟲(chóng)數(shù)總蟲(chóng)數(shù)死蟲(chóng)數(shù)總蟲(chóng)數(shù)死/總對(duì)照/處理蟲(chóng)數(shù);毒力回歸線：;卡方X2:斜率b值（95 %置信限）：LC50 : 95 % 置信限： LC95 : 95 % 置信限： 備注：試蟲(chóng)名稱： 蟲(chóng)源地名：約劑名稱： 英文約名：測(cè)定人: 處理日期： 年_月_日至_月_日蟲(chóng)態(tài)： ；蟲(chóng)齡： 測(cè)定室溫： C；濕度： %測(cè)定培育溫度： q；濕度：%處理濃度單位：重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3合計(jì)死蟲(chóng)數(shù)總蟲(chóng)數(shù)死蟲(chóng)數(shù)總蟲(chóng)數(shù)死蟲(chóng)數(shù)總蟲(chóng)數(shù)死/總對(duì)照/處理

21、蟲(chóng)數(shù);毒力回歸線：;卡方X2:斜率b值（95 %置信限）：LC50 : 95 % 置信限： LC95 : 95 % 置信限： 備注：附錄4家蠅對(duì)化學(xué)藥劑的抗藥性測(cè)定原始記錄表 附錄3中華按蚊對(duì)化學(xué)藥劑的抗藥性測(cè)定原始記錄表ii試蟲(chóng)名稱： 蟲(chóng)源地名：約劑名稱： 英文約名：測(cè)定人: 處理日期： 年_月_日至_月_日蟲(chóng)態(tài)： ；蟲(chóng)齡： 測(cè)定室溫： C；濕度： %測(cè)定培育溫度： q；濕度：%處理濃度單位：重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3合計(jì)死蟲(chóng)數(shù)總蟲(chóng)數(shù)死蟲(chóng)數(shù)總蟲(chóng)數(shù)死蟲(chóng)數(shù)總蟲(chóng)數(shù)死/總對(duì)照/處理蟲(chóng)數(shù);毒力回歸線：;卡方X2:斜率b值（95 %置信限）：LC50 : 95 % 置信限： LC95 : 95 % 置信限： 備

22、注：試蟲(chóng)名稱： 蟲(chóng)源地名：約劑名稱： 英文約名：測(cè)定人: 處理日期： 年_月_日至_月_日蟲(chóng)態(tài)： ；蟲(chóng)齡： 測(cè)定室溫： C；濕度： %測(cè)定培育溫度： q；濕度：%處理濃度單位：重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3合計(jì)死蟲(chóng)數(shù)總蟲(chóng)數(shù)死蟲(chóng)數(shù)總蟲(chóng)數(shù)死蟲(chóng)數(shù)總蟲(chóng)數(shù)死/總對(duì)照/處理蟲(chóng)數(shù);毒力回歸線：;卡方X2:斜率b值（95 %置信限）：LC50 : 95 % 置信限： LC95 : 95 % 置信限： 備注： 附錄5中華按蚊測(cè)試基本情況記錄.測(cè)定人,單位：。 測(cè)定日期：年月 00.試蟲(chóng)來(lái)源：?。ㄊ?、自治區(qū)）、區(qū)（縣）、 街道（村）、 生境。試蟲(chóng)名稱（中文） 口 （拉丁文）,性別_一齡期 ， 生理狀態(tài)：吸血口、未吸血口、半懷

23、孕口、懷孕口。測(cè)試殺蟲(chóng)劑：藥劑來(lái)源,有效期年 月 日,藥劑的儲(chǔ)存條件.背景資料殺蟲(chóng)劑使用：處理蚊帳口；室內(nèi)滯留噴灑口；使用滅幼劑口；農(nóng)田用藥口.試蟲(chóng)的采集方式：幼蟲(chóng)口，F(xiàn)1后代口，人誘法誘捕口，動(dòng)物誘法誘捕口， 室內(nèi)捕獲口，燈誘法口、其它口。如果采集幼蟲(chóng)注明：稻田口、雨水坑口、河邊 口、生活污水口、其它口。附錄6測(cè)試殺蟲(chóng)劑的推薦使用濃度附錄7推薦使用敏感基線附錄8成蚊測(cè)定用藥紙的計(jì)算WH0對(duì)紙上的劑量標(biāo)準(zhǔn)系以殺蟲(chóng)劑在白油中的濃度計(jì)算。如混合液的l %實(shí)際為0.3 3%。按照這種方法，每平方米濾紙滴混合液應(yīng)為107.1毫升，乙醴全部揮發(fā)后僅殘留白油3 5.7毫升，如含藥量1%,即為0.357克。

