植物組織培養(yǎng)基本技術(shù)

1、關(guān)于植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù)第一張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)、儀器設(shè)備及操作技術(shù)第二節(jié) 培養(yǎng)基的組成、配制與滅菌第三節(jié) 植物離體培養(yǎng)體系的建立 本章內(nèi)容第二張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)構(gòu)及設(shè)計(jì)要求：準(zhǔn)備室;無(wú)菌操作室;培養(yǎng)室;溫室；細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)、儀器設(shè)備及操作技術(shù)第三張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（一）準(zhǔn)備室： 1. 主要功能：用于培養(yǎng)器皿的清洗、培養(yǎng)基的配制、分裝和滅菌、試管苗的出瓶及整理等工作。2. 主要儀器設(shè)備及用品： 冰箱、天平、高壓滅菌鍋、pH計(jì)、干燥箱、實(shí)驗(yàn)臺(tái)、水槽、涼干架、藥品柜、

2、離心機(jī)、水浴鍋、微波爐、電爐、磁力攪拌器、蠕動(dòng)泵、移液器、各種玻璃器皿（燒杯、量筒、容量瓶、試劑瓶、三角瓶等）及培養(yǎng)基分裝用品等。第四張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月百分之一天平千分之一天平萬(wàn)分之一天平第五張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月各種型號(hào)的高壓滅菌鍋第六張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 移液器第七張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二）接種室（無(wú)菌操作室）： 1、功能：植物材料的滅菌、接種以及培養(yǎng)物的繼代轉(zhuǎn)接等。 接種室要求保持潔凈，與化學(xué)實(shí)驗(yàn)室之間應(yīng)設(shè)置緩沖室。2、儀器設(shè)備及用品： 超凈工作臺(tái)、紫外燈、小推車、擱架、磁盤(pán)、接種工具（各種鑷子、解剖

3、刀、手術(shù)剪、普通剪刀接種針、酒精燈、手持噴霧器、細(xì)菌過(guò)濾器等）等。第八張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月超凈工作臺(tái)第九張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（三）培養(yǎng)室： 1、功能：主要用于植物材料的培養(yǎng)。要求室內(nèi)潔凈并能保持一定的溫度、光照以及濕度以適合植物材料的生長(zhǎng)和分化。2、儀器設(shè)備及用品： 培養(yǎng)架及燈管、搖床（振蕩器）、空調(diào)、自動(dòng)定時(shí)器、加濕及除濕器、光照培養(yǎng)箱、溫濕度計(jì)等。第十張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)架第十一張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月光照培養(yǎng)箱第十二張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月恒溫振蕩器 多用振蕩器第十三張，PPT共七十

4、八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（四）細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室： 1、功能：主要用于培養(yǎng)材料的顯微觀察及照相等。2、儀式設(shè)備及用品： 體視顯微鏡、普通顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、配套顯微照相裝置、普通相機(jī)或數(shù)碼相機(jī)、切片機(jī)及配套制片及染色用品等。第十四張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月體視顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡倒置顯微鏡倒置熒光顯微鏡第十五張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、實(shí)驗(yàn)室基本操作：（一）洗滌： 1、普通器皿：采用洗衣粉、洗潔精等中性洗滌劑洗滌。 2、難清洗器皿及移液管等：用水清洗后再用重鉻酸鉀洗液浸泡，最后清水沖洗，或用超聲波儀清洗。第十六張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月

5、（二）滅菌： 1、器具滅菌：培養(yǎng)皿、解剖刀、鑷子等用品。 （1）干熱滅菌：鋁箔包好后，放于恒溫干燥箱內(nèi)，150 保溫2小時(shí)，成本較高。 （2）高壓蒸汽滅菌：高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)120 15-20min 。 （3）灼燒滅菌：接種時(shí)，解剖刀及鑷子等浸入95乙醇，然后取出在酒精燈火焰上灼燒殺菌。第十七張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、培養(yǎng)基滅菌： 采用高壓蒸汽滅菌，120 1520min。培養(yǎng)基體積越大，滅菌時(shí)間越長(zhǎng)。3、不耐高溫化合物： 采用過(guò)濾滅菌，如IAA等。4、外植體的表面滅菌： 采用7075乙醇（10-30秒）、有效氯1的次氯酸鈉（5-30分鐘）、0.10.2%的氯化汞（2-15分

