癲癇動(dòng)物模型

1、癲癇的動(dòng)物模型、簡介癲癇癥是最常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一,其患病率在一般人口中每100隊(duì)約有5人。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的定 義，癲癇癥是由先天或后天不同因素所引起的慢性腦疾病，其特征是反復(fù)性驚厥發(fā)作，伴隨不同的臨床和腦電圖 的表現(xiàn)。因此，癲癇癥(epilepsy)是一反復(fù)發(fā)作的臨床候群，而因一W生異常的一次腦細(xì)胞放電所引起的神經(jīng) 系統(tǒng)功能失常稱為，原厥(Seizure),驚厥是M際的行為活動(dòng)，一次驚厥發(fā)作不一名!示有癲病癥。目前，國內(nèi)所用的癲癇分類方法是以國際抗癲癇聯(lián)盟(ILAE)1981陰口 1985年的分類法。但為了兼顧臨床 和實(shí)驗(yàn)室研究，本章所討論的癲癇現(xiàn)象主要根據(jù)1981年的分類，此分類法主要

2、以臨床表現(xiàn)及EE依據(jù)將癲癇 分為：全身性和部分性癲癇。迄今研究人類癲癇的發(fā)病機(jī)理仍主要依靠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，癲癇產(chǎn)生機(jī)制的探討及最新進(jìn)展亦多直接或間接來于 動(dòng)物模型研究。目前已有數(shù)十種動(dòng)物模型應(yīng)用于癲癇研究，選擇適宜的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ腿Q?所需解決的問題、所需的 癲癇類型，與臨床發(fā)作的T性以及是否簡單可靠。因此，選擇適當(dāng)、有價(jià)值的癲癇動(dòng)物模型是有效研究巔癇機(jī) 制及治療的捷徑。現(xiàn)已發(fā)展并建立了類似臨床癲癇類型的多種癲癇模型(表I),包括整體與離體、腦片與細(xì)胞模 型，為探討癲癇形成的機(jī)帶吸觀察藥物治療療效提供了有利的工具。然而，如何合理、適當(dāng)?shù)貞?yīng)用這些動(dòng)物模型 是我們進(jìn)行研究時(shí)首先應(yīng)當(dāng)考慮的，否則既浪費(fèi)時(shí)間、精力

3、與錢財(cái)，又不能得到可靠的結(jié)果。以下分別介紹各種 類型癲癇動(dòng)物模型的利與弊。1.急性簡單部分性表面致驚劑青霉素荷包牡丹堿印防已毒3.1.急性簡單部分性表面致驚劑青霉素荷包牡丹堿印防已毒3.復(fù)雜部分性卡因酸Tetanus toxin點(diǎn)燃4.6.腦組織海馬腦片原代分離細(xì)胞培養(yǎng)人類神經(jīng)組織全身強(qiáng)直-陣攣 7.癲癇持續(xù)狀態(tài)士的寧膽堿能藥物 急性電刺激 去除癇持續(xù)狀態(tài)士的寧膽堿能藥物 急性電刺激 去除GABA 新皮層腦片2.慢性簡單部分性 皮層埋置金屬 氫氧化鋁鉆鴇鐵冷凍損傷聽源性驚厥小鼠Totterer 和 E1 小鼠遺傳性癲癇易感大鼠蒙古沙土鼠最大電休克化學(xué)致驚劑代 謝 性 derangements5