24、濾紙的面積定為 16X12.5=200平方厘米，為1平方米的1/50。WH夠年來(lái)皆以殺蟲(chóng)劑在溶劑中 的百分率為劑量標(biāo)準(zhǔn)，如澳秋菊酯的標(biāo)準(zhǔn)劑量為0.025 %,實(shí)際每平方米藥量0.00 8 9克。WH 0專家委員會(huì)認(rèn)為百分率與墻面藥量無(wú)直接聯(lián)系，建議今后使 用“克/平方米的計(jì)量單位。附錄 9 關(guān)于化學(xué)殺蟲(chóng)劑對(duì)昆蟲(chóng)的毒力回歸線統(tǒng)計(jì)問(wèn)題建議使用對(duì)大家所公認(rèn)的統(tǒng)計(jì)軟件，這樣可以大大提高計(jì)算速度，減少出錯(cuò)的機(jī)會(huì)?；揪哂锌焖?、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。常用的統(tǒng)計(jì)軟件有POLOPC，SAS, BA, DPS 等多種。. 使用國(guó)際通用的統(tǒng)計(jì)軟件POLO PCLeOra Software POLO-PC, Berke

25、ley, CalifRussel R, Robertson J L, Savin N E. POLO: a new computer program for probit analysis. BullEntomol Soc Am. 1977; 23:202 213.目前我們一直使用其它單位給的軟件，其中有一些參數(shù)不能得到，我們正在連續(xù)一些國(guó)際有人，爭(zhēng)取盡快由正規(guī)渠道購(gòu)買正版軟件。例 1=F1*deltamethrin0 130 30.02 60 600.01 60 510.005 120 900.01125 60 600.0075 60 590.003 60 420.002 60 180.00

26、56 30 190.00375 30 140.0025 30 110.0017 30 40.001 30 1Index of significance for potency estimation: g(.90)=.08179 g(.95)=.12361 g(.99)=.25008Effective Dosesdose limits0.900.950.99LD10deltamet.00122lower.00073.00061.00034upper.00166.00175.00196LD50deltamet.00309lower.00248.00232.00191upper.00367.0038

27、2.00417LD90deltamet.00782lower.00632.00607.00557upper.01088.01213.01701F1deltamet subjects 630 controls 13010g(L)=-282.4 slope=3.178+-.250 nat.resp.=.021+-.012 heterogeneity=4.01 g=.124LD10=.001 limits: .001 to .002LD50=.003 limits: .002 to .004LD90=.008 limits: .006 to .012.使用具有我國(guó)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的DP繳據(jù)處理系統(tǒng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果和

28、POLO勺結(jié)果相近，經(jīng)過(guò)我們對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)核實(shí)沒(méi)有顯著差異，即 計(jì)算的LC50及其95%置信限基本重疊。，DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)D:prograae f ilesDPSDPS. TKT文件數(shù)據(jù)編輯數(shù)據(jù)分析試驗(yàn)設(shè)計(jì)試覽統(tǒng)計(jì)分類數(shù)據(jù)統(tǒng)討專業(yè)新計(jì)零元分析數(shù)學(xué)模型運(yùn)落學(xué)數(shù)值分皿筆管 乂電嗯2 9用小學(xué)聲、眾號(hào)ill圜仁囚I，口 t H舊日右可與寫(xiě)SS S S +X X1 / c 皿K； R & 7ABCDEFGH12da1!13.46625241938. 9775241045. 08524553. 9924262.66241702489計(jì)算結(jié)果當(dāng)前日期2。07-1-2510劑量對(duì)數(shù)劑量處理數(shù)響應(yīng)數(shù)死亡率機(jī)率值

29、1113.45631.129224. 0C0019.C00C0. 79175.8122128.977E0.953224. 000010.00000.41ST4,7896135.93500.777124. 00005.03000.20834.1878143.99000.601024,00002,00000.08333.6170162.65000.424924. 00001.00000. 04173. 26831517處理截距A斜率ESE(B)相關(guān)系數(shù)卡方值DFP181.35503. 77280. 57030.982C1-467830.68511920LD50對(duì)數(shù)濃度二0.966195%置信區(qū)0.

30、 88471. 099721濃度二9. 2494陰置信7,637612,582022LDS5對(duì)數(shù)濃度=1.402195%置信區(qū)1.22B9二2L T4T82324濃度二25.240195用置信區(qū)IS. &400255. 9465唐啟義，馮明光著。實(shí)用統(tǒng)計(jì)分析及其 PD繳據(jù)處理系統(tǒng)?？茖W(xué)出版社，2002。附錄 10 關(guān)于敏感基線的現(xiàn)狀和設(shè)想建立敏感性基線的重要性基線是衡量抗藥性強(qiáng)弱的尺度，基線不統(tǒng)一就不能在全國(guó)范圍內(nèi)進(jìn)行比較、分析。 根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)，很難找到一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。以淡色庫(kù)蚊對(duì)溴氰菊酯的使用的敏感基線為例：程璟俠等使用淡色庫(kù)蚊彳惠敏感品系其LC50為0.24 （ig/mL （程璟俠等，19

