XX醫(yī)院檢驗科臨檢室操作規(guī)程SOP文件

1、XX醫(yī)院檢驗科臨檢室操作規(guī)程 SO汽件臨檢室操作規(guī)程ABC醫(yī)院檢驗科目錄1。血常規(guī)檢測 12。 異常白細胞檢查（顯微鏡檢查法）83。 異常紅細胞檢查（顯微鏡檢查法）124。網(wǎng)織紅細胞計數(shù)（Ret） 175.ABO 血型鑒定 186。紅斑狼瘡細胞檢查207。瘧原蟲檢查 218。 凝血酶原時間（PT）測定249.活化部分凝血活酶時間（APTT）測定2610。血漿纖維蛋白原（Fbg）測定2811。血漿凝血酶時間（，）測定 3012。尿微量白蛋白（M-ALB）免疫比濁定量 3213。全血C-反應蛋白（B CRP免疫比濁定量 3414.尿液檢驗 3615。 糞便檢驗 4416。腦脊液檢驗 4817。 腔

2、積液檢驗 5518.前列腺檢驗 6119.精液檢驗 6220。 陰道分泌物檢驗 65血常規(guī)檢測1（標本采集新抽取的靜脈血或手指末梢血（EDTA-K2抗凝）。2 （儀器設備血細 胞分析儀.3 （操作步驟3 o 1上下顛倒試管將內(nèi)容物充分混勻，檢查有無凝血.3.2將試管正確放入試管架上。3。3按start 鍵，樣品開始吸取。3。4當 ready led 暗（并發(fā)出兩聲短音）移開試管.3。5當ready led 再次亮起時,準備 下一個樣品，重復上述步驟。4 （實驗原理4。1紅細胞計數(shù)測定 本實驗采用流 體力學聚集技術原理分析紅細胞。使用電阻抗法進行紅細胞計數(shù)，紅細胞通過小孔 時，形成的相應的脈沖的

3、多少即紅細胞的數(shù)目。4.2白細胞計數(shù)測定 本實驗采用半導體激光器，以流式細胞術原理分析白細胞。當全血進入白細胞通道后，通過流式細胞技術半導體激光的照射形成白細胞散射圖，從而計算出白細胞的數(shù)量。4.3白細胞分類計數(shù)測定 本實驗采用半導體激光器，以核酸熒光染色及流式細胞術原 理分析白細胞。當全血進入白細胞通道后，通過核酸熒光染色、利用流式細胞技術 半導體激光的照射形成白細胞散射圖，從而計算出中性細胞、淋巴細胞，單核細胞、 嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞分類的數(shù)量。4。4血紅蛋白測定 被稀釋的血液的加入溶血劑后，紅細胞溶解，釋放血紅蛋白，后者與溶血劑結(jié)合形成血紅蛋白衍生 物，進入血紅蛋白測試系統(tǒng)，在特定

4、波長（一般在530,550nm）下比色，吸光度的變化與液體中Hb含量成比例，儀器便可顯示Hb濃度。1 4 0 5紅細胞比積的測定 當紅細胞通過計數(shù)孔計數(shù)時，其體積的大小與之產(chǎn)生的脈沖的大小成正比，血球壓 積正是基于此原理測出的，血球壓積以百分比表示，可由一公式算出，即紅細胞總 體積或累積容積與1:50000稀釋全血體積的比較，其公式如下：HCT,（樣本中RBC體積/樣本體積）X 100 4。6平均紅細胞體積測定 由微處理器計算而得：MCV 由RBC和HCT計算得出：MCVfl , HCT/RBC106/U X 10 4。7紅細胞平均血紅蛋白含量 MCH 測定 由微處理器計算而得:MCH由RBC

5、和Hb計算得出：MCHpgHbg/dL/RBC106/lX 10 4。8紅細胞平均血紅蛋白濃度 MCHCJ定 由微處理器 計算而得：MCHCft HCT 和 Hb 計算得出：MCHCg/dl, Hbg/dL/HCTX 100 4。9血小板PLT測定 直流電電阻法的直流電測量系統(tǒng)的白細胞檢測部件帶有口徑與 細胞大小尺寸相同計數(shù)孔的傳感器相同計數(shù)孔的傳感器，與每個傳感器相毗連的是一個內(nèi)電極和一個外電極。傳感器和電極插在一種導電的稀釋液中。在內(nèi)外電極之 間通過稀釋液傳導著一恒定的直流電電流DG非導電性的白細胞懸浮在導電的稀釋液中，在計數(shù)過程中當一個細胞通過計數(shù)孔時，使電極間的電阻增加.該電阻是與 細