4、.全身性失神神經(jīng)節(jié)甘脂抗體注射 靜脈注射致癇劑二急性簡單部分性癲癇慟1這類模型1組急性皮層損傷所致的驚厥放電。在臨床這樣的損傷如顱內(nèi)膿腫、腫瘤或血腫可引發(fā)驚厥， 然后發(fā)展為慢性隱匿性反復(fù)性發(fā)作。而動(dòng)物模型只出現(xiàn)單次原厥，不發(fā)展為慢性驚厥。造成這類模型的方法較多，如給予大腦皮層表面致驚劑：青霉素、荷包牡丹堿、印防已毒（為抑制性神經(jīng)遞 質(zhì)GABAB劑），或直接急性電刺激皮層組織，或消除抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GAB或以化學(xué)致驚劑誘發(fā)新皮層腦片放 電等方法。其中應(yīng)用最廣泛的是以青霉素涂于動(dòng)物大腦皮層麥面的方法，即以含1.7-3.4mMT霉素棉棒涂于大 鼠或貓的腦皮層，數(shù)分鐘后即可記錄到病灶區(qū)的發(fā)作性、單向反復(fù)

5、性、傾向同步化的棘波放電，此模型適合研究 ，IW活動(dòng)白怖散和癲癇產(chǎn)生的神經(jīng)元基礎(chǔ)等問題。研究表明彳崎J量的青霉素放于培養(yǎng)中的神經(jīng)元、麻醉動(dòng)物的大 腦皮層或海馬腦片中可選擇性阻斷GABA導(dǎo)的抑制性突觸后電位（IPSPs）,而高劑量的作用則缺乏特異性。急性模劈勺缺點(diǎn)是：（1）每種藥物有各自特性，而此特性與癲癇產(chǎn)生的關(guān)系甚少，如青霉素酶可拮抗青霉素 慟的癲癇，但不能拮抗其它類型的癲癇產(chǎn)生，（2）急性模型的建立是依靠強(qiáng)烈的刺乳 病灶中許多細(xì)胞參與癲 癇活動(dòng)，其參與程度大大超過人類病灶的實(shí)際神經(jīng)元數(shù)量，（3）急性慟1僅持續(xù)數(shù)分鐘到數(shù)小時(shí)，而不導(dǎo)致反復(fù) 性原厥，并且，慟1無臨床病人組織中常見的神經(jīng)元，樹突

6、，膠質(zhì)細(xì)胞和局部神經(jīng)環(huán)路形態(tài)學(xué)的病理改變，（4） 建立此模型時(shí)，動(dòng)物需要麻醉，而麻醉可能影響實(shí)驗(yàn)。三、慢性簡單部分性癲癇核型此類模型白鍵立方法包括：在貓或候的腦皮層植入二價(jià)金屬離子（氫氧化鋁、鉆、鋅、鴇等）、冷凍損傷、 注射神經(jīng)節(jié)f脂抗體、靜脈給予致驚劑等，其中最有瓶勺和實(shí)際的癲癇模型是在腦內(nèi)植入二價(jià)金屬離子產(chǎn)生“自 發(fā)性”放電狀態(tài)的簡單部分性，原厥，如：在猴子或貓的新腦皮層適當(dāng)部位注射4%氫氧化鋁，在一到二周后可產(chǎn) 生自發(fā)的反復(fù)性驚厥，這種狀態(tài)可持續(xù)數(shù)年。此類癲癇模W勺發(fā)作行為、發(fā)作間發(fā)作后EEG?。「淖兗翱雇此?物效果均近似人類簡單部分性癲癇。如：鋁離子損傷可誘發(fā)對(duì)側(cè)的面部或肢體末端抽搐，

7、偶爾也發(fā)展成為全身性 強(qiáng)直陣攣性驚厥,發(fā)作期與間歇期的腦電圖特征與臨床病人類似，神經(jīng)病理顯示膠質(zhì)細(xì)胞增生、神經(jīng)樹突扭曲。 該模型的優(yōu)點(diǎn)是適于研究從腦病理損傷，癲癇產(chǎn)生，直至發(fā)展全過程中的機(jī)理。四、復(fù)雜部分性癲癇慟1復(fù)雜部分性癲癇通常起源于邊緣系統(tǒng)，包括杏仁核、海馬、顆葉新皮層等結(jié)構(gòu)，目前常用的模型包括卡因 股致驚、破傷風(fēng)毒素致驚、點(diǎn)燃致驚模型。由于點(diǎn)燃模型是目前被公認(rèn)為研究腦細(xì)胞興奮B、可塑性及長時(shí)程增 強(qiáng)（LTP學(xué)習(xí)與記憶等問題的最實(shí)用的動(dòng)物模型。以下重點(diǎn)介紹點(diǎn)燃慟1的建立方法。點(diǎn)模型點(diǎn)燃是指給？某一腦區(qū)重復(fù)的亞IW強(qiáng)度的刺激（通常是電刺激）造成正常動(dòng)物強(qiáng)直-陣攣性原厥的過程。 點(diǎn)燃一旦建立

