辣椒紅色素的提取和檢測

1、辣椒紅色素的提取和檢測 2008.121一、實驗?zāi)康?、了解從辣椒中提取辣椒紅色素的基本原理和方法2、進一步掌握索氏提取、薄層色譜和吸光度測定等操作技術(shù)。2 紅辣椒中含有多種色素，其含量可高達3.2g/100g(成熟的干辣椒)，已知的有辣椒紅色素（C40H56O3，M=584.85gmol-1）、辣椒玉紅素（C40H56O4，M=600.85gmol-1）和-胡蘿卜素，它們都是類胡蘿卜素，在結(jié)構(gòu)上都屬于二環(huán)四萜化合物。辣椒紅色素是深紅色粘性液體或深胭脂紅色結(jié)晶的天然食用色素，并具有營養(yǎng)保健作用和抗癌能力。辣椒紅色素易溶于乙醇、丙酮、二氯甲烷、植物油而不溶于甘油和水。二、實驗原理34 辣椒中含有

2、強烈辛辣味的辣素（辣椒堿），含量一般為0.20.5。固態(tài)辣椒堿是白色或淡黃色針狀晶體，不溶于水，易溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿。 辣椒堿都是酰胺類化合物，通式為 O OCH3 RCNHCH2 OH 其酚羥基具有弱酸性，可溶于NaOH溶液中。 用有機溶劑提取紅辣椒中的辣椒紅色素過程中，需先除去辣椒堿，提取得到的辣椒色素經(jīng)濃縮、干燥后，可用薄層色譜進行分析分離，由分光光度法測定辣椒紅色素的色價及含量。5 儀器： 圓底燒瓶(250mL)，索氏提取器，直型水冷凝管，蒸餾頭，層析缸，CMC硅膠薄層板(515cm玻璃板)，燒杯(250mL)，錐形瓶(100mL)，試劑瓶(100mL)，量筒(100mL)，點滴

3、板1個，溫度計(100)，電熱套，恒溫水浴鍋，722光柵型分光光度計，藥物天平，電子天平，組織搗碎機，電吹風(fēng)，剪刀(公用)，玻棒，鉛筆，小尺子(自備)。 試劑： 紅辣椒干、95乙醇，丙酮，石油醚(沸點3060)，15NaOH溶液。 材料： 毛細管，沸石，紗布，脫脂棉，濾紙，擦鏡紙，pH試紙。三、實驗儀器與試劑6四、實驗步驟 1、辣椒堿的除去 將干的紅辣椒剪碎去籽并搗碎，稱取20g，加入180mL（按19的比例）15%NaOH溶液于燒杯中，在90水浴上加熱1.5h后，將杯內(nèi)液體傾倒于潔凈的紗布上濾去堿液，用水洗滌至中性，擰干紗布，保留固形物備用。將干的紅辣椒剪碎去籽并搗碎，稱取20g，加入180

4、mL（按19的比例）15%NaOH溶液于燒杯中，在90水浴上加熱1.5h后，將杯內(nèi)液體傾倒于潔凈的紗布上濾去堿液，用水洗滌至中性，擰干紗布，保留固形物備用。72、辣椒色素的提取 置于索氏提取器的濾紙筒中裝入辣椒，筒上口放一小團脫脂棉；250mL潔凈的圓底燒瓶中加入120mL95乙醇和幾粒沸石，加熱進行抽提五次以上（提取液顏色很淡時即可停止抽提）后，將提取裝置改成常壓蒸餾裝置，蒸出大部分乙醇（約剩余56mL乙醇）。將殘液及少量餾出液洗燒瓶的洗滌液傾入已準確稱出重量的試劑瓶中，在100烘干后稱重，計算提取率。8 3、薄層色譜分析分離 取少量干燥的辣椒色素于點滴板上，用適量石油醚溶解。用平口毛細管吸

