分類專題儀器使用VCS原理對(duì)WBC進(jìn)行是用測量的

1、分類專題儀器使用 VCS 原理對(duì) WBC 進(jìn)行分類。V 是用原理測量 WBC 的體積，C 是用23MHz 的高頻測量的WBC 核的體積 RF，S 是用激光散色光測量的 WBC 膜的復(fù)雜程度。要達(dá)到良好的分類效果，四個(gè)非常重要：一、樣本回路，特別是樣本，即 WBC 膨脹縮小的化學(xué)平衡。二、鞘液回路。三、光路。四、電路放大與分析。下面從這四個(gè)方面來論述，最后再總結(jié)一下與分類有關(guān)的重要參數(shù)：一、在樣本回路中，試劑、溫度等會(huì)影響樣本。試劑的中，要保證 540/350ul 的 e-lyse 和 31ul 的樣本迅速的進(jìn)入混勻行膨脹的過程。再是 200/125ul 的 s-lyse 進(jìn)入混勻池，使被脹大的

2、白細(xì)胞縮回原態(tài)。經(jīng)過這樣處理的樣本進(jìn)入 flowcell。在這里需要注意以下幾點(diǎn)：1）、試劑的量要準(zhǔn)確，需要用量筒測試。要特別注意的是，在用量筒測量試劑的量是一回事，實(shí)際做樣本時(shí)試劑進(jìn)入混勻池又是一回事。也就是說 F21，F(xiàn)22，F(xiàn)23，F(xiàn)24 不能完全模擬做樣本時(shí)的狀態(tài)。有時(shí)用量筒測量試劑量時(shí)是準(zhǔn)確的，但在樣本進(jìn)到混勻有一部分 e-lyse 被吸到混勻池中，從而造成了實(shí)際e-lyse 試劑到達(dá)混勻池中偏少，這是由于混勻池通大氣，在接下來會(huì)。2）、e-lyse 和 s-lyse 試劑達(dá)到混勻池的速度要快，如果 sol60 或 sol63 損壞或被改裝成單向閥，則有可能會(huì)造成速度偏慢，e-lys

3、e 與樣本接觸時(shí)間偏長。3）、e-lyse 和 s-lyse 試劑量的匹配。正常情況下，e-lyse 和 s-lyse 試劑泵是同時(shí)打大的量或同時(shí)打小的量。當(dāng) e-lyse 或 s-lyse 試劑泵的中間管子（SOL82 控制的管子）被折住 時(shí)，就會(huì)在高溫模式下，兩個(gè)試劑泵打出的量就不匹配。4）、sol63 和 sol60 的動(dòng)作要快（F05 測試時(shí)聽聲音），電磁閥與泵的動(dòng)作沒有配合好，會(huì)造成 e-lyse 或 s-lyse 沒有完全打進(jìn)混勻池或者進(jìn)入混勻池的速度偏慢。5）、試劑有沒有變質(zhì)，包括剩余的試劑相互混勻，試劑存放的溫度不對(duì)，國產(chǎn)試劑等等。6）、混勻池的排空與沖洗。7）、儀器根據(jù)環(huán)境溫

4、度的變化來選擇最佳的分類條件。1.1、E-Lyse 和S-Lyse 試劑泵的工作原理。見。1.2、分類試劑進(jìn)入混勻池的流路。見。1.3、混勻池的工作原理與故障分析。見。1.4、溫度對(duì)分類的影響。見。二、對(duì)鞘液回路進(jìn)行分析。鞘液中的“鞘”是劍鞘的“鞘”，其含義是樣本被在鞘液中（劍被在劍鞘中）。鞘液的作用是使 WBC 一個(gè)一個(gè)通過池。池的工作原理與故障分析。見。鞘液回路容易出現(xiàn)的故障：、與鞘液相關(guān)的八個(gè)閥動(dòng)作不好：VL49（排廢），VL55（上鞘液出），VL46A(上鞘液進(jìn))，VL41（下鞘液出），VL46B（下鞘液進(jìn)），VL52（混勻VL54（鞘液與反沖液的切換）。、與VL46A 和VL46B

5、并聯(lián)的管子堵。），VL44（網(wǎng)織腔進(jìn)），、池接頭斷；池底部的接頭堵或者脫落。、鞘液罐中有細(xì)菌滋生，會(huì)影響DIFF 的本底。鞘液罐的浮子開關(guān)問題。、池臟，下鞘液處有贓物。三、光路。從激光光源到棱鏡，到衰減。池，再到 LS Sensor，要確保光路的位置正確，激光沒有要保證光路位置正確，就需要mode 值也在控。調(diào)好光路，使S 的 CV 值調(diào)在 4 以下，gain 和 mean-調(diào)整光路分兩步：先進(jìn)行粗調(diào)，調(diào)出細(xì)紅線，見。再進(jìn)行細(xì)調(diào)，固定好螺絲，見。光路的 S 的 CV 值如果偏大，則圖形偏胖，細(xì)胞群在S 軸方向不集中，分類的重復(fù)性就會(huì)差。S 的 gain 值太大會(huì)使分類散點(diǎn)圖往右移，會(huì)造成 EO