8、，這種腦細(xì)胞及原厥行為的敏感性可長期維持，及至動(dòng)物終身。點(diǎn)燃動(dòng)物在腦電活動(dòng)的特征是后放 電（afterdischarges）。除了后放電以外，點(diǎn)燃動(dòng)物還表現(xiàn)為后放電的閾值降低。因此，點(diǎn)燃的實(shí)質(zhì)是出現(xiàn)長時(shí) 程的廣泛的腦電圖的原厥（后放電）伴隨行為驚厥及后放電閾值降低。電刺激是誘發(fā)后放電最簡單方便的方法。?電刺激部位大多在邊緣系統(tǒng)包括：海馬、內(nèi)嗅皮層、梨狀皮層、新腦皮層和基底部結(jié)節(jié)，而杏仁核是最常 用的點(diǎn)燃部口 因其所需的刺激次數(shù)火大約14次），在杏仁核、海馬和新腦皮層通過司機(jī)激誘發(fā)的腦電及行為 ，IW模型各不相同。杏仁核誘發(fā)出的后放電時(shí)程較短（大約1A15秒），而海馬誘發(fā)的后放嶺長（大約2560

9、 秒）并伴有典型“濕狗樣色T的行為改變，如果反復(fù)給予電刺激最終都可誘發(fā)強(qiáng)直-陣攣性驚厥。由于點(diǎn)燃過程中的一些現(xiàn)象及行為表現(xiàn)與人類復(fù)雜部分性癲癇相似，如：皮層內(nèi)電極記錄的EEGE現(xiàn)，相 似的驚厥行為表現(xiàn),并者阿誘發(fā)全身性，原厥，以及對(duì)傳統(tǒng)抗癲癇藥物如安定、苯巴比妥、苯妥英鈉、Valproicacid 都具有的敏感性等，近年的研究發(fā)現(xiàn)，點(diǎn)燃能導(dǎo)致海馬內(nèi)神經(jīng)元脫失，苔群纖維出芽和突觸重建，膠質(zhì)斑展形成 等，提示該模型與人類復(fù)雜部分性驚厥的相似性。點(diǎn)燃模型的優(yōu)點(diǎn)：建立該模型較方便，并且一旦建成若其腦內(nèi)高度興奮性神經(jīng)元司永久存在，并可探討癲 癇W究中的三個(gè)核心問題：（1）神經(jīng)高度興奮成伽制?（2）高度興

10、奮W可保持？（3）高度興奮W可發(fā)展？對(duì)這 些問題的解釋有利于更有效的治療、預(yù)防癲癇的發(fā)生與發(fā)展。最常用的點(diǎn)燃方法是以電刺激杏仁核（在各類動(dòng)物均可，常用大鼠），在杏仁核植入雙極電板，手術(shù)后一周, 每天給予電刺激（常規(guī)為0.2 1.0mA,60Hz,2秒），大致12周內(nèi)可記錄至?xí)r電刺激產(chǎn)生的后放電后，放電逐 漸趨于延長復(fù)雜化，此時(shí)，可稱為點(diǎn)燃建立，在以后的數(shù)周內(nèi)，動(dòng)物表現(xiàn)為“自發(fā)性”的癲癇也原厥，即正常的 腦細(xì)胞傳入刺激亦可激發(fā)后放電。Racine艮據(jù)點(diǎn)燃過程中動(dòng)物原厥表現(xiàn)將點(diǎn)燃狀態(tài)分為V級(jí)：I級(jí)：面部陣攣， II級(jí)：面部陣攣伴節(jié)律點(diǎn)頭，III級(jí)：面部陣攣、點(diǎn)頭、單肢陣攣、IV級(jí)：III級(jí)+后肢站