6、胞體積成正比的.從而引起電極間電壓差的改變。電壓的改變被稱為細胞脈沖.此原理是以歐姆定律為基礎的。表達式如下： EIXR式中E為電壓，I為電流,R 為電阻。由于電流I是恒定的，任何原因如細胞引起電阻 R的升高。將導致電壓 差（E）成正比的改變。這些電壓的微小改變被放大，電子干擾或假信號則被濾波電 路所消除。經(jīng)放大的細胞脈沖被傳遞至PDA顆粒分布分析電路以產(chǎn)生直方圖。本儀器增加了核酸熒光染色技術，對電阻搞法檢測不了的血小板進行染色后可計算出 血小板的數(shù)量。5 （參考值范圍2 5 o 1紅細胞計數(shù) 男性4。0,5。5X1012/L;女性3。5, 5.0X1012/L;新生兒6.0,7。5X1012

7、/L. 5。2白細胞計數(shù) 成年人 4, 5。5X 109/L;嬰兒（兩周歲以下）11, 12X109/L;新生兒 15,20 X109/L。5.3 白細胞分類計數(shù) 中性粒細胞0.5,0 。70X 50, 70;嗜酸性鑿粒細胞0.005,0 。 050.5,5嗜堿性粒細胞0, 0.010,1 ;淋巴細胞0.2 , 0.4020,40;單核細胞0。03, 00 083, 8。5。4 血紅蛋白測定 男性 120160g/L;女性 110-150g/L. 5.5 紅細胞比積的測定 男性0。42, 00 49（42,49）,女性0。37, 0。43和新生兒 00 49, 00 54. 5。6平均紅細胞體

8、積測定 成人79, 101fl ;兒童73, 89f1;新生 兒可達105fl. 5 。7紅細胞平均血紅蛋白含量 MCHM定27, 34pg 5。8紅細胞平 均血紅蛋白濃度 MCHCJ定320360g/L 5。9血小板PLT測定100,300 X 109/L 6 （臨床意義6.1紅細胞計數(shù)貧血、白血病、大量失血及鉤蟲病等降低。巨幼紅細胞貧血時減少更為明顯.慢性缺氧（肺氣月中和先天性心臟病等）、嚴重脫水、大面 積燒傷、慢性一氧化碳中毒及真性紅細胞增多癥等時增高。6。2白細胞計數(shù)6。2.1生理性增多：初生兒、妊娠末期、分娩期、經(jīng)期、飯后、劇烈運動后、冷水浴 后及極度恐懼與疼痛等。6.2.2病理性增

9、多：大部分化膿性細菌所引起的炎癥、 尿毒癥、嚴重燒傷、3傳染性單核細胞增多癥、傳染性淋巴細胞增多癥、急性出 血、組織損傷、手術創(chuàng)傷后、白血病等。6。2.3減少：病毒感染、傷寒、副傷寒、黑熱病、瘧疾、再生障礙性貧血、極度嚴重感染、X線及鐳照射、月中瘤化療后、非白血性白血病等.6 o 3白細胞分類計數(shù)6.3。1增多 中性粒細胞：急性化 膿感染、粒細胞白血病、急性出血、溶血、手術后、尿毒癥、酸中毒、急性汞中 毒、急性鉛中毒等.嗜酸性粒細胞：變態(tài)反應、寄生蟲病、某些皮膚病、某些血液 病、手術后、燒傷等。 嗜堿性粒細胞：慢性粒細胞白血病、何杰金病、癌轉(zhuǎn)移、鉛 及鈿中毒等.淋巴細胞：百日咳、傳染性單核細胞

10、增多癥、慢性淋巴細胞白血病、 麻疹、腮腺炎、結(jié)核、傳染性肝炎等。單核細胞：結(jié)核、傷寒、亞急性感染性心內(nèi)膜炎、瘧疾、黑熱病、單核細胞白血病、急性傳染病的恢復期等.6。3.2減少中性粒細胞：傷寒、副傷寒、瘧疾、流感、化學藥物中毒、X線和鐳照射、抗癌藥物化療、極度嚴重感染、再障、粒細胞缺乏等。嗜酸性粒細胞：傷寒、副傷寒以及應用腎上腺皮質(zhì)激素后。淋巴細胞：多見于傳染病急性期、放射病、細胞免疫缺陷？取？6。4紅細胞分布寬度（RDWV RDW為反映紅細胞體積異質(zhì)性的參 數(shù)，常以所測得紅細胞體積大小的變異系數(shù) CV來表示。它比血涂片上紅細胞形 態(tài)大小不均的觀察更為客觀、準確.RDW增大時有臨床意義。6。4。