6、鐘）等。殺菌劑中加入幾滴吐溫20或80（Tween20或80）效果較好。第十八張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（三）無(wú)菌操作： 1、保持接種室的無(wú)污染環(huán)境，定期熏蒸或噴霧處理，進(jìn)行消毒。接種前打開(kāi)超凈工作臺(tái)及紫外燈照射20-30min，關(guān)閉紫外等燈后使氣體散出后開(kāi)始操作。 2、保持超凈工作臺(tái)的潔凈：接種前用70乙醇擦拭臺(tái)面或用噴壺噴霧，操作前，將手和手臂用70乙醇消毒，所需試驗(yàn)用品用乙醇擦拭后放入超凈工作臺(tái)。第十九張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3、點(diǎn)燃酒精燈，進(jìn)行操作，接種材料前后，灼燒瓶口，工具要灼燒徹底，防止交叉污染。4、保持接種室的潔凈，發(fā)現(xiàn)污染及時(shí)挑出，并在滅菌后

7、清洗，以減少污染源。5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，出入接種室換拖鞋以保持接種室的潔凈。 第二十張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 第二節(jié) 培養(yǎng)基的組成、配制與滅菌第二十一張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、培養(yǎng)基的組成和作用 培養(yǎng)基（medium）是植物組織培養(yǎng)的重要材料，是外植體生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，只有配制出適宜的培養(yǎng)基，才能使組織培養(yǎng)獲得成功。 通常植物組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基包括以下六大類成分，即礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)、有機(jī)成分、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、碳源、瓊脂以及其他附加物等。 培養(yǎng)基的主要指標(biāo)是營(yíng)養(yǎng)成分及植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的濃度。第二十二張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 培養(yǎng)基成分

8、 水 植物激素 碳源 有機(jī)物（維生素、肌醇、氨基酸） 培養(yǎng)體支持材料 輔助性物質(zhì) 無(wú)機(jī)鹽（大量元素、微量元素、鐵鹽）第二十三張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 碳源 碳源主要為細(xì)胞提供合成新化合物的骨架，為細(xì)胞的呼吸代謝提供底物與能源，此外還能維持一定的滲透壓。 常用的碳源主要是蔗糖，使用濃度在10-50g/L，此外果糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨糖、甘露糖及可溶性淀粉等也常用于植物組織培養(yǎng)。 但在胚培養(yǎng)時(shí)采用40-150g/L的高濃度，因蔗糖對(duì)胚狀體的發(fā)育起重要作用 糖濃度高低直接影響形態(tài)建成。第二十四張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月無(wú) 機(jī) 鹽 元素名稱 添加形式 N KNO3,

9、NH4NO3大量 P KH2PO4 NaH2PO4元素 K KCl KNO3 (0.5mmol/L) Ca CaCl2 2H2O Mg Mg2SO4 7H2O S Mg2SO4 7H2O Fe FeNa2-EDTA微量 B H3BO3元素 Mn MnSO4( 0.5mmol/L) Cu CuSO4 Mo Na2MoO4 2H2O Cl CaCl2 2H2O第二十五張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月種類： VB1 （鹽酸硫胺素 ）、 VB6（ 鹽酸吡哆醇 ）、 Vpp（ 煙酸 ）、Vc(抗壞血酸 ）濃度：0.1-1.0mg/L作用： VB1促愈傷組織產(chǎn)生，提高活力 VB6 促根生長(zhǎng) Vp