11、立，V級(jí)：IV級(jí)+跌 倒。？IV和V級(jí)可作為繼發(fā)隹全身也堪癇模型。（一）、材料體重 30cH 32誠的雄性 SD（Sprague-Dawley鼠.動(dòng)物定位儀.四導(dǎo)生理記錄儀.生理計(jì)數(shù)器.雙極電極（饃銘含金、直徑254um）直徑、電阻.恒溫冷凍切片機(jī)（二卜電極岬以50mg/k或巴比妥，腹腔注射麻醉動(dòng)物。將麻醉后動(dòng)物固定于立體定位儀上，保持前后因在水平面。 于頭顱正中縱向切開皮膚，止血，分離顱間肌肉，骨膜以3%HO脫脂，務(wù)使顱骨表面保持干燥。右側(cè)杏仁核立體 定位座標(biāo)為：前因中后0.8mm中線右側(cè)4.8mm項(xiàng)端表面垂直進(jìn)入深度8.5mm鉆孔、插入電極，再以牙科水泥 固定電極。觀察呼吸、循環(huán)1小時(shí)。點(diǎn)

12、燃實(shí)驗(yàn)于動(dòng)物恢復(fù)TW后進(jìn)行。（三卜電刺激與參數(shù)電刺激每 12次，刺激參數(shù)：單機(jī)方法、0.11.0mA 60Hz 12秒。每次刺激后，立即用同一電極 記錄腦電、并觀察記錄動(dòng)物行為。動(dòng)物驚厥達(dá)V級(jí)時(shí)可稱為點(diǎn)燃（Kindled）,連續(xù)5次V級(jí)的原厥被稱完全點(diǎn)燃（FullyKindled）。（四）、驚厥閾值的測定在1分鐘內(nèi)連續(xù)0.1mA的電刺激及遞加0.1mA首次誘發(fā)出后放電時(shí)的電流量稱為后放電閾值 （afterdischargesthreshold,ADT%慢性點(diǎn):燃是以低于后放電閾值的電流刺激動(dòng)物某內(nèi)核團(tuán)，直到動(dòng)物被點(diǎn) 燃。全身驚厥閾值（generalizedseizurethreshold,GS

13、T）i指在完全點(diǎn)燃動(dòng)物中，每天給予穩(wěn)定的刺激強(qiáng)度，連 續(xù)四天都可造成4或5級(jí)原厥，GSTT應(yīng)用于抗癲癇藥物治療效果的監(jiān)測。（五卜組織學(xué)檢查點(diǎn)燃部位以戊巴士接鈉麻醉后，剪開胸腔，以生理鹽水心臟灌流，再以4%多聚郵灌流，430分鐘。剪碎顱骨， 搭I(lǐng)取出腦組織，液氮內(nèi)冷凍后，于20C恒冷箱切片機(jī)內(nèi)平衡溫度，切片（12um）檢查叫尖端位置，肉目必 察或克紫染色在顯微鏡下觀察電極周圍神經(jīng)細(xì)胞情況。（六）傳統(tǒng)的點(diǎn)燃方法認(rèn)為，串間間隔低于20分鐘的電刺激不能使動(dòng)物點(diǎn)燃，神年來國外文獻(xiàn)報(bào)道：低于20 分鐘的串間間隔的電刺激也同樣能使動(dòng)物點(diǎn)燃，并使點(diǎn)燃所需時(shí)間明顯縮短，點(diǎn)燃動(dòng)物M有與傳統(tǒng)點(diǎn)燃一樣的屬 性，稱為快

