兩種醫(yī)院制劑微生物限度檢查法的建立

1、兩種醫(yī)院制劑微生物限度檢查法的建立Objective:To establish oropharyngeal mixture,dryness aperient mixture of two kinds of hospital preparations microbial limits detection methods.Methods:Using conventional method for determination of various varieties of five provisions ， and the recovery test strains of bacteria by c

2、ontrolling the inspection shall be verified.Results:Oropharyngeal mixture have little bacteriostasis,dryness aperient mixture without bacteriostasis.Conclusion:Centrifugal sedimentation oropharyngeal mixture can set bacteria culture medium diluted method and the method of examination,coupled method

3、combined with conventional aperient dryness check microbial limits.根據中國藥典 2005 版規(guī)定 1 ，藥品在進行微生物限度檢查前必須對其檢查方法進行驗證， 以確定供試品所采用的檢驗方法無抑菌作用， 能夠真實的反應供試品受污染程度。 本文中對口咽合劑及潤燥通便合劑建立了相應的微生物限度檢查方法，根據制劑中成分的抑菌作用， 采用常規(guī)法和離心集菌法和培養(yǎng)基稀釋法聯用進行檢查； 經方法驗證試驗證實能夠真實反映供試品的衛(wèi)生學情況。資料與方法儀器：YXQ-LS-50SII立式壓力蒸汽滅菌器（博迅實業(yè) XX公司藥療設備廠），HH S21.

4、CR4恒溫水浴鍋（汕頭廣播儀器廠），TL04A均漿儀（大恒建海科貿公司），LRH-150B生化培養(yǎng)箱（廣東省藥療器件廠），JKOP-420 電熱恒溫培養(yǎng)箱（廈門醫(yī)療電子儀器廠），BP211D電子天平（上海精密儀器 XX公司），KA-100型臺式離心機（安亭科學儀器廠）。試藥和培養(yǎng)基：氯化鈉為分析純（批號：090519），營養(yǎng)脂培養(yǎng)基 （批號：080708），玫瑰紅鈉脂培養(yǎng)基 （批號： 080610） ，膽鹽乳糖培養(yǎng)基（批號： 080321），營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（批號：080527），pH 7.0 氯化鈉 -蛋白胨緩沖液（批號：080621），改良馬丁培養(yǎng)基（批號： 080316），以上培養(yǎng)基均由中

5、國藥品生物制品檢定所提供。試驗菌種：大腸埃希菌CMC（C B） 44102，金黃色葡萄球菌CMC（C B） 26003，枯草芽孢桿菌CMC（C B） 63501，白色念珠球菌 CMC（C F） 98001，黑曲霉菌CMC（C F） 98003，均來自國家菌種保藏中心。樣品： 口咽合劑、 潤燥通便合劑均由四川攀枝花中醫(yī)院制劑室提供 （批號：090219， 090424， 090526， 090309， 090429， 090522） 。結果供試液的制備：取3批供試品各10ml,分別加pH7.0的無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液至100ml ，置電動均漿儀中均漿1 分鐘，制成 1:10 的供試液。試驗

6、組A:細菌記數采用常規(guī)法，取 1:10的供試液1ml 置平皿，每個平皿加試驗菌液 1ml,加入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15 20ml;每個試驗菌平行制備 2個平皿，放冷倒置平皿，在 30 35培養(yǎng)48 小時， 觀測結果。 霉菌和酵母菌記數采用常規(guī)方法。取1:10的供試液1ml,置平皿中，每個平皿加試驗菌液1ml,加玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基1520ml,每種試驗菌平行制備2個平皿， 放冷倒置，于25c培養(yǎng)72小時，測定菌落數。離心沉淀集菌 法和培養(yǎng)基稀釋法聯用取“ 2.1 ”制備的供試液40ml ，分別分在4 支離心管中， 用 r/ 分離心 5 分鐘， 取各管上層液， 再用 3000r/分， 20 分鐘，棄去上

7、清液，留下層沉淀2ml 注入一個平皿中迅速倒入1520ml試液，培養(yǎng)時間與常規(guī)范相同。菌液組B:分另1J取50100ml, cfu/ml的試驗菌液1ml,注 入平皿中，立即倒入培養(yǎng)基，平行制備2個平皿，置30c35c 培養(yǎng)4872小時，觀察結果，測定菌數。供試品對照組C:按2005年版中國藥典一部微生物限度菌落計數方法測定本品的本底數 （按試驗組的方法， 不加菌懸 液測定供試品菌數）。稀釋劑對照組D:取pH7.0的無菌氯化鈉-蛋白陳緩沖液1ml, 方法同實驗組（中國藥典規(guī)定凡是使用離心沉淀法，中和法，薄膜過濾法等需要做稀釋劑對照組）。菌回收率計算及結果判斷： 2005 版藥典規(guī)定對各試驗菌株的

8、回收率均不得低于70%。用常規(guī)法測定該兩個品種對5 個試驗菌株的回收率， 以確定其抑菌程度。 潤燥通便合劑對各試驗菌株的回收率均高于70%，無明顯抑菌作用；而口咽合劑對枯草芽胞菌有抑菌作用。見表1?？谘屎蟿┎捎秒x心沉淀集菌法和培養(yǎng)基稀釋法聯用的方法：采用采用離心沉淀集菌法和培養(yǎng)基稀釋法聯用的方法可有效的除去該藥對試驗菌株的抑菌作用，使回收率大于70%。見表2。表2采用離心沉淀集菌法和培養(yǎng)基稀釋法（0.2%ml/皿）聯用測定枯草芽孢菌的回收率（%）控制菌檢驗法的驗證：大腸埃希菌檢查法的驗證：常規(guī)法：試驗組：取上述供試品溶液10ml及大腸埃希菌菌液1ml加入100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，于 3537

9、c培養(yǎng)24小時。陰性菌 對照組：取上述供試品溶液10ml及金黃色葡萄球菌菌液1ml （含 菌量10100cfu）加入100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)。取上述培養(yǎng)物0.2ml ,接種于含5mlMUGf養(yǎng)基的試管中， 培養(yǎng)，于24小時在365nm紫外線觀察，同時做本底對照。觀察 后，沿培養(yǎng)管管壁加入數滴靛基質試液，觀察，結果 2 個品種均 為實驗組檢出，陰性組未檢出。大腸菌群檢查法的驗證：常規(guī)法：實驗組：取 10ml的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基1 支，加入 1:10ml 的供試液和大腸埃希菌菌液各1ml （含菌量10100cfu）,于3537c培養(yǎng)24小時。陰性菌對照組：取取10ml 的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基1 支，加入1:10ml的供試液和金黃色葡萄球菌菌液各1ml （含菌量10100cfu）,于3537c培養(yǎng)24小時。結果顯示，兩個品種均為試驗組檢出，陰性組未檢出。討論潤燥通便合劑： 采用常規(guī)法記數， 口咽合劑采用離心沉淀集菌法和稀釋劑法聯用的方法， 各品種霉菌和酵母菌， 控制菌檢查均采用常規(guī)法。試驗中應注意， 由于口咽合劑是中藥煎煮劑， 有許多的細小沉淀， 故考慮先用低轉速離心除去大部分的藥渣， 以減少抑菌作用，而且細菌的重量較藥渣輕，