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1、(含選修一教師備選資源)一、微生物1微生物的培養(yǎng)及其利用(1)消毒是殺死物體表面或內(nèi)部一部分有害的微生物;滅菌則是殺死物體內(nèi)外所有的微生物。(2)選擇培養(yǎng)基上一般只能生長(zhǎng)特定的目的微生物,而鑒別培養(yǎng)基可以存在其他種類(lèi)微生物且能鑒別特定微生物。(3)微生物最常用的碳源是糖類(lèi),最常用的氮源是氨鹽、硝酸鹽。(4)微生物的純化與分離一般用平板劃線(xiàn)法、稀釋涂布平板法,微生物數(shù)目統(tǒng)計(jì)用稀釋涂布平板法。(5)無(wú)菌技術(shù)高溫加熱滅菌,其原理就是使細(xì)菌體內(nèi)蛋白質(zhì)變性,而達(dá)到殺滅細(xì)菌的作用?;瘜W(xué)藥劑的滅菌消毒方法,其作用原理是使細(xì)菌體內(nèi)蛋白質(zhì)變性,但是化學(xué)物質(zhì)很難透過(guò)孢子或芽孢的堅(jiān)硬外層進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),因此化學(xué)方法難以
2、消滅孢子和芽孢。體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇?xì)⒕Ч顝?qiáng)。濃度過(guò)低,殺菌力弱;濃度過(guò)高,使菌體表面蛋白質(zhì)凝固形成一層保護(hù)膜,乙醇分子不能滲入其內(nèi),殺菌效果受影響。對(duì)剛洗刷后未干的器皿,則可選擇75%的酒精進(jìn)行消毒。滅菌的目的:無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外,還能有效避免操作者自身被微生物感染。培養(yǎng)基的制作是否合格的驗(yàn)證:如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12天后無(wú)菌落生長(zhǎng),說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的,否則需要重新制備。2生物技術(shù)在食品加工及其他方面的應(yīng)用(1)在發(fā)酵技術(shù)中要應(yīng)用到微生物,果酒制作的主要菌種是酵母菌,果醋制作的主要菌種是醋酸菌,腐乳制作的主要菌種是毛霉、酵母、青霉
3、、曲霉,泡菜制作的主要菌種是乳酸菌。(2)果酒制作時(shí),葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí),要留1/3的空間,目的是讓酵母菌大量繁殖,但發(fā)酵時(shí)一定要嚴(yán)格密封,否則將產(chǎn)生醋酸;果醋制作時(shí),應(yīng)適時(shí)的通入空氣;泡菜制作時(shí)則需封壇發(fā)酵。(3)為防止發(fā)酵液被污染,發(fā)酵瓶要用70%酒精消毒。(4)腐乳的制作時(shí)豆腐含水量以70%為宜,配制鹵湯時(shí)酒量一般應(yīng)控制在12%左右。腌制腐乳時(shí),隨著豆腐層的加高增加鹽的用量。(5)植物組織培養(yǎng)中,先使用生長(zhǎng)素,后使用細(xì)胞分裂素,有利于細(xì)胞分裂,但細(xì)胞不分化。(6)生長(zhǎng)素用量比細(xì)胞分裂素用量,比值高時(shí),有利于根的分化、抑制芽的形成。1酵母菌是一種真菌,與人們的日常生活密切相關(guān),也是現(xiàn)代技術(shù)
4、研究常用的模式生物,請(qǐng)回答:(1)土壤中富含各種微生物,將其浸出液接種到特定培養(yǎng)基上,可得到酵母菌,這一過(guò)程叫做_,這種特定培養(yǎng)基可稱(chēng)為_(kāi)。 (2)用酵母菌發(fā)面做饅頭時(shí),在發(fā)酵的面團(tuán)里加入一些純堿的主要作用是_。(3)制作果酒時(shí),將酵母菌加入到葡萄汁中,控制好發(fā)酵條件,10 d后得到散發(fā)著酒香的成品,此過(guò)程的原理是_。(4)蘋(píng)果醋也是受現(xiàn)代人所青睞的健康飲品之一,其生產(chǎn)過(guò)程中則利用了代謝類(lèi)型為_(kāi)的_的發(fā)酵作用,該過(guò)程需要控制的溫度條件是_。解析:土壤浸出液接種到特定培養(yǎng)基上,可得到酵母菌,這屬于酵母菌的分離,所用的特定培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基。用酵母菌發(fā)面做饅頭時(shí),酵母菌呼吸作用產(chǎn)生二氧化碳,二氧化
5、碳溶于水形成碳酸,發(fā)酵的面團(tuán)里加入一些純堿可中和碳酸。酵母菌釀酒是利用酵母菌無(wú)氧呼吸能產(chǎn)生酒精。果醋是醋酸菌的發(fā)酵產(chǎn)物,發(fā)酵溫度為3035 ,醋酸菌的代謝類(lèi)型為異養(yǎng)需氧型。答案:(1)酵母菌的分離選擇培養(yǎng)基(2)中和發(fā)酵時(shí)產(chǎn)生的酸類(lèi)物質(zhì)(3)在無(wú)氧條件下,酵母菌進(jìn)行酒精發(fā)酵(4)異養(yǎng)需氧型醋酸菌3035 二、酶的應(yīng)用1探究溫度和pH對(duì)酶的影響實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,應(yīng)先將底物或酶溶液處理成相應(yīng)的溫度或pH,再將底物與酶混合。2在探究酶的最適溫度或pH時(shí),溫度梯度或pH梯度不能設(shè)置得太大,否則就算某種溫度下反應(yīng)最快,也不能稱(chēng)為最適溫度或最適pH。3果膠酶和纖維素酶都是復(fù)合酶,并不特指某一種酶,而是一類(lèi)酶的總