11、1用于缺鐵性 貧血IDA的診斷與療效觀察缺鐵性貧血時RDW增大，尤其是MCV尚處于參考值 范圍時缺鐵性貧血時 MCV應下降RDW曾大更是早期缺鐵的指征；MCV減小時， RDW曾大更為顯著，當給予鐵劑治療有效時，RDW將比給藥前更大，以后逐漸降至正常水平。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因，主要是因補鐵后產(chǎn)生網(wǎng)織紅細胞，及正常紅細胞 生成并釋放人血與給藥前的小紅細胞并存，RDW先增大，故 隨著正常紅細胞的 增多和小4紅細胞的減少，RDW便逐漸降至參考范圍.6。4。2用于小細胞低色素性貧血的鑒別診斷：IDA和輕型地中海性貧血時，MCV土勻可減小.但IDA時 RDW曾大，而輕型地中海性貧血時 RDW正常.6.4.3

12、 用于貧血的分類Bessman分 類法：MCV只能反映紅細胞平均體積的大小，不能代表紅細胞體積大小的異質(zhì)性， 對紅細胞體積大小的評價，過去靠血涂片上紅細胞形態(tài)的觀察，這種觀察常受血涂 片制作以及觀察者的主觀因素的影響較大，而且不能定量，RDW能較好地反映紅細胞體積的異質(zhì)性，把MCV和RDW結(jié)合用于對貧血的分類將更為完善，如下表.Bessman MCV/RDWt血分類 類 別MCV RDWE常？ ？ 缺鐵性貧血 ？ ？ 巨幼 細胞性貧血？ ？溶血性貧血？ ？鐵粒幼細胞貧血？ ？再生障礙性貧血？ ？ 單純小細胞性貧血？ ？注：？無變化；？增大；？減少。6。5平均血小板體積 （MPV MPV的臨床意

13、義要結(jié)合PLT變化才有價值。6。5。1鑒別血小板減少的 原因 當骨髓造血功能損傷致血小板減少時，MPV減少；當血小板在周圍血液中破壞增多時，導致血小板減少，MPV增大；血小板分布異常致血小板減少時，MPV正常。6。5。2評估骨髓造血功能恢復情況 局部炎癥時，骨髓造血未抑制，MPV正 常.敗血癥時，骨髓造血受抑制，MPV減低。白血病緩解時，MPV增高。骨髓造血 衰竭，MPV和血小板計數(shù)減低。骨髓功能恢復時， MPV先上升，血小板計數(shù)隨后上 升.6。5。3其他方面應用MPV增大見于骨髓纖維化、原發(fā)性血小板減少性紫痰 ITP、血栓性疾病及血栓前狀態(tài)、脾切除、慢粒、巨大血小板綜合征、鐮刀細胞性 貧血等

14、.5 MPV減小見于脾亢、化療后、再障、巨幼細胞性貧血等 .6.6 血小板比 積（PCT PCT與PLT和MPV正相關，所以PLT、MPV的增減均可使 PCT發(fā)生 變化。增高見于骨髓纖維化、脾切除、慢粒等。減低見于再障、化療后、血小板減 少癥等.6.7 血小板體積分布寬度（PDW）儀器測量一定數(shù)量血小板體積后，計數(shù) 所得外周血血小板體積大小異質(zhì)性參數(shù)。用血小板體積變異系數(shù)（CW表示.PDW增大見于急性白血病化療后，巨幼細胞性貧血、慢性粒細胞白血病、脾切除后、巨 大血小板綜合征、血栓性疾病、原發(fā)性血小板增多癥、再生障礙性貧血PDW成低 見于反應性血小板增多癥。 6。8血細胞體積分布直方圖的應用