14、速點(diǎn)燃。除刺激參數(shù)外其余的方法與傳統(tǒng)自燃一樣。刺激參數(shù)：頻率16Hz波寬1ms串長10s,串間間 隔5min強(qiáng)度400uA恒流脈沖刺激。五、全身也雖直一陣攣f生原厥慟!！這類模型包括遺傳性全身性驚厥動(dòng)物模型、最大電休克模型、化學(xué)藥物致原慟1。目前應(yīng)用較多的是遺傳 性動(dòng)物，但迄今尚未發(fā)現(xiàn)與人類的發(fā)T4全身強(qiáng)直陣攣，也羸癇近似的動(dòng)物慟1。從各種遺傳雙種系中所選動(dòng)物, 其誘發(fā)癲癇發(fā)作所用的刺激，以及它們伴有的非原厥性異常均與人類不同。理想的25次/秒間歇閃光刺激敏感 的狒狒癲癇模型，因價(jià)格昂貴難于管理而不實(shí)用。目前多用遺傳性癲癇易感小鼠及大鼠模型，并已有專門的實(shí)驗(yàn) 室進(jìn)行同種近親繁殖的種系（如美國J

15、ackso偵驗(yàn)室）。Noebel近年已證實(shí)在1種伴自發(fā)驚厥及5種對(duì)感官刺激 驚厥易感的小鼠系中，每種均由單基因位點(diǎn)突變引起。如聽源性驚厥（1216Hz鈴聲誘發(fā)）易感的DBA/2J（audiogenicseizures,AGS）,TottereT鼠系等。DBA/2J勺易感性在生后24周最高，按發(fā)作行為不同 評(píng)分，EEGHW跑期0不易記錄，近年通過廣泛神經(jīng)生化研究發(fā)現(xiàn)可育瞅少鈣依賴的ATPWo Totterer（tg/tg） 小鼠表現(xiàn)出癲癇及EEGI常并同時(shí)有遺傳性共濟(jì)失調(diào)，已證實(shí)其海馬及藍(lán)斑等區(qū)N掰濃度及神經(jīng)末梢發(fā)量增多。 在大鼠中，遺傳f生癲癇易感大鼠（geneticallyepilepsyp

16、oonerat,GEPRjW源性刺激、高溫、電、化學(xué)及點(diǎn)燃等 刺激誘發(fā)的癲癇均易感，較小鼠更適宜于電生理研究?，F(xiàn)今國際常用的GEP是從S狄鼠中分離出的，分為高度 易感的GEPR9及中度易感白GEPR3,均以出生后24周易感性最高。1977年由北京醫(yī)科大學(xué)藥理教研室從Wiatar大鼠中篩選出的一種對(duì)聲音刺激易感的驚厥大鼠P77PM密 過2代以上近親交配，保留繁殖。P77PMC鼠的驚厥易感性具有兩種特性：遺傳性；（2）刺激誘發(fā)全身發(fā)作性 驚厥的易感性，該鼠系具有與國際通用的GEP相同的特性。GEP勘物表現(xiàn)的原嬲寺性與人類巔癇類似，首先，可表現(xiàn)自發(fā)性驚厥，（EEGa察）,其次低劑量的某些藥 物可誘發(fā)

17、強(qiáng)烈的驚厥，再次，對(duì)外界刺激（聲音刺激）的易感性。已發(fā)現(xiàn)GEPR：鼠腦內(nèi)*乏存在X茶酚胺介質(zhì)改變，興奮及抑制性神經(jīng)遞質(zhì)改變，幼年GEPR丘處GABA 合成酶GAD疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元顯著增加等，并且推測下丘是其驚厥起發(fā)點(diǎn)，而前腦班珞是該鼠衍化為全身強(qiáng)直 陣攣性原厥的關(guān)鍵部位。遺傳性動(dòng)物慟1較人工致成癲癇更符合自然性，并有助于探討驚厥活動(dòng)的產(chǎn)生及傳播 通路及各腦區(qū)神經(jīng)遞質(zhì)、調(diào)質(zhì)的變化情況。人工致全身性癲癇模型的化學(xué)藥物見（表II）。最大電休克滋（Maximalelectroshock,MES是歷史悠久的模型，電流（小鼠50mA大鼠150mAi過耳殼或角膜也吸產(chǎn)生暈厥，面部及前肢陣攣為最小電休克，產(chǎn)生