6、稱(chēng)。4固定化細(xì)胞使用的都是活細(xì)胞,在應(yīng)用時(shí)要注意為其提供適宜的生存條件,故固定化酵母時(shí),海藻酸鈉溶化后需冷卻后再與酵母液混合。5影響果膠酶活性的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)技巧在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)影響果膠酶活性的因素時(shí),要注意以下幾點(diǎn):(1)無(wú)論是研究溫度,還是研究pH對(duì)酶活性影響時(shí),注意設(shè)置合適的梯度。(2)實(shí)驗(yàn)時(shí),要保證酶促反應(yīng)在恒溫或恒定酸堿度的條件下進(jìn)行,否則,會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。(3)必須設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn),這就要求在實(shí)驗(yàn)中,所用一切試劑,包括蒸餾水,都要做到量的一致性,保證唯一變量,盡量避免干擾因素。(4)梯度實(shí)驗(yàn)是無(wú)法得到酶的最適溫度或最適酸堿度的,只能得到一個(gè)大致的適宜范圍。2實(shí)驗(yàn)研究pH對(duì)酶活性的影響,準(zhǔn)備5支
7、含有等量胃蛋白酶溶液但pH各不相同的試管,每支試管加1塊1 cm3的正方體凝固蛋白塊,試管均置于25 室溫條件下,將各試管中蛋白塊消失的時(shí)間記錄于下表:(1)酶活性最強(qiáng)時(shí)的pH是_。(2)蛋白塊消失的時(shí)間與酶活性強(qiáng)弱的關(guān)系是_。(3)請(qǐng)以?xún)煞N方法改進(jìn)實(shí)驗(yàn),使實(shí)驗(yàn)在更短的時(shí)間內(nèi)完成:_;_。(4)在人體消化道中,能分泌這個(gè)實(shí)驗(yàn)中酶的部位是_。(5)為了確認(rèn)蛋白塊的消失是由于酶的作用,還需要對(duì)該實(shí)驗(yàn)如何設(shè)計(jì)?_。解析:本題考查了酶活性的影響條件及其實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。在其他條件相同的情況下,利用酶的特性和有關(guān)生物學(xué)知識(shí),設(shè)計(jì)一定的濃度梯度進(jìn)行對(duì)照,記錄酶分解完蛋白塊的時(shí)間,判斷蛋白酶的適宜pH。答案:(1)
8、2.0(2)酶活性越大,蛋白質(zhì)分解越快,蛋白塊消失的時(shí)間越短(3)將題干所給溫度由25 升高至大約37 將原題中正方體蛋白塊處理得更小(如切成0.50.50.50.125 cm3)(4)胃(5)另增加一支試管,放入等量的蛋白塊,并且將pH調(diào)得適當(dāng),但不加酶溶液一、測(cè)定微生物數(shù)量的方法1顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(1)原理:利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。(2)方法:用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。(3)缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌。2間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)(1)原理:當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌,通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出
9、樣品中大約含有多少個(gè)活菌。(2)方法:平板劃線(xiàn)法、稀釋混合平板法、稀釋涂布平板法。(3)缺點(diǎn):當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上觀(guān)察到的是一個(gè)菌落。(4)注意事項(xiàng):設(shè)置重復(fù)組,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。 1(2013年崇文模擬)請(qǐng)回答下列與大腸桿菌有關(guān)的問(wèn)題:(1)從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看,大腸桿菌屬于_;它的同化作用類(lèi)型是_。(2)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方。將上述物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容到1 000 mL。根據(jù)用途劃分該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基(選擇、鑒別)。該培養(yǎng)基中的碳源是_。(3)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí),常用的接種方法