31、98）;本實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期保存的敏感品系 LC50為0.987 g/mL ,天津衛(wèi)生防疫站使 用的淡色庫(kù)蚊德敏感品系其 LC50為2.7仙g/mL;中國(guó)科學(xué)院上海昆蟲(chóng)所淡色庫(kù) 蚊敏感品系的LC50值為O.lg/mL。南京醫(yī)科大學(xué)朱昌亮實(shí)驗(yàn)室，引入中國(guó)科 學(xué)院上海昆蟲(chóng)研究所后已在室內(nèi)傳70 余代，檢測(cè)對(duì)溴氰菊酯的半數(shù)致死濃度（LC50）為 0.8 仙 g/L0問(wèn)題：1、溶劑對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。2、溫度、濕度、光周期對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。3、試蟲(chóng)齡期不同。敏感基線是相對(duì)的，如何建立一系列有代表性的敏感基線，將是我們急待解決的問(wèn)題。研究目的不同可以基線的表現(xiàn)不同。如抗藥性機(jī)制研究中使用的敏感基線， 一般使用未選

32、育的相同種群的毒力回歸線為基線，再使用一個(gè)大家公認(rèn)的敏感基線，盡量使其遺傳背景一致。為了進(jìn)行質(zhì)量控制，全國(guó)性的抗藥性監(jiān)測(cè)，敏感基線要有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。昆蟲(chóng)產(chǎn)生敏感性差異的原因抗藥性的主要特點(diǎn)是分布上的區(qū)域性、抗性機(jī)制和及其遺傳機(jī)制的多樣性。其主要原因有：（ 1）抗藥性遺傳多樣性豐富。即使在沒(méi)有接觸任何藥劑的情況下，也會(huì)對(duì)同種殺蟲(chóng)劑表現(xiàn)出約十倍抗藥性差異。（例 1） 。（ 2）藥劑使用歷史和交互抗性的影響。由于用藥背景不同，各地蚊蟲(chóng)對(duì)淡色庫(kù)蚊表現(xiàn)出不同的敏感性水平，如河北省冀州市對(duì)溴氰菊酯的敏感性資源保留較好，白淑萍等1999 年發(fā)表的文章顯示，其敏感性比實(shí)驗(yàn)室的敏感品系還要敏感，其LC50為0.02

33、Ng/mL。藥劑的使用背景可以影響一個(gè)種群對(duì)殺蟲(chóng)劑的抗藥性水平。如DDT 與擬除蟲(chóng)菊酯類殺蟲(chóng)劑有交互抗性，二十實(shí)際80 年代出的測(cè)定表明，在很多沒(méi)有使用過(guò)擬除蟲(chóng)菊酯的地區(qū)也有抗藥性發(fā)生。(3)殺蟲(chóng)劑的作用機(jī)制多樣，昆蟲(chóng)對(duì)藥劑的敏感性程度由其行為習(xí)性、生 理生化和遺傳物質(zhì)的不同所綜合決定的。即使是核酸水平的差異不大，還有細(xì)胞 質(zhì)水平的差異(例2)。3如何建立敏感基線理論上，敏感基線是沒(méi)有使用某種殺蟲(chóng)劑，或未使用具有類似作用機(jī)制殺蟲(chóng) 劑的前提下，采集靶標(biāo)生物進(jìn)行敏感性測(cè)定的結(jié)果。除了對(duì)新開(kāi)發(fā)的藥物以外， 盡量尋找受藥劑污染少的區(qū)域，獲得敏感品系。在我國(guó)的不同區(qū)域，包括各實(shí)驗(yàn)室種群和野外種群，用統(tǒng)一

34、的方法測(cè)定，獲得敏感品系。利用已經(jīng)報(bào)道的相對(duì)敏感的毒力回歸線為基線， 但是到1998年以前 WHO 推薦使用區(qū)分計(jì)量法來(lái)測(cè)定抗性的強(qiáng)弱， 由于該方法是單劑量處理試蟲(chóng)，試驗(yàn)結(jié) 果不穩(wěn)定，適用于抗性發(fā)生的早期。 隨著擬除蟲(chóng)菊酯的大量廣泛推廣應(yīng)用， 濃度 對(duì)數(shù)與死亡率幾率值回歸方程一一毒力回歸線法是國(guó)內(nèi)外的首選方法。例 1 : Geographic Variation in Susceptibility of Chilo suppressalis(Lepidoptera: Pyralidae) to Bacillus thuringiensis Toxins in ChinaFENGXIA MENG

35、 1,2, KONGMING WU 1,3, XIWU GAO 2, YUFA PENG1, and一 一1YUYUAN GUO 1Table 1. Sampling dates, host crops and development stageoSuppressalisCollection locationsSiteMap ref.CollectiondateHostplantDevelopment stageFuzhou, Fujian26 5N,119 19E1Aug. 2002Rice6th instar larvaeCangnan, Zhejiang27 24N,120 23 E2J

36、ul. 2002Rice3rd instar larvaeChangsha, Hunan28 N,113 15 E3Aug.2002Rice6th instar larvaeWenzhou, Zhejiang28 01N, 120 40 E4Jul. 2001Rice4th instar larvaeChengdu, Sichuan30 N,104 20 E5Aug. 2002Rice6th instar larvaeSusong, Anhui3010N,116 8 E6Jul. 2002RiceEggsHangzhou, Zhejiang3018N,120 10 E7Jul. 2002RiceAdultsJurong, Jiangsu31 57N,119 10 E8Jun.2002RiceEggsXiangfan,