6、 假性增高。四、電路放大與分析。分類信號(hào)的流程，見。工作站中通過 COULTER AccuGateysis 的程序(算法)，對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。AccuGateysis 是一種統(tǒng)計(jì)分析工具。它采用 adaptive contouring methods 與 細(xì)胞亞群的多方案分析(multiresolution比。ysis) 來找到各亞群之間的最佳分界線，最終求出 WBC 的分類百分如果存在異常細(xì)胞分布與異常細(xì)胞群，AccuGate 分析時(shí)會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的懷疑性信息。在 Worksion 中將WBC 總數(shù)與百分比相乘，就可以求出各細(xì)胞亞群的絕對(duì)數(shù)。在 Worksion 中顯示 2 種類型的散點(diǎn)圖：二

7、維與三維。散點(diǎn)圖中每種顏色代表不同的細(xì)胞亞群，顏色的灰度代表顆粒的密度(濃度)。顏色越暗，顆粒數(shù)越少；顏色越亮，顆粒數(shù)越多。COULTER AccuGateysis 的程序(算法)的步驟，見。五、其他的重要參數(shù)有：CV，gain，F(xiàn)lowrate，NeDCMn，NeOPMn，NeRLSMn，LS offset，DC count，Noise 等等。5.1、CV 中最重要的S 的 CV，在池的調(diào)整中，X 軸方CV 的影響比較大。如果S的 CV 大，則會(huì)使分類的圖形在左右方向上變寬，整個(gè)圖形會(huì)變胖，分類的重復(fù)性就會(huì)變差。V 和C 的 CV 值取決于流路，包括池，鞘液流與樣本流。池內(nèi)要干凈，鞘力與樣本

8、壓力穩(wěn)定，流路中沒有顆粒（如鞘液罐中的細(xì)菌會(huì)影響其 CV 值），這樣就能保證V 和C 的 CV 值。對(duì)于 C 的 CV 值，還需要強(qiáng)調(diào) TTM 模塊中地線對(duì)其有影響，S 的前置放的固定螺絲也會(huì)對(duì)其有影響。與 RF BOX5.2、V 和 C 的gain 調(diào)整，需要用膠（P/N：6605419），S 的 gain 調(diào)整需要用Latron Control（P/N：7546914）。Latron Control 同時(shí)來確認(rèn)V 和C 的 gain。儀器根據(jù)細(xì)胞亞群的位置來給出一些提示。如在正常中性粒細(xì)胞群的上方有較多的顆粒，就會(huì)提示 Imm NE1。Gain 的調(diào)整失當(dāng)，會(huì)造成VCS 的 mean 值會(huì)

9、改變，也就是會(huì)影響分類散點(diǎn)圖中的各個(gè)細(xì)胞群的位置。從而造成儀器提示的假陽性與假。5.3、正常情況下，儀器的 Flowrate 是一個(gè)定值，應(yīng)該為WBC/time=63。如果與鞘液相關(guān)的八個(gè)閥動(dòng)作不好，sheath/diff/retic 調(diào)節(jié)閥本身不好等原因都會(huì)影響 Flowrate。5.4、NeDCMn，NeOPMn，NeRLSMn 是樣本的中性亞群的VCS 的平均峰值。E-Lyse 的量會(huì)影響該值。當(dāng)然 Gain 也會(huì)影響該值。正常人群樣本的 NeDCMn=1455，NeOPMn=1405，NeRLSMn=1455。如果不在控，則可能也會(huì)造成儀器提示的假陽性與假。5.4、LS offset

10、指激光在沒有樣本通過池時(shí)的本底光強(qiáng)度。Offset 要求限制在 1.2V 以下，其飽和電壓為 13V?？上攵绻?offset 電壓太高，將會(huì)影響S 信號(hào)的線性，最終將影響分類的結(jié)果。5.5、DC count 指分類細(xì)胞的有效顆粒數(shù)，也就是通常指化學(xué)平衡好壞的標(biāo)準(zhǔn)，要求大多數(shù)正常樣本大于 7795。如果 E-Lyse 與S-Lyse 改變相同的量，count 影響非常大。會(huì)發(fā)現(xiàn)S-Lyse 會(huì)對(duì) DC5.6、Noise 是電路的噪音，有動(dòng)態(tài)噪音與靜態(tài)噪音。在 ready 狀態(tài)下測量 VCSog 板上 VCS 測試點(diǎn)的電壓，要求 V4.5 mV ，C4.5 mV ，S3.0mV 。在用稀釋液做乳膠的狀態(tài)下，測量 VCSog 板上 VCS 測試點(diǎn)的電壓，要求 V12mV，C38mV