技術培訓資料-無菌

1、 . . 6/6技術培訓資料：無菌檢查法無菌檢查法是指檢查要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料與要求無菌的其他物品是否染有活菌的方法。若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定，僅表明供試品在該檢驗條件下未發(fā)現(xiàn)污染。無菌檢查法直接接種法薄膜過濾法封閉式集菌儀開放式過濾器性狀允許，應采用此法一、無菌檢查前準備流程：無菌樣品、緩沖液排水盤、硅膠管培養(yǎng)基集菌培養(yǎng)器營養(yǎng)瓊脂平板浮游菌采樣儀消毒劑脫去外層用消毒劑擦拭外表面經(jīng)過傳遞窗紫外照射30分鐘潔凈室二、按照SOP要求更衣，進入潔凈室后流程：關閉紫外燈，打開操作臺調好風速用消毒劑擦拭操作臺面與相關區(qū)域將培養(yǎng)基樣品緩沖液排水盤等移入操作臺將浮游菌采樣儀移入潔凈室根據(jù)

2、做樣時間選擇何時采微生物樣安裝無菌檢驗系統(tǒng)，進行無菌檢查三、安裝無菌檢驗系統(tǒng)無菌檢驗系統(tǒng)外觀圖見下圖。，操作流程：1.裝好排水盤與硅膠管，確保排水盤上兩濾筒間間隔物已裝好。2.取出集菌培養(yǎng)器，檢查是否完好，并將其安裝在排水盤上。3.將與集菌培養(yǎng)器連接的軟管安裝到泵頭蓋中。4.檢查露在泵頭蓋兩端的軟管左右長度是否相等，確保其定位準確。5.左右拉動軟管，確保其走勢順暢。如果軟管不能自由被拉動，重復上面操作。6.確保泵頭蓋的右邊軟管與培養(yǎng)器不是繃緊狀態(tài)，否則需將軟管往右挪動點。7.通過“openclose”按鈕將泵頭蓋關上在未選擇“手動自動模式”前，泵頭蓋不能被關上。8.將培養(yǎng)器軟管上針頭扎入0.1

3、%無菌蛋白胨水沖液中，打開蠕動泵按下圖箭頭所指按鈕打開關閉蠕動泵，旋轉此按鈕調節(jié)轉速。泵入緩沖液40-50ml/桶，潤濕3-5分鐘。9.將紅色帽子戴在培養(yǎng)器頂部，將針頭從緩沖液中拔出，扎入樣品中。將一定數(shù)量的樣品通過、軟管分別泵入到兩個相互獨立的濾筒中。在過濾過程中，不間斷地螺旋狀振搖培養(yǎng)器，液面低時快速，高時慢速振搖，防止?jié)櫇衽囵B(yǎng)器上面的空氣濾膜。在過濾過程中可將培養(yǎng)器上紅色帽子拔下一會，釋放些氣體，防止泵入培養(yǎng)基時有抽不動現(xiàn)象。過濾過程中請勿打開泵頭蓋，防止軟管中液體倒吸入培養(yǎng)器中，并將濾膜吸起。為發(fā)揮濾膜的最大過濾效率，應注意保持供試品與沖洗液覆蓋整個濾膜表面。海超加替沙星氯化鈉注射液：

4、每柜冷點取20袋，每批任取一柜取20袋做陽性對照。海超加替沙星注射液：每柜冷點取20支，每批任取一柜取20支做陽性對照。田力轉化糖：每柜冷點取10袋，每批任取一柜取5袋做陽性對照。尼莫地平：每柜冷點取20支，每批任取一柜取10支做陽性對照。10.樣品過濾結束，根據(jù)每種樣品SOP要求的沖洗量進行沖洗或不沖洗。沖洗量田力轉化糖電解質注射液尼莫地平：過濾完不需沖洗，直接泵入相應培養(yǎng)基海超大輸液：過濾完每張膜沖洗900ml，共1800ml。海超水針：第一次用50ml沖洗，以后每次用100ml，共11次2100ml。11樣品過濾結束或沖洗液沖洗結束，關閉蠕動泵。將培養(yǎng)器上紅色帽子拿去，底部的排液管口用黃

5、色帽子堵上，將沖洗液取下?lián)Q上相應的培養(yǎng)基瓶。分別往兩個培養(yǎng)器中泵入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基與改良馬丁培養(yǎng)基各100ml。加培養(yǎng)基時泵速控制在110-120分/轉，防止速度過快培養(yǎng)基產(chǎn)生的泡沫浸濕呼吸器膜。泵一種培養(yǎng)基時，需將另一管在扎針處用夾子見下圖中藍色部分，標注clamp處。夾住。與時記錄實驗過程中發(fā)生的異常情況，以便偏差分析。12.培養(yǎng)基加好后停止泵，用夾子夾住靠近空氣過濾器頭軟管，通過“openclose”按鈕將泵頭蓋打開，取出軟管。12.在夾子上部適當位置剪下軟管，將軟管開口端套在空氣過濾器開口上。13.陽性對照陽性對照實驗每周進行一次，并在“無菌培養(yǎng)觀察記錄”上記錄；若一周內(nèi)生產(chǎn)兩種產(chǎn)

6、品或者更換產(chǎn)品時，則兩種產(chǎn)品需分別取樣進行陽性對照實驗。按照上面1-12步驟做完后，拿出潔凈區(qū)，在生物安全柜中接種含50-100cfu/ml陽性對照菌1ml。田力 轉化糖電解質注射液、信坦 尼莫地平注射液、轉化糖電解質注射液陽性對照菌為金黃色葡萄球菌。海超 加替沙星注射液、海超 加替沙星氯化鈉注射液陽性對照菌為金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌。14.陰性對照陰性對照實驗每天一次，若一天分上下午兩次實驗，則只需做一次即可。：按照上面1-8步驟做完后， 取同一批滅菌的0.1蛋白胨水溶液500ml進行薄膜過濾，后面步驟同11-12。四、無菌檢驗結束后流程：關閉無菌系統(tǒng)，清理工作臺面按照SOP要求更衣出潔凈室按照“潔凈室室管理程序”對潔凈室清潔消毒將實驗廢棄物、培養(yǎng)器、排水盤硅膠管等移入傳遞窗清理傳遞窗，將培養(yǎng)器放入相應溫度培養(yǎng)用消毒劑擦拭傳遞窗，打開紫外燈照射30分鐘清洗實驗用品，填寫相關記錄硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置于30-35培養(yǎng)14天，改良馬丁培養(yǎng)基置于23-28培養(yǎng)14天。陽性對照：將集菌培養(yǎng)器置于30-35下培養(yǎng)，48-72小時應生長良好。五、結果判斷：對所有培養(yǎng)管進行逐日觀察。培養(yǎng)14天后，無菌生長判合格；有菌生長時，符合6項條件之一則進行復試，否則判定不合格。六、復試條件：1.試驗環(huán)境與設備的微生物監(jiān)控結果不符合無菌檢查法的要求；2.回顧無菌試驗過程，發(fā)現(xiàn)有可能引