中藥的含量測(cè)定

1、第六章 中藥的含量測(cè)定反映其制劑中有效成分、指標(biāo)成分或毒性成分的含量衡量其制劑工藝的穩(wěn)定性和中藥制劑的質(zhì)量?jī)?yōu)劣 1常用定量分析方法方法學(xué)評(píng)價(jià)2結(jié)果表示二丁顆粒 本品每袋含紫花地丁以秦皮乙素（C9H6O4）計(jì)，不得少于1.8mg。 二至丸 本品每1g含女貞子以齊墩果酸（C30H48O3）計(jì)，不得少于8.0mg。 十滴水 本品每1ml含桉油以桉油精（C10H18O）計(jì)，不得少于6.3mg。 七葉安神片 本品每片含三七葉總皂苷以人參皂苷Rg3（C53H90O22）計(jì)不得少于5.0mg。 左金膠囊 本品每1粒含黃連以鹽酸小檗堿（C20H18ClNO4）計(jì)，不得少于5.5mg。 紅景天 本品按干燥品計(jì)算

2、，含紅景天苷（C14H20O3）不得少于0.50%3化學(xué)分析法紫外-可見分光光度法原子吸收光譜法薄層掃描法氣相色譜法高效液相色譜4第一節(jié) 化學(xué)分析法適用于含量較高的成分及無機(jī)成分的測(cè)定包括：重量分析和滴定分析無機(jī)藥物、總生物堿、總皂苷等5 一、重量分析揮發(fā)法：水分測(cè)定萃取法：地奧心血康膠囊中甾體總皂苷測(cè)定沉淀法：西瓜霜潤(rùn)喉片中西瓜霜測(cè)定例 西瓜霜潤(rùn)喉片中西瓜霜（以Na2SO4計(jì)）測(cè)定精密取約18g，加水150ml，振搖，離心，濾過，水50ml分次洗滌，合并濾液，加鹽酸1ml，煮沸，緩緩加熱氯化鋇試液水浴加熱，靜置，用無灰濾紙濾過，沉淀用水洗滌，至洗液不再顯氯化物的反應(yīng)，干燥，并熾灼至恒重，精密

3、稱定，與0.6086相乘，計(jì)算，即得。 6 二、滴定分析：含量1%以上酸堿滴定法：生物堿、有機(jī)酸、內(nèi)酯類 沉淀滴定法：含朱砂、紅粉中藥制劑配位滴定法：含Ca2+、Mg2+等礦物藥制劑氧化還原滴定法： 酚類、糖類及含F(xiàn)e、雄黃等礦物藥制劑71滴定度（TT/A）計(jì)算 滴定度（TT/A）：每1ml某摩爾濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物成分的質(zhì)量（mg） 如：每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于5.788mg的莨菪堿（C17H23NO3）（mg/ml） 82. 樣品中被測(cè)成分的含量計(jì)算直接滴定法測(cè)定： 返滴定法測(cè)定： 如：每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于5.788mg的莨菪堿（C1

4、7H23NO3）實(shí)際硫酸液濃度為0.01023mol/L則F=0.010230.019例 顛茄酊中生物堿的含量測(cè)定（酸堿滴定法） 精密取100ml，蒸發(fā)至約10ml，加乙醇適量使溶解，加0.1mol/L硫酸溶液10ml，用三氯甲烷分次提取，合并三氯甲烷液，用0.1mol/L硫酸溶液10ml洗滌，洗液并入酸液中。 加濃氨試液使呈堿性，用三氯甲烷分次提取。三氯甲烷液用同一水10ml洗滌，合并三氯甲烷液，蒸干，加乙醇3ml，蒸干，80干燥2小時(shí)，殘?jiān)尤燃淄?ml微熱使溶解。 精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）20ml，水浴加熱，除去三氯甲烷，放冷，加甲基紅指示液12滴，用氫氧化鈉滴定液（0.