10、p與代謝和胚發(fā)育有關(guān) Vc防組織褐變維生素第二十六張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月肌醇 (又叫環(huán)己六醇） 能促進(jìn)愈傷組織的生長(zhǎng)以及胚狀體和芽的形成。對(duì)組織和細(xì)胞的繁殖、分化有促進(jìn)作用，對(duì)細(xì)胞壁的形成也有作用。 使用濃度一般為50lOOmgL第二十七張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月氨基酸(almino acide) 培養(yǎng)基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用，用量在1-3mgL之間。有時(shí)應(yīng)用水解乳蛋白或水解酪蛋白，用量在101000mgL之間。由于它們營(yíng)養(yǎng)豐富，極易引起污染。第二十八張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年

11、6月1、生長(zhǎng)素類(auxin) （1）IAA(吲哚乙酸) 是生長(zhǎng)素中活力最弱的激素，對(duì)器官形成的副作用小，高溫高壓易被破壞，也易被細(xì)胞中的1AA分解酶降解，受光也易分解。（2）NAA(萘乙酸)在組織培養(yǎng)中的起動(dòng)能力要比IAA高出34倍，耐高溫高壓，不易被分解破壞，所以應(yīng)用較普遍。NAA和IBA廣泛用于生根，并與細(xì)胞分裂素互作促進(jìn)芽的增殖和生長(zhǎng)。（3）IBA(吲哚丁酸)是促進(jìn)發(fā)根能力較強(qiáng)的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)。（4）2,4-D(2,4-2氯苯氧乙酸)起動(dòng)能力比IAA高10倍，特別在促進(jìn)愈傷組織的形成上活力最高，但它強(qiáng)烈抑制芽的形成，影響器官的發(fā)育。適宜的用量范圍較狹窄，過(guò)量常有毒效應(yīng)。植物激素第二十九張

12、，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、細(xì)胞分裂素類 ( cytokinin )（1）6-BA(6-芐基氨基嘌呤）應(yīng)用廣，人工合成。（2）Zt (zeatin 玉米素)是一種活性最大的天然細(xì)胞分裂素，效果顯著，但非常昂貴。（3）Kt (糠基腺嘌呤）功能：誘導(dǎo)芽的分化促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長(zhǎng)。促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大。抑制根的分化第三十張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 3、GA ( gibberellic acid赤霉素) 培養(yǎng)基中添加的是GA3，主要用于促進(jìn)幼苗莖的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，促進(jìn)不定胚發(fā)育成小植株；赤霉素和生長(zhǎng)素協(xié)同作用，對(duì)形成層的分化有影響，當(dāng)生長(zhǎng)素/赤霉素比值高時(shí)有利于木質(zhì)部分化，比值低時(shí)

13、有利于韌皮部分化。第三十一張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 高 有利于根的形成和愈傷組織 生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素 適中 有利于根芽的分化 低 有利于芽的形成 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的使用甚微，一般用mgL表示濃度。一般生長(zhǎng)素濃度的使用為0.055mgL，細(xì)胞分裂素0.0510mgL。 第三十二張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)體支持材料1.瓊脂A 用量710g/LB 新買應(yīng)試凝固力2.其它玻璃纖維濾紙橋海綿等第三十三張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月輔助性物質(zhì)抗生素抗氧化物活性炭天然復(fù)合物第三十四張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1.常用種類：青霉素鏈霉素 慶大霉素等2

14、.用量：520%3.注意：抗生素對(duì)組織生長(zhǎng)有抑制作用，使用要慎重 抗生素第三十五張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月抗氧化物常用抗氧化劑及使用：半胱氨酸、VC（50200mg/L液洗滌外植體傷口表面）?；钚蕴?.作用：具吸附作用；莖尖初代培養(yǎng)可防褐化；促進(jìn)新梢增殖（濃度0.1-0.2%）；促進(jìn)生根；防止組培苗玻璃化（濃度0.3%）。利于胚胎培養(yǎng)。2.常用濃度：0.5-10g/L3.注意：活性炭具副作用。第三十六張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月椰乳：一般使用濃度在100200mlL 它在愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)中有促進(jìn)作用。在馬鈴薯莖尖分生組織和草莓微莖尖培養(yǎng)中起明顯的促進(jìn)作用。香蕉：

