Bactobac表達(dá)系統(tǒng)中文版說明指導(dǎo)書

1、Bactobac表達(dá)系統(tǒng)中文版說明指導(dǎo) 書Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)試劑盒內(nèi)容物:ProductCdtllOg LlOrpFastBdc SectorExpression ControlBac-to-Bac7 Etacul心viruEExpiieisicii System10359/16pFastBac1 1Supplied: 20 at 05 Lig / 4 in TE, pH S.O (10 pg total)pFastBac 1-CiiSupplied: 20 詛 at 0.2ii) TE, pH 8.0 (4 ng totj)Bac-to-Bac Vector Kit1036

2、0-014pF 獻(xiàn) tBadlSupplied: 20 |J at 0.5 隔/W in TE, pH 8,0 (10 jig total)pFastBac ：1-GusSupplied: 20 pl at 0.2 r)g/pl hi TE, pH S O (4 ng total)由c-tdBar HT Vertoi Kit10584027pF 茶 tB 濾A pFastBicHT E pF 乘 tB YHT C Supplied: 20 1il each at 0.51喀 / .1 in TE pH 8.0 (10 jig total oi eadi vector)pFast的尸HT-CAT

3、Supplied: 15 jil at 1 ng / 山 in TE, pH 8.0 (15 ng total)pFastBac1 Dual10712-024pF 3 5tBM DualSupplied: 20 1Lit OS pg/pl inTKpHS.0 (10 Mg total)pFastBac Dual-Gus/CATSupplied: 20 出 at CL2 ng”(l in TE, pH S O (4 ng total)Introduction:Overview:Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)提供快速有效的方法產(chǎn)生重組 桿狀病毒。此方法基于讓已經(jīng)轉(zhuǎn)入桿狀病的質(zhì)粒（桿粒）的位

4、點(diǎn)特意轉(zhuǎn)座子的表達(dá)框的質(zhì)粒在Ecoli中擴(kuò)增。Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)主要包括：*pFastBac捐獻(xiàn)質(zhì)粒的選擇，它要能夠產(chǎn)生包含目的位點(diǎn)的表 達(dá)結(jié)構(gòu)，這個(gè)目的基因的產(chǎn)生被桿狀病毒特意位點(diǎn)啟動(dòng)子控 制。*一個(gè)Ecoli宿主，DH10Bac,包含桿狀病毒質(zhì)粒（桿粒）和輔 助質(zhì)粒，在轉(zhuǎn)染pFastBac表達(dá)結(jié)構(gòu)后可以產(chǎn)生重組桿粒。*一個(gè)控制表達(dá)的質(zhì)粒，包括 Gus和/或CAT基因，以便在感染細(xì)胞后產(chǎn)生重組桿狀病毒，表達(dá) 3-葡萄糖酸酎酶和/或氯霉 素乙酰轉(zhuǎn)移酶。Bac-to-Bac表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)：使用這個(gè)系統(tǒng)產(chǎn)生重組桿狀病毒較傳統(tǒng)的同源重組有以下優(yōu)點(diǎn)：與使用同源重組產(chǎn)生重組桿狀病毒所需

5、的4-6周相比，鑒別純化重組病毒少于兩周減少了從斑點(diǎn)篩選重組病毒 DNA所包含親緣和非重組病毒 的幾率可以快速同時(shí)進(jìn)行大量重組，適合表達(dá)功能性研究的蛋白選擇 pFastBac菌體（Vector）:大量的pFastBac菌體都適于進(jìn)行Bac-to-Bac表達(dá)系統(tǒng)。選擇 對(duì)于你的需要最合適的菌體。Vector特點(diǎn)參差pFastBacTM 1高水平表達(dá)的強(qiáng)AcMNPV聚 乙烯（PH）啟 動(dòng)子用于簡(jiǎn)單克隆 的大量克隆位 點(diǎn)Anderon 1996pFastBacTM HT高水平表達(dá)的Polayes 1996聚乙烯啟動(dòng)子； N-末端含有6XHis,可以用 來純化重組蛋 白，并可用 TEV蛋白酶切 去；提

6、供3個(gè)閱讀 框pFastBaC Dual兩個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子（PH 和 p10）可以同時(shí)表達(dá) 兩種蛋白； 兩個(gè)大的克隆 位點(diǎn)Harris和Polaye 1997指南用途：指南提供了一個(gè)對(duì)于Bac-to-Bac表達(dá)系統(tǒng)的概述，并對(duì)以下提供指導(dǎo)：1、克隆目的基因到pFastBacTM供體質(zhì)粒的選擇2、轉(zhuǎn)化pFastBaCM結(jié)構(gòu)到最高效的DH10BacTM產(chǎn)生重組質(zhì)粒3、轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒DNA到昆蟲細(xì)胞產(chǎn)生重組桿狀病毒4、 擴(kuò)增滴定(Amplify and titer)桿狀病毒株，使用病毒株 感染昆蟲細(xì)胞表達(dá)目的重組蛋白重要的：Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)是用來幫助你產(chǎn)生重組 桿狀病毒，在昆蟲細(xì)胞中進(jìn)行高水平表達(dá)目的基因的系統(tǒng)。雖 然他可以幫助你很容易的產(chǎn)生桿狀病毒表達(dá)你的重組蛋白，但是使用這系統(tǒng)更傾向于有桿狀病毒生物學(xué)和昆蟲表達(dá)背景的 使用者。我們高度推薦使用者具有病毒和組織培養(yǎng)的技術(shù)和知 識(shí)。Bac-to-Bac表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)系統(tǒng)的成分：表達(dá)系統(tǒng)簡(jiǎn)單高效的產(chǎn)生重組桿狀不能給黨?；?Luckow1993年的方法，此系統(tǒng)利用了位點(diǎn)特意的專座子 Tn7 區(qū)簡(jiǎn)化和提高重組質(zhì)粒DNA*系統(tǒng)的第一個(gè)成分是用來克隆目的基因的pFastBacTM菌株?；趐FastBacTM菌株的選擇，表達(dá)基因被AcMNPV的PH或 p10啟動(dòng)子控制，在昆蟲細(xì)胞內(nèi)高水平表達(dá)表達(dá)框被 Tn