5、02mol/L）滴定。 每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于5.788mg的莨菪堿（C17H23NO3）。10試樣100ml提取和純化游離生物堿RN精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）20mlRN+-SO4和剩余H2SO4用氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）滴定RN+-SO4和Na2SO4甲基紅指示液11例：馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏中爐甘石粉測(cè)定（配位滴定法）試樣約2g加三氯甲烷溶散稀鹽酸提取加緩沖溶液加鉻黑T指示劑用EDTA溶液滴定例：小兒金丹片中朱砂測(cè)定（沉淀滴定法）試樣約0.5g加硫酸、硝酸鉀加熱至乳白色 加水加高錳酸鉀溶液至紅色加硫酸亞鐵至紅色消失加硫酸鐵銨指示劑用硫氰酸銨滴定液

6、12二、可見紫外分光光度法 較高靈敏度、準(zhǔn)確、價(jià)廉、簡(jiǎn)單。 成分復(fù)雜，干擾多。 提取、凈化、顯色。 總成分測(cè)定：總黃酮、總多糖、總蒽醌等 131比耳定律摩爾吸光系數(shù) ：一定，溶液為1mol/L，厚度為1cm時(shí)的吸光度 百分吸光系數(shù) ：一定，溶液為1%，厚度為1cm時(shí)的吸光度 2儀器校正和檢定 波長(zhǎng)校正 吸收度的準(zhǔn)確度校正 雜散光檢查 143對(duì)溶劑的要求溶劑截止波長(zhǎng)：溶劑在1cm光徑中透光率25%的波長(zhǎng)。溶劑試樣的溶解性、安全性溶劑的最大使用波長(zhǎng)即截止波長(zhǎng)15164測(cè)定法 參比溶液的選擇 max，2nm 吸光度在0.30.7間 對(duì)照品比較法 cx為供試品溶液濃度 cR對(duì)照品溶液濃度 cR=(10

7、0%10%)cx cx=(Ax/AR)cR17例 黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D測(cè)定對(duì)照品溶液：每1ml含環(huán)維黃楊星D 10g供試品溶液制備：取樣，置50ml量瓶，加0.05mol/LNaH2PO4至近刻度，80水浴溫浸，放冷，加緩沖液至刻度，離心，取上清液測(cè)定法：精密量取二種溶液各5ml，置分液漏斗，各精密加溴麝香草酚藍(lán)溶液5ml，搖勻，各精密加三氯甲烷10ml提取，取三氯甲烷液，加0.5g無水硫酸鈉，振搖，靜置，取上清液，以試劑空白為參比，在410nm處分別測(cè)定吸光度18 吸收系數(shù)法 百分吸收系數(shù) 100 無需對(duì)照品 方法簡(jiǎn)便 儀器的校正和檢定 例 巖白菜素含量測(cè)定取約20mg，置50ml量瓶，加

8、甲醇溶解至刻度，搖勻，精密量取1ml，加甲醇稀釋至25ml，以試劑為空白，在275nm測(cè)吸光度，按巖白菜素吸收系數(shù)248計(jì)算。19 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 標(biāo)準(zhǔn)系列一般要求57個(gè)點(diǎn) 相關(guān)系數(shù)（r）不得小于0.999 供試品溶液的吸光度在線性范圍中部 例 排石顆粒中總黃酮測(cè)定對(duì)照品溶液：每1ml含無水蘆丁0.2mg標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密取對(duì)照品液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分別置10ml量瓶，加50%甲醇至5ml，加5%亞硝酸鈉0.3ml，放置6min，加10%硝酸鋁0.3ml，加氫氧化鈉試液4ml，加50%甲醇至刻度搖勻，以試劑為空白，在510nm測(cè)定吸光度 樣品測(cè)定：20三、原子吸收分光光度法 準(zhǔn)確