5、取辣椒色素溶液點樣在兩個點樣原點上，點樣25次，點樣后的斑點直徑小于3mm，用石油醚(沸點3060)與丙酮101(體積比)的混合液作展開劑展開。 展開后取出薄層板，立即劃出前沿位置，電吹風(fēng)吹干除去展開劑，輕畫出各斑點的位置、觀察斑點顏色并計算Rf值，并根據(jù)薄層色譜展開圖以及它們的結(jié)構(gòu)確定這三個斑點的歸屬。 4、辣椒紅色素的色價測定 準確稱取0.0020g（精確到0.0002g）辣椒色素，用丙酮溶解并定容成25mL，以丙酮作參比，測定460nm處的吸光度，計算 來確定辣椒紅色素的色價，換算 ，計算辣椒紅色素的含量。9提取器的濾紙筒中：去除辣素的辣椒粉圓底燒瓶中：180mL 15NaOH溶液沸石3

6、3粒90水浴2h回收100烘干計算Rf值置雙層紗布中自來水沖洗 燒瓶內(nèi) 殘留物 辣椒紅色素計算：換算：紅色素含量計算提取率 試劑瓶 提取辣椒紅色素的實驗流程去除辣素的辣椒粉 薄層色譜圖 燒瓶洗滌液 展開 燒瓶：20g去蒂去籽的辣椒粉120mL15NaOH 擠干水分提取23h至提取液顏色很淺常壓蒸餾補加沸石乙醇測460nm吸光度A 稱重稱取0.0020g丙酮溶解定容成25mL少量溶解點樣10五、實驗關(guān)鍵 1、用量筒量取不同試劑前，應(yīng)將量筒清洗干凈，避免帶入雜質(zhì)。 2、辣椒粉除辣后，需用自來水反復(fù)漂洗至中性，并盡可能擠干水分。 3、在裝入辣椒紅色素濃縮液前，應(yīng)稱出試劑瓶的準確質(zhì)量，便于計算色素提取

7、率。 4、硅膠薄層板上的點樣量只能通過實驗來確定，故在薄層板上應(yīng)盡量點上多個有區(qū)別的試樣，確保能有展開結(jié)果。 5、層析缸中應(yīng)提前加入展開劑，避免邊緣效應(yīng)。 11 操作注意事項 1、固-液提取和常壓蒸餾時，應(yīng)加沸石，冷卻水應(yīng)低進高出。 2、濾紙筒的直徑應(yīng)略小于提取器內(nèi)徑，其高度應(yīng)高于虹吸管，低于蒸氣上升管。 3、只能用鉛筆在薄層板上輕輕畫出點樣原點，點樣量不能過多或太少，以免影響展開效果。展開結(jié)束后，應(yīng)立即畫出前沿位置。 4、測量吸光度時，需用待裝溶液充分洗滌比色皿；使用后必需洗凈比色皿。 5、使用過的展開劑倒入指定的回收瓶中。12六、思考題 1、干紅辣椒用NaOH溶液浸泡后，為什么不采用過濾或

8、抽濾的方法進行固液分離？ 2、干紅辣椒的除辣操作時，水浴溫度不能超過90，水浴時間不宜過長，其原因是什么？ 3、薄層色譜中的Rf值有何意義？不同的展開系統(tǒng)對Rf值會產(chǎn)生什么影響？ 4、薄層板上點樣量過多或過少，對薄層色譜分離效果有什么影響？ 5、如需采用薄層色譜方法定量測定紅辣椒中辣椒紅色素含量，應(yīng)怎樣進行實驗操作？請設(shè)計出定量分析的實驗方案。 6、如何從NaOH辣椒堿浸提液中分離、提取辣椒堿？13七、作業(yè)完整撰寫實驗報告，認真總結(jié)、分析、討論?；卮鹚伎碱}1、2、3、4。復(fù)習(xí)實驗基本知識 1、基礎(chǔ)化學(xué)實驗2實驗指導(dǎo)書P35，P611，P1419的內(nèi)容，掌握(能敘述)722型分光光度計、Delta 320-s型酸度計和2WA-J阿貝折射儀的使用方法及其注意事項。 2、下列實驗所涉及的實驗原理、操作注意事項和思考題等內(nèi)容：有機物熔點沸點的測定，