10、是平板劃線(xiàn)法和_。為防止雜菌污染需要對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行_。(4)現(xiàn)有一升水樣,用無(wú)菌吸管吸取1 mL水樣至盛有9 mL無(wú)菌水的試管中,依次稀釋103稀釋度。各取0.1 mL已稀釋103倍的水樣分別接種到三個(gè)培養(yǎng)基上培養(yǎng),記錄的菌落數(shù)分別為55、56、57,則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為_(kāi)。(5)以下微生物發(fā)酵生產(chǎn)特定產(chǎn)物時(shí),所利用主要微生物的細(xì)胞結(jié)構(gòu)與大腸桿菌相同的是(多選)_。A制作果酒B由果酒制作果醋C制作泡菜 D制作腐乳(6)利用培養(yǎng)基不僅可以分離培養(yǎng)微生物,也可以進(jìn)行植物組織培養(yǎng)。與微生物培養(yǎng)明顯不同的是,用于組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中還需要加入_。解析:(1)大腸桿菌不能制造有機(jī)物,必須利用現(xiàn)
11、成的有機(jī)物來(lái)合成組成自身的物質(zhì),屬于異養(yǎng)型生物,在生態(tài)系統(tǒng)中主要分解有機(jī)物,屬于分解者。(2)根據(jù)表中培養(yǎng)基的組成可看出,該培養(yǎng)基中的碳源是乳糖、蔗糖(蛋白胨),由于在培養(yǎng)基中添加了顯色劑,可判斷此培養(yǎng)基為鑒別培養(yǎng)基。(3)培養(yǎng)大腸桿菌等微生物時(shí),常用的接種方法是平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法。為防止雜菌污染需要對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌。(4)根據(jù)公式計(jì)算:每升原水樣中大腸桿菌數(shù)(555657)30.11031035.6108。 (5)制作果酒用到的微生物是酵母菌,屬于真核生物;由果酒制作果醋和制作泡菜用的微生物分別是醋酸菌和乳酸菌,二者都是原核生物;制作腐乳用到的微生物是霉菌,屬于真核生物,而大
12、腸桿菌屬于原核生物。(6)植物組織培養(yǎng)與微生物培養(yǎng)明顯不同的就是,組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中還需要加入植物激素(主要是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素,作用是誘導(dǎo)根、芽的分化)。答案:(1)分解者異養(yǎng)型(2)鑒別乳糖、蔗糖(蛋白胨)(3)稀釋涂布平板法滅菌(4)5.6108(5)BC(6)植物激素(或生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素)二、PCR技術(shù)及植物組織培養(yǎng)1比較細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制與體外DNA擴(kuò)增(PCR)2.分離DNA、PCR技術(shù)、分離蛋白質(zhì)三者比較3.歸納外植體污染的原因植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長(zhǎng),如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培養(yǎng)物一
13、旦受到微生物的污染,就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄,因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作。(1)培養(yǎng)材料的取材應(yīng)很好地加以選擇,老的材料比幼嫩的材料帶菌多,田間比溫室生長(zhǎng)的材料帶菌多。(2)消毒材料不徹底,植物組織只能進(jìn)行表面滅菌,對(duì)材料內(nèi)部所帶的細(xì)菌、霉菌等雜菌往往難以對(duì)付,可在培養(yǎng)基中添加抗生素解決。(3)人為污染,如使用未消毒工具或呼吸排出細(xì)菌;手接觸材料或器皿邊緣,使用過(guò)操作器具未消毒而再繼續(xù)使用,造成交叉污染;接種室空氣污染,使真菌孢子在培養(yǎng)基上繁殖。2多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。請(qǐng)回答下列有關(guān)PCR技術(shù)的基本原理及應(yīng)用問(wèn)題。(1)DNA的兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械?,通常將_的末端稱(chēng)為5端,當(dāng)引物與DNA母鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合后,DNA聚合酶就能從引物的_開(kāi)始延伸DNA鏈。(2)PCR利用DNA的熱變性原理解決了打開(kāi)DNA雙鏈的問(wèn)題,但又導(dǎo)致了DNA聚合酶失活的新問(wèn)題。到20世紀(jì)80年代,科學(xué)家從一種Taq細(xì)菌中分離到_,它的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用解決了上述問(wèn)題。要將Taq細(xì)菌從其他普通的微生物中分離出來(lái),所用的培養(yǎng)基叫_。(3)PCR的每次循環(huán)可以分為_(kāi)三步。假設(shè)在PCR反應(yīng)中,只有一個(gè)DNA片段作為模板,請(qǐng)計(jì)算在5次循環(huán)后,反應(yīng)物中大約有_個(gè)這樣的DNA片段。解析:(1)DNA聚合酶只能把新的核苷酸加到已經(jīng)存在的核酸的3羥基上,與DNA
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