15、用量為100200mlL。用黃熟的小香蕉，加入培養(yǎng)基后變?yōu)樽仙?。?duì)pH值的緩沖作用大。主要在蘭花的組織培養(yǎng)中應(yīng)用，對(duì)發(fā)育有促進(jìn)作用。馬鈴薯(potato)：去掉皮和芽后，加水煮30min，再經(jīng)過(guò)過(guò)濾，取其濾液使用。用量為150200gL，對(duì)pH值緩沖作用也大，添加后可得到健壯的植株。水解酪蛋白：為蛋白質(zhì)的水解物，主要成分為氨基酸，使用濃度為100200mgL。受酸和酶的作用易分解，使用時(shí)要注意。天然復(fù)合物第三十七張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 培養(yǎng)基種類 MS培養(yǎng)基 B5培養(yǎng)基White培養(yǎng)基 N6培養(yǎng)基KM-8P培養(yǎng)基 基本培養(yǎng)基 二、培養(yǎng)基的類型：第三十八張，PPT共七十八頁(yè)，

16、創(chuàng)作于2022年6月N6培養(yǎng)基特點(diǎn)：成分簡(jiǎn)單KNO3 和 (NH4)2SO4含量高適合花藥培養(yǎng)White培養(yǎng)基特點(diǎn)：無(wú)機(jī)鹽量較低，適合生根培養(yǎng)第三十九張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月B5培養(yǎng)基 特點(diǎn)：含較低的銨雙子葉植物 尤其木本植物組培可選擇 MS培養(yǎng)基特點(diǎn)：無(wú)機(jī)鹽、離子 濃度高，硝酸鹽含量較高。 有機(jī)成分復(fù)雜用于原生質(zhì)體培養(yǎng)( 包括原生質(zhì)融合的培養(yǎng))KM-8P培養(yǎng)基特點(diǎn)：第四十張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月表1MS培養(yǎng)基的組成配方組成成分?jǐn)?shù)量(mg/L)組成成分?jǐn)?shù)量(mg/L)NH4NO31650 Na2-EDTA37.3 KNO31900 FeSO47H2O 27.

17、8 CaCl22H2O 440 CuSO45H2O 0.025 MgSO47H2O 370 蔗糖 30 KH2PO4170 pH 5.8 KI0.83 肌醇 100.0 H3BO36.2 煙酸 0.5 MnSO44H2O22.3 鹽酸吡哆醇 0.5 ZnSO47H2O8.6 甘氨酸 2.0 Na2MoO42H2O0.25 鹽酸硫銨等 0.4 CoCl26H2O0.025 第四十一張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月表2B5培養(yǎng)基的組成和配方組成成分 數(shù)量(mg/l） 組成成分 數(shù)量(mg/l) KNO3 2500 FeSO47H2O 27.8 CaCl22H2O 150 CuSO45H2

18、O 0.025 MgSO47H2O 250 蔗糖40 (NH4)2SO4 134 pH 5.5KI 0.75 肌醇 100 H3BO4 3.0 煙酸 1.0 MnSO44H2O 10 鹽酸吡哆醇 1.0 ZnSO47H2O 2.0 激動(dòng)素 0.1 Na2MoO42H20.25 2,4D 0.11.0 0.025 鹽酸硫銨 10 Na2-EDTA37.3 CoCl26H2O第四十二張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 表3 N6培養(yǎng)基的組成和配方組成成分 數(shù)量(mg/l)組成成分(mg/l) KNO3 2.3 Na2EDTA 37.3 CaCl22H2O 166 FeSO47H2O 27.