18、后肢強(qiáng)川生伸展及屈曲繼m陣攣W為MES適于篩選抗W藥。凡可挪|J ME宓藥可作為治T全身也巔W候選藥物。表II :全身性化學(xué)致癇劑藥物動(dòng)物劑量及給藥途徑(mg/kg)PTE (戊四口坐)小鼠85 S.C ,50 -75i.p. ,50i. v大鼠70 S. C ,40 i.p貓20 i.v青霉素大鼠60 萬 IU,肌注貓30 萬 IU ,肌注美解眠 9 bemegride )大鼠21 i.pER 防已毒(picrotoxin )小鼠3.2 S.C.狗2.0 i.v荷包 牡丹堿(bicuculline)小鼠2.7 S.C.猴0.3 i.v士的寧(strychnine )小鼠1.5 S.C.MSD

19、大鼠200 i.p烯丙基甘氨酸狒狒550 i.v三氟二酸小鼠1.5 ml全吸入同型脫氨酸(homocysteine)小鼠875 i.pN - methyL-DASP (NMDA)小鼠340S.C. , 105 i.v(弓I 自 Fisher RS. Brain Rec. Rev 1989 ; 14 : 245 - 278 )六、全身失W性癲癇遺傳性先申性癲癇大鼠(GAER)一種Wistar大系雜交而得，經(jīng)三次交配以后，10a的成年大鼠有自 發(fā)性驚厥，其特點(diǎn)為瞪眼，運(yùn)動(dòng)停止，跌倒、擺動(dòng)樣抽動(dòng)。EEGI現(xiàn)為發(fā)作日7-11HZ勺棘波放電，持續(xù)0。5- 40秒，發(fā)作間期正常。GAE的自發(fā)性原厥與年齡有

20、關(guān)，隨年齡增長原厥頻率增多，持續(xù)時(shí)間延長。雌鼠較雄鼠 的原厥發(fā)生率高。丘腦與皮層的相互作用與驚厥的發(fā)生有關(guān)，黑質(zhì)及皮層網(wǎng)狀系統(tǒng)對(duì)其發(fā)病有調(diào)節(jié)作用。GAER 的原厥機(jī)帶愎雜，結(jié)論不一，可能與GABAVL茶酚胺類神經(jīng)介質(zhì)異常有關(guān)。七、體外培養(yǎng)中的腦組織、腦片或細(xì)胞癲癇模型的產(chǎn)生海馬腦用0.5mm或手術(shù)切除的人類癲癇病灶，在體外以人工腦脊液CSF學(xué)育可存活18小時(shí)以上，因無血 腦屏障及麻醉影響，適于細(xì)胞內(nèi)電生理研究如海馬CA3田胞起搏點(diǎn)，PDS離子及電生理機(jī)制等，有助于了解發(fā)作 間與發(fā)作期的過渡。體外腦細(xì)胞原代分離單層培養(yǎng)是將胚胎或新生動(dòng)物不同腦區(qū)組織通過機(jī)械及酶處理后，接種 于平面培養(yǎng)皿中，細(xì)胞可