9、度高 靈敏度高 選擇性好 抗干擾能力強(qiáng) 分析速度快 含量測(cè)定：龍牡壯骨顆粒中鈣四、熒光分析法有害元素的檢查：Pb、Cd、As、Hg、Cu 共17個(gè)品種項(xiàng)21薄層洗脫定量薄層上直接定量薄層掃描掃描方式測(cè)定方式五、薄層掃描法22六、氣相色譜法 以氣體為流動(dòng)相。 分離效能高、樣品用量少、分析速度快。 適合于含揮發(fā)性成分的中藥鑒別和含量測(cè)定。 可與MS、IR聯(lián)用。23農(nóng)藥殘留量的檢查：六六六、DDT、PCNB 甘草、黃芪、人參莖葉總皂苷、人參總皂苷 樹脂殘留溶劑檢查 ：正己烷 、甲苯 、對(duì)二甲苯 、鄰二甲苯 、苯乙烯 、二乙基苯 、二乙烯苯 、苯。三七三醇皂苷、三七皂苷、燈盞花素 24（一）基本原理1

10、塔板理論 H越小，n越大，柱效越高，分離性能越好 2速率理論 H=A+B/U+CU 指導(dǎo)分離條件選擇：載體粒度和分布、填充均勻度、載氣種類和流速、柱溫、固定液液膜厚度 25（二）系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 1色譜柱的理論板數(shù)（n）：規(guī)定最低板數(shù) 2.分離度(R)：R1.53重復(fù)性：連續(xù)5次，RSD2.0% 4拖尾因子（T ） T應(yīng)在0.951.05之間 26（三）儀器一般要求與條件選擇 1載氣源與載氣的選擇 ：一般用N2作載氣 2進(jìn)樣系統(tǒng) ：直接進(jìn)樣或頂空進(jìn)樣 ；分流比； 進(jìn)樣口溫度高于柱溫3050；3色譜柱：填充柱或毛細(xì)管柱 ；常用固定液：甲基聚硅氧烷、苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等 274柱溫的選擇 ：

11、恒溫和程序升溫 ；柱溫低于固定液最高使用溫度；合符要求的前提下，盡可能采用較低柱溫 5檢測(cè)器 ：FID ；溫度應(yīng)高于柱溫，150 28（四）定量分析方法 內(nèi)標(biāo)法 外標(biāo)法 歸一化法 內(nèi)加法 291、內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)物溶液：如水楊酸甲酯，加乙酸乙酯溶解對(duì)照品溶液：如龍腦，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解供試品溶液：如冰片，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解取樣量 m 定容體積如：50mlcsmg/mlcs cimg/mlmg/mlcs cxmg/mlmg/ml30進(jìn)樣體積V，如1ltmVtmVtmVAsAiAs/Ax內(nèi)標(biāo)液對(duì)照品供試品則求出cx31 內(nèi)標(biāo)物須為原樣品中不含有的組分 對(duì)內(nèi)標(biāo)物要求： 內(nèi)標(biāo)物與待測(cè)物保留時(shí)間應(yīng)接近，且R1.5 內(nèi)

12、標(biāo)物為高純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，或含量已知物質(zhì) 內(nèi)標(biāo)物與待測(cè)組分的理化性質(zhì)相似 32 消除進(jìn)樣體積的誤差。 只需待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物出峰 適合測(cè)定微量組分優(yōu)點(diǎn)： 制樣要求高 找合適內(nèi)標(biāo)物困難 已知校正因子缺點(diǎn)：33例：丁香羅勒油（丁香酚測(cè)定）固定相：二甲基聚硅氧烷（SE-30），濃度為10%柱溫：110內(nèi)標(biāo)溶液：每1ml含20mg水楊酸甲酯的無水乙醇溶液校正因子測(cè)定：精密取約50mg對(duì)照品，置10ml量瓶，精密加內(nèi)標(biāo)溶液2ml，加無水乙醇稀釋至刻度。吸取2l進(jìn)樣測(cè)定供試品溶液制備和測(cè)定：精密取約50mg，置10ml量瓶，精密加入內(nèi)標(biāo)液2ml，加無水乙醇至刻度，吸取2l進(jìn)樣測(cè)定34a工作曲線法：c外標(biāo)兩點(diǎn)法：