19、8 MgSO47H2O 185 蔗糖 50 KH2PO4 400 pH 5.8 (NH4)2SO4 463 煙酸 0.5 KI 0.8 鹽酸吡哆醇 0.5 H3BO3 1.6 甘氨酸 2.0 MnSO44H2O 4.4 鹽酸硫銨 1.0 ZnSO47H2O1.5 第四十三張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、培養(yǎng)基母液及激素母液的配制：母液：欲配制液的濃縮液。一般母液配成比所需濃度高10100倍。大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類母液等。配制時(shí)注意一些離子之間易發(fā)生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。配制母液時(shí)要用蒸餾水或重蒸餾水。藥品應(yīng)選取等級(jí)較高的化學(xué)純或分析純。母液配好后放入

20、冰箱內(nèi)低溫保存，用時(shí)再按比例稀釋。 第四十四張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（一）母液配制流程圖 稱 量 母液分裝確定培養(yǎng)基 溶 解 定 容 貼標(biāo)簽保存于冰箱母液配制 (以MS為例)第四十五張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月母液種類種類成 分規(guī)定用量(mg/L)擴(kuò)大倍數(shù)稱取量(mg)母液定容體積(ml)配1LMS培養(yǎng)基吸取量(ml)大量元素KNO3NH4NO3MgSO4.7H2OKH2PO4CaCI.2H2O19001650370170440203800033000740034008800100050微量元素MnSO4.4H2OZnSO47H2OH3BO3KINa2MoO4.

21、2H2OCuSO4.5H2OCoCI2.6H2O22.38.66.20.830.250.0250.025100223086062083252.52.5100010鐵鹽Na2-EDTAFeSO4.7H2O37.327.810037302780100010有機(jī)物煙酸甘氨酸 VB6 VB1 肌醇 50251005255000500100.520.50.1100第四十六張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月(二)母液配制要求：1、母液濃縮倍數(shù)：10-100 ，大量元素20；微量元素100、鐵鹽100；有機(jī)物50；2、選用蒸餾水、重蒸餾水、分析純或化學(xué)純?cè)噭?、防止沉淀: Ca2+和S042-，Ca

22、2+Mg2+和PO43-4、激素母液濃度：1mg/ml,1次配成50或100 ml5、激素溶解： IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容； NAA先溶于熱水或95%酒精再加水； 2，4-D先溶于1 mlNaOH再加水； KT、BA先溶于1 mlHCl再加水。 第四十七張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月四、培養(yǎng)基的配制：1、量取母液：營(yíng)養(yǎng)元素和激素。2、稱量蔗糖、瓊脂，放入600ml左右蒸餾水的鍋內(nèi)，電路上加熱，使瓊脂溶化。3、加入母液，混合均勻，調(diào)整pH值。4、分裝入瓶，每瓶4050ml。5、封口：用46層稱量紙封口，之后滅菌備用。第四十八張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年

23、6月母液1 100ml 瓊脂 7 g母液2 10ml 蔗糖 30g 母液3 10ml 母液4 10ml BA 2mgNAA 1.5mg 加熱 定容1000ml 用氧化鈉調(diào)PH5.8分裝（占容器1/41/3，不沾瓶壁口） 高壓滅菌 （121C，1.1kg/cm2，20min）第四十九張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 大量元素母液 微量元素母液 鐵 鹽母液 有機(jī)物母液 取100ml取10ml取10ml取10ml注：MS培養(yǎng)基配制容量瓶要求：一次性移取，不能吸進(jìn)吸耳球里，數(shù)量看準(zhǔn)，不滴不漏，吹凈為度。移母液第五十張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月用0.1MNaOH或HCl調(diào)PH值為