15、6.8。1紅細胞體 積分布直方圖 將MCV和RDW配合直方圖分析,可直接觀察紅細胞體積的分布情 況。？只現(xiàn)一個峰：見于正常人、缺鐵性貧血峰左移、巨幼細胞性貧血峰右移。 1 可現(xiàn)兩個峰：缺鐵性貧血給予鐵劑治療有效時，可出現(xiàn)一個小紅細胞峰和另一個正 紅細胞或網(wǎng)織紅細胞峰.巨幼紅細胞性貧血給予葉酸、維生素 B12治療有效時亦可 見兩個峰.6.8。2白細胞體積分布直方圖 靜脈血比毛細管血白細胞數(shù)量略低。中 檔的血細胞分析儀一般為三分群，它是根據(jù)加入溶血劑后，白細胞膜通透性改變而 發(fā)生皺縮，不同類型的白細胞皺縮后體積有明顯差別，每個皺縮白細胞通過血細胞分析儀 的微孔時產(chǎn)生的脈沖信號經(jīng)放大、甄別后，微機處

16、理數(shù)據(jù)得到具體積分布直方圖。 淋巴細胞群為35,90 fl大??；中間細胞群為90, 160 fl大??；粒細胞群為160,450 fl 大小。三群細胞的百分比與白細胞數(shù)量的乘積為其絕對數(shù)正常人白細胞體積分布直方圖，可見兩個明顯分離的峰，左峰為小細胞群淋巴細胞，右峰為大 細胞群粒細胞，兩峰之間為中間細胞群的分布.急性白血病時，由于異常的原始、 幼稚細胞增多，可見中間細胞明顯增高，這時直方圖上見一個峰，峰值常在 90, 160 fl之間。這時必須推片染色鏡檢。6。8。3血小板體積分布直方圖6正常人血小板體積主要分布在 2, 20 fl之間,21 , 30 fI之間有少量大血小板，一般儀 器以30 f

17、I為最大的分析界標。血小板體積增大時，直方圖會出現(xiàn)明顯拖尾現(xiàn)象。有小紅細胞或紅細胞碎片干擾時，直方圖尾部會抬高.6。8。4三種紅細胞參數(shù)平均值的應用主要用于各種貧血的鑒別正常人和各型貧血時紅細胞平均參考值 表 平均值 MCHpg MCVfl MCHCg/LiE 常 27 , 31 82 , 95 320,360 大細胞性貧 血？，正常細胞性貧血，,單純小細胞性貧血？ ？，小細胞低色素性 貧血？ ？ ？注：，正常；？增大；？減少7異常白細胞檢查（顯微鏡檢查法）1（實驗原理用瑞氏染色法，對制備好的血涂片進行染色，然后在顯微鏡下進行形態(tài)檢查。2 （標本采集 新抽取的靜脈血或手指末梢血（EDT/VK2

18、抗凝）。取材后應 立即推制成血涂片，并盡快送檢。3（實驗材料及儀器瑞氏血細胞染色液；顯微鏡。4（操作步驟4。1采血后推制厚薄適宜的的血膜片，血膜應呈舌狀，頭、 體、尾清晰可分。4.2瑞氏染色：將制好的干燥血涂片平置于染色架上，滴加瑞 氏染色液A液3, 5滴使其迅速蓋滿血膜，然后加瑞氏染色 B液3, 5滴，輕輕 搖動玻片或用洗耳球吹氣使 A、B染液充分混勻，染色1 , 2分鐘（氣溫低或涂片 較厚時可適當延長染色時間），用自來水沖去染液，待干.4 0 3高倍鏡（必要時油 鏡）觀察白細胞形態(tài)。5 （結(jié)果判斷與分析5.1核象變化5。1.1核左移：說明 外周血中幼稚或桿狀核粒細胞增多，見于急性白血病，急

19、性化膿性細菌感染，急性 中毒，急性溶血。正常妊娠、缺氧及低血壓也可出現(xiàn)細胞核左移現(xiàn)象.5.1.2 核右移：說明中性粒細胞核分葉過多，見于巨幼細胞性貧血，惡性貧血，化療及炎癥恢復 期，遺傳性中性粒細胞分葉過多，尿毒癥等。巨多核中性粒細胞：成熟中性細胞胞 體增大，核分葉過多，常為5,9葉，甚至12, 15葉。各葉大小差別很大，常見于 巨幼細胞性貧血。止匕外，在疾病進行期突然出現(xiàn)核右移，表示預后不良.5.1。3分葉過少：乳酸缺乏癥，假性pelger,huet 異常等。5。1.4其他核異常：環(huán)形或面 包圈型核見于慢性粒細胞白血病，骨髓異常增生綜合征等。5.2中性粒細胞形態(tài)變 化8細胞大小不均：為骨髓內(nèi)