21、在體外培養(yǎng)中存活發(fā)育，亦可形成突觸。適于研究細(xì)胞一細(xì)胞間的聯(lián)系，并通過斑片鉗 技術(shù)在單個(gè)神經(jīng)元研究膜、離子通道及突觸功能與癲癇產(chǎn)生的關(guān)系及各種影響因素。缺火是存在機(jī)械損傷及缺血 缺氧等因素影響。以下著重介紹頹葉皮層腦片制備及電描記方法。腦片研究的優(yōu)點(diǎn)是（1）腦片內(nèi)的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)是有限的，其放電活動(dòng)必然來源于這些神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，而非其它部位的 投射；（2）腦片的環(huán)境是可控的，易改變灌械的離子濃度和氣體含量，并且易檢測給藥的細(xì)胞外環(huán)境濃度。 顆葉腦片彳瞄!誘發(fā)放就莫型的建立：（一）、顆葉皮層腦片解剖顆葉皮層腦片包括新皮層顆葉皮層3區(qū)（Te3）,內(nèi)嗅皮層（EC）,齒狀回，海馬CA1 CA軌等（圖1）。內(nèi)嗅 皮

22、層（EC藤受來自不同的新癡皮層區(qū)，皮層下結(jié)構(gòu)、邊緣系統(tǒng)如腦干結(jié)構(gòu)的投射，再投射到海馬結(jié)構(gòu)。內(nèi)嗅皮層 襁元投射通過穿行通路到海馬齒狀回顆粒細(xì)胞，顆粒細(xì)胞發(fā)苔葬樣纖維投射到同側(cè)齒狀回門區(qū)神經(jīng)元，及CA3 區(qū)錐體神經(jīng)元，CA數(shù)錐體神經(jīng)元再發(fā)出軸突投射到CA1K錐體神經(jīng)元、內(nèi)嗅皮層到海馬的侵入活動(dòng)就是以此三 角形突觸好式完成的。內(nèi)嗅皮層分6層：1、叢狀層，2、衛(wèi)星細(xì)胞層，3、表淺錐體細(xì)胞層，4、深錐體細(xì)胞層， 5、小錐體細(xì)胞層，6多形細(xì)胞層。圖1、成年大鼠顆呻胸片解剖水平示意圖（二卜顆葉皮層腦片制備:急性斷頭，打開顱骨,分離硬腦膜,分離全腦并快速放于35c預(yù)冷的人工腦脊液（ACS叩,ACS成分（mM）

23、 為：NaCl124.0 Kcl3.0,MgSO41.8,CaCl21.6,NaH2PO41.3,NaHCO326.0,Glucose10.0,PH7.皿7955 o25%co2平衡。去除小腦，切開兩側(cè)半球，大腦半球的中間切面朝r入在濕潤的濾紙上，切除大腦半球的前 三分之二部分，然后將后三分之一部分切面朝下放在組織切片機(jī)側(cè)刀的小盤上，除支基底部分的四分之Tfi織， 精細(xì)切下68片400um勺腦片。該腦片包括的結(jié)構(gòu)有：酸葉皮層小區(qū)，內(nèi)嗅皮層，大腦腳和海馬結(jié)構(gòu)（圖2）。圖2。制備頸葉腦片水平示意圖（三卜灌流液及灌流槽：將腦片放F聚氯乙烯灌槽小室內(nèi)的聚胺篩網(wǎng)上，用預(yù)熱（35。C）,以蠕動(dòng)泵將（95%O2-5%CO2ACS峙續(xù) 灌流，1小時(shí)左右，使腦片活f怵本恢復(fù)生理狀態(tài)爾后在內(nèi)嗅皮層IV-V層或CA1Kg它區(qū)插入刺激詠或 細(xì)胞內(nèi)，外記錄電極或離子敏感電極，記錄各區(qū)放電情況，將結(jié)果記錄在描記紙上進(jìn)行分析。圖3。無Mg2+工腦脊液誘導(dǎo)顆葉腦片放電八、癲癇持續(xù)狀態(tài)許多化學(xué)致原劑大劑量給予可使嚙齒類動(dòng)物出現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)，如：卡因酸、*甲基-天門冬氨酸、 戊四瓶 六氟二乙酯、荷包牡丹堿等。近年，應(yīng)用較普遍的癲癇持續(xù)狀態(tài)的慟1是大鼠鋰一匹羅