24、5.8。趁熱分裝，100ml的三角瓶約裝入3040ml,35瓶/L。調(diào)PH值：分裝：趁熱分裝，100ml的三角瓶約裝入3040ml, 35瓶/L。第五十一張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月扎口與滅菌:要求封口松緊適宜，系活扣，便于接種操作。培養(yǎng)基應(yīng)及時(shí)滅菌，防止變質(zhì)。第五十二張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月五、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）：1、加熱： 滅菌前檢查滅菌鍋內(nèi)水量是否充足，然后將培養(yǎng)基放于滅菌鍋內(nèi)，改好蓋，關(guān)閉放氣閥，打開(kāi)電源，加熱升溫。2、排氣： 當(dāng)溫度升至0.05MPa時(shí)，打開(kāi)放氣閥徹底排出鍋內(nèi)冷空氣。然后關(guān)閉放氣閥，促使壓力繼續(xù)上升。第五十三張，PPT共七十八

25、頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3、溫度控制： 當(dāng)鍋內(nèi)壓力升至0.10MPa時(shí)，計(jì)時(shí)1520分鐘，計(jì)時(shí)結(jié)束后，關(guān)閉電源。4、出鍋： 當(dāng)滅菌鍋?zhàn)匀焕鋮s后，取出培養(yǎng)基，放置于接種室備用。第五十四張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月六、培養(yǎng)基的保存：1、防塵： 防治灰塵污染。2、避光：吲哚乙酸等易于分解，要注意遮光。3、恒溫：4 oC可保存36周，室溫下兩周內(nèi)用完。4、定期更新：不易長(zhǎng)期保存。第五十五張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) 植物離體培養(yǎng)體系的建立第五十六張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、植物組織培養(yǎng)的階段劃分： 通常將組織培養(yǎng)過(guò)程劃分為四個(gè)階段 1、起始培養(yǎng)階段（

26、誘導(dǎo)階段） 2、增殖培養(yǎng)階段 3、生根培養(yǎng)階段 4、馴化移栽第五十七張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第五十八張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（一）外植體的起始培養(yǎng)過(guò)程 1、 起始培養(yǎng)的一般過(guò)程： A、選取適宜的基因型（品種）； B、選取適宜的外植體；常用外植體有莖尖、莖段、節(jié)間、葉片、葉柄等。 C、流水沖洗外植體； D、外植體切割、分離及滅菌處理； E、外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基。 F、環(huán)境條件控制促進(jìn)外植體的生長(zhǎng)。二、外植體起始培養(yǎng)（無(wú)菌體系建立）第五十九張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、接種外植體的生長(zhǎng)過(guò)程： A 細(xì)胞分裂的啟動(dòng)； B 細(xì)胞增殖； C 組織和器官

27、的形成。 第六十張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第六十一張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二）影響外植體起始培養(yǎng)的因素： 1、影響外植體起始的因素 A 外植體 B 培養(yǎng)基組成成分 C 培養(yǎng)條件第六十二張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月外植體： (1) 外植體種類及基因型 (2) 外植體供體植株和外植體的來(lái)源與生理狀態(tài) (3) 外植體大小 (4) 外植體的極性第六十三張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月外植體種類及基因型單子葉植物不易誘導(dǎo)器官發(fā)生。b. 木本植物較難誘導(dǎo)。c. 存在基因型差異（如番茄29%63%）d. 開(kāi)始生長(zhǎng)季節(jié)取材容易誘導(dǎo)。第六十四張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月外植體狀態(tài)：第六十五張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月外植體大小：外植體越小成苗能力越弱，較大的外植體增殖較快。外植體極性：當(dāng)外植體以形態(tài)學(xué)的基部接種于培養(yǎng)基上時(shí)，從遠(yuǎn)離基部的表面誘導(dǎo)出芽、苗數(shù)目較多。第六十六張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月B、培養(yǎng)基 a 培養(yǎng)基類型: b 碳 源的影響:第六十七張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 C、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì) a 細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素類 b 赤霉素類 c 乙烯及其生物合成抑制劑 d 其他有機(jī)化合物第六十八張，PPT共七十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素