細(xì)胞組分分離和鑒定

1、關(guān)于細(xì)胞組分的分離與鑒定第一張，PPT共八頁，創(chuàng)作于2022年6月一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解用細(xì)胞勻漿和差速離心的方法分級分離 細(xì)胞組分的原理及過程。 熟悉離心機(jī)、勻漿器的使用方法。 第二張，PPT共八頁，創(chuàng)作于2022年6月二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 實(shí)驗(yàn)原理 細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)的比重和大小都不相同，在同一離心場內(nèi)的沉降速度也不相同，根據(jù)這一原理，常用不同介質(zhì)和不同轉(zhuǎn)速的離心法，將細(xì)胞內(nèi)各種組分分級分離出來。 此法是通過組織細(xì)胞勻漿、分級分離（密度梯度離心或差速離心）和分析三個(gè)步驟完成的。 第三張，PPT共八頁，創(chuàng)作于2022年6月 在密度均一的介質(zhì)中由低速到高速逐級離心，用于分離不同大小的細(xì)胞和細(xì)胞器。 在差速離心

2、中細(xì)胞器沉降的順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體、最后為核蛋白體。速度逐漸提高，樣品按大小先后沉淀 1.差速離心（differential centrifugation）第四張，PPT共八頁，創(chuàng)作于2022年6月 用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過重力或離心力場的作用使細(xì)胞分層、分離。常用的介質(zhì)為氯化銫，蔗糖和多聚蔗糖。2.密度梯度離心(density gradient centrifugation)第五張，PPT共八頁，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)方法 1. 處死家兔：耳緣靜脈空氣栓塞法2. 制備肝細(xì)胞勻漿: 家

3、兔處死后，立即剖腹取肝，迅速浸入預(yù)冷的 生理鹽水中洗去血污，用濾紙吸干。 按每克肝重加9ml冷的0.25mol/L蔗糖溶液勻漿 化。（20g9ml/g=180ml） 用八層紗布（先用少量蔗糖液濕潤），過濾勻 漿液于燒杯中。制備一張濾液涂片，做好標(biāo) 記，自然干燥。第六張，PPT共八頁，創(chuàng)作于2022年6月 每組取10ml濾液，3000r/min離心10min，制備一張上清液涂片，做好標(biāo)記，自然干燥。 吸去上清，用10ml 0.25 mol/L 蔗糖液懸浮沉淀物，用吸管混勻，配平后以3000r/min離心10 min。吸去上清液，加入0.5ml蔗糖溶液，用吸管吹打成懸液，制備一張涂片，做好標(biāo)記，自然干燥。 3.差速離心法分離細(xì)胞器 低速離心分離細(xì)胞核 高速離心分離線粒