13、前提：各次進(jìn)樣量要很準(zhǔn)確 操作條件要十分穩(wěn)定b外標(biāo)一點(diǎn)法：sisiAACC=2、 外標(biāo)法35例：冠心蘇合丸（含土木香）固定相：聚乙二醇20000（PEG-20M；柱長(zhǎng)30m）柱溫：190（30分鐘），120/分鐘升至240對(duì)照品溶液：每1ml各含0.2mg土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的乙酸乙酯溶液供試品溶液制備：精密取約8g，精密加硅藻土812g，研勻，精密取約68g，精密加水飽和的乙酸乙酯25ml，稱重，超聲處理，補(bǔ)重，濾過363、歸一化法37應(yīng)用：藥物中雜質(zhì)和雜質(zhì)總量限量檢查前提： 試樣中所有組分都產(chǎn)生信號(hào) 并能檢出色譜峰 38七、高效液相色譜法 儀器性能穩(wěn)定 靈敏準(zhǔn)確 分離模式多 檢測(cè)手段多

14、 應(yīng)用最多391、色譜柱C18柱：（octadecylsilane ODS柱）C8柱：(CH2)7CH3，罌粟殼、辛夷 、地奧心血康 苯基柱：(CH2)3 C6H5 ，萊菔子、忍冬藤 氰基柱：(CH2)3CN 氨基柱：(CH2)3N H2 ，苦參、濕毒清膠囊 （一）儀器一般要求與實(shí)驗(yàn)條件選擇402流動(dòng)相 溶劑種類 ：甲醇、水、乙腈 配比 pH值：乙酸、磷酸 、氨水、三乙胺 添加劑 ：辛烷、庚烷和十二烷基磺酸鈉 平消片 中士的寧測(cè)定： 流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鉀與0.01mol/L庚烷磺酸鈉等量混合液（用10%磷酸調(diào)節(jié)pH2.8）（2179） 41天麻首烏片（二苯乙烯苷）固定相：

15、ODS流動(dòng)相：乙腈-水（2278）檢測(cè)器：UVD320nm對(duì)照品溶液：每1ml含40g的甲醇溶液供試品溶液制備：精密取約2片，精密加甲 醇25ml，稱重，加熱回流，補(bǔ)重，濾過測(cè)定法：精密吸取二種溶液各10l進(jìn)樣測(cè)定規(guī)格：不得少于0.20mg/片42蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD） 線性不過零點(diǎn) 線性范圍較窄 低濃度非線性 二點(diǎn)對(duì)數(shù)方程法43Ikmb定量關(guān)系：logIblogmlogkI 為散射光強(qiáng)度， m 為組分質(zhì)量44例 金貝痰咳清顆粒（貝母素甲和貝母素乙）固定相：ODS流動(dòng)相：乙腈-二乙胺-水（63:0.03:37）檢測(cè)器：ELSD對(duì)照品溶液：每1ml各含0.25mg和0.15mg的甲醇液供試品溶液制備：精密取約2.5g，加氨試液4ml，浸潤(rùn)1小時(shí)，精密加三氯甲烷-甲醇（4:1）混合液50ml，稱重，80水浴加熱回流，補(bǔ)重，靜置，取下層溶液，無水硫酸鈉脫水，濾過，精取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘?jiān)状既芙庵?ml，濾過測(cè)定法：精密吸取對(duì)照品液8l、20l，供試品液20l，進(jìn)樣測(cè)定，外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算45質(zhì)譜檢測(cè)器（MS）：川楝子中川楝素測(cè)定：含量：0.060%0.20%46一測(cè)多評(píng)