20、幼稚粒細胞發(fā)生不規(guī)則的分裂增殖所致。5。3中性粒細胞的毒性變化5。3.1中毒顆粒：比正常中性顆粒粗大，大小不等，分布不 均勻，染色較深，呈黑色或紫黑色.有時顆粒很粗大，與嗜堿粒細胞易混淆；有時小 而稀少，散雜在正常中性顆粒之中。含中毒顆粒的中性粒細胞應與嗜堿粒細胞區(qū)別其要點：嗜堿粒細胞核較少分葉、染色較淺、顆粒較大、大小不均、著色更深、細 胞邊緣處常分布較多，可分布于核上，胞漿中常見小空泡。在血片染色偏堿或染色 時間過長時，易將中性顆粒誤認為中毒顆粒.但只要注意全片各種細胞的染色情況， 則不難區(qū)別。 含中毒顆粒細胞在中性細胞中所占比值稱為毒性指數(shù)。毒性指數(shù)愈大，提示中毒變性結(jié)果。5。3。2空泡

21、：可為單個，但常為多個。大小不等，亦 可在核中出現(xiàn)。被認為是細胞脂肪變性的結(jié)果。5。3.3Dohle體:是中性粒細胞胞漿內(nèi)因毒性變而保留的嗜堿性區(qū)域。呈圓形、梨形或云霧狀。界限不清 , 染成灰藍色，直徑為1 , 2仙m是胞質(zhì)局部不成熟，即核與胞質(zhì)發(fā)育不平衡的表 現(xiàn)。Dohle小體亦可見于單核細胞中，其意義相同。5.3.4退行性變：常見者有胞 體月中大、結(jié)構(gòu)模糊、邊緣不清晰、核固縮、核月中脹和核溶解（染色質(zhì)模糊、疏松）等等.如胞質(zhì)破裂后消失，只剩胞膜，則成裸核或藍狀細胞，退行性變亦可見于衰老細 胞，在正常情況下為數(shù)極少。這些毒性變化可單獨出現(xiàn)，亦可同時出現(xiàn)。觀察中性粒細胞的毒性的變化，對估計疾病

22、的預后有一定幫助。5。4其它異常白細胞5。4。IPelgerHuet畸形：表現(xiàn)為成熟中性粒細胞核分葉能力減弱 .常為桿狀和分兩 葉（其間難成細絲）0呈腎形或啞鈴形.染色質(zhì)聚集成小塊或條索網(wǎng)狀，其間有空折 間隙.為常染色體顯性遺傳異常，一般無臨床癥狀。但也可繼發(fā)于某些嚴重感染、 白血病、骨髓增生異常綜合征、月中瘤轉(zhuǎn)移和某些藥物 （如水仙胺、磺基二甲基異惡 口坐）治療后.5.4 o 2ChediakHigashi畸形：Chediak , Higashi綜合征患者骨髓 和血液各期 在粒細胞中，含數(shù)個至數(shù)十個直徑2,5仙m的包涵體，即異常巨大的紫 藍或紫紅色顆粒.電鏡觀察和細胞化學顯示，巨大顆粒為異常

23、溶酶體。患者容易感 染，常9伴白化病。為常染色體顯性遺傳，此異常顆粒也偶見于單核細胞、淋巴 細胞中。5。4。3AlderReilly 畸形：其特點是在中性粒細胞中含巨大深染的嗜 天青顆粒，染深紫色。此異常顆粒與中毒顆粒的區(qū)別是顆粒較大，不伴有白細胞數(shù) 增高、核象左移和空泡等其它毒性變化.患者常伴有脂肪軟骨營養(yǎng)不良或的遺傳性 粘多糖代謝障礙。類似顆粒亦可見于其它白細胞中.5.4。4May-Hegglin畸形：患者粒細胞終身含有淡藍色包涵體。實驗證明這種包涵體與前述常見于嚴重感染、中 毒等所見Dohle體相同，但常較大而圓。除中性粒細胞外，其他粒細胞甚至巨核細 胞內(nèi)亦可見到。5。5淋巴細胞形態(tài)學變化5.5。1異型淋巴細胞：在傳染性單核增多癥、病毒性肺肝炎、流行性出血熱等病毒感染或過敏原刺激下，可使淋巴細胞增生，并出現(xiàn)某些形態(tài)學變化，稱為異型淋巴細胞。Downey將其按形態(tài)特征分為三型：I型（空泡型）：最多見。胞體比正常淋巴細胞稍大 ，多為圓形、橢圓形或