實驗七霉菌的培養(yǎng)和觀察

1、-. z.實驗七霉菌的培養(yǎng)和觀察摘要通過在一定固定環(huán)境下培養(yǎng)根霉，毛霉，曲霉，青霉四種霉菌，先通過菌種的外形對其有一個宏觀的認識，然后再在顯微鏡低倍或高倍鏡下分別觀察四種菌的形態(tài)，孢子囊及孢子形態(tài)，菌絲形態(tài)等方面。發(fā)現(xiàn)根霉，曲霉和青霉菌絲均有橫隔；青霉的分生孢子小梗呈掃帚狀等現(xiàn)象。關(guān)鍵詞土豆培養(yǎng)基PDA分生孢子梗Conidiophore載片培養(yǎng)實驗目的學習并掌握觀察霉菌形態(tài)的根本方法。了解四類霉菌根霉、毛霉、黑曲霉、青霉的根本形態(tài)。實驗原理霉菌菌絲體由基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和繁殖菌絲組成，其菌絲比細菌及放線菌粗幾倍到幾十倍?？梢圆扇≈苯又破屯该髂z帶法觀察，也可以采取載玻片培養(yǎng)觀察法，通過無菌操作

2、將薄層培養(yǎng)基瓊脂置于載玻片上，接種后蓋上蓋玻片培養(yǎng)，使菌絲體在蓋玻片和載玻片之間的培養(yǎng)基中生長，將培養(yǎng)物直接置于顯微鏡下可觀察到霉菌自然生長狀態(tài)并可連續(xù)觀察不同發(fā)育期的菌體構(gòu)造特征變化。對霉菌可利用乳酸石炭酸棉藍染液進展染色，蓋上蓋玻片后制成霉菌制片鏡檢。石炭酸可以殺死菌體及孢子并可防腐，乳酸可保持菌體不變形，棉藍使菌體著色。同時，這種霉菌制片不易枯燥，能防止孢子飛散，用樹膠封固后可制成永久標本長期保存。實驗器材1、菌種根霉Rhizopus，毛霉Mucor，黑曲霉Aspergillus niger，青霉Penicillium2、試劑馬鈴薯20g，蔗糖2g，瓊脂2g，水100mL，20%甘油等。

3、3、儀器分析天平，玻璃棒，三角瓶，小燒杯，加熱器，漏斗，紗布，培養(yǎng)皿，載玻片，蓋玻片，U 型玻棒，解剖刀，鑷子，接種環(huán)，移液管，酒精燈，顯微鏡等。實驗內(nèi)容配制馬鈴薯培養(yǎng)基配制200ml馬鈴薯培養(yǎng)基PDA，其成分配比及配制方法見附錄。滅菌后無菌操作，取培養(yǎng)基分別倒少量于滅菌培養(yǎng)皿中，使之凝固成薄層。再將這一層培養(yǎng)基用解剖刀切割為假設(shè)干1cm左右的瓊脂塊。制作小室及接種培養(yǎng)制作：在平皿底部鋪一*略小于皿底的圓濾紙片，在其上放一U型玻棒。在玻棒上放上一塊載玻片。取方形瓊脂塊，將其移至載玻片上，載玻片兩端各放置一塊。小室培養(yǎng)法，圖：接種：用接種環(huán)挑取很少量的菌落接種于瓊脂塊的邊緣上，用無菌鑷子將蓋玻片

4、覆蓋在瓊脂塊上。同一塊載玻片上的兩塊培養(yǎng)基上接種不同菌種培養(yǎng)：無菌操作，在培養(yǎng)小室中濾紙片上滴加23ml滅菌甘油,蓋上皿蓋,于27恒溫箱中正置培養(yǎng)一個星期。3鏡檢觀察從培養(yǎng)箱中取出載玻片在低倍鏡下觀察并記錄四種霉菌菌絲體及孢子的形態(tài)特征，必要時可換高倍鏡觀察?？记绊氈鷷r蓋玻片最好分開包，載玻片、蓋玻片不要和平皿接觸，防止粘在一起。倒薄片時培養(yǎng)基倒入占平皿底部一薄層即可，然后搖動平皿即可使培養(yǎng)基鋪滿底部。接種時盡可能將菌種接在瓊脂塊邊緣，防止培養(yǎng)后菌絲過于密集影響觀察。接種時確認有菌接上即可，接菌量不宜過多，會導致菌絲過密難以觀察。五、實驗報告1、實驗結(jié)果菌種根霉毛霉黑曲霉青霉菌落形態(tài)菌落疏松

5、或稠密，最初呈白色，后變?yōu)榛液稚蚝诤稚?。白色疏松絮狀黑色疏松外圈白色，?nèi)部綠色有無假根有假根、匍匐菌絲無無假根，有足細胞無菌絲形態(tài)透明無隔較細無隔透明有隔透明有隔孢子梗形態(tài)直立著生于假根上，頂端膨大為圓形的孢子囊由菌絲生出，頂端為球形孢子囊由氣生菌絲分化，頂端為球狀頂囊分生孢子梗頂端不膨大，無頂囊，屢次分生形成小梗，形如掃帚孢子特征孢子囊位于囊軸上，孢子位于孢子囊中，孢子囊呈圓形，外表光滑球形、橢圓形、壁薄、光滑的孢囊孢子孢子梗是輻射狀排列,呈冠狀，分生孢子黑色不透明，外表粗糙小梗頂端有分節(jié)橢圓狀孢子畫圖:圖表 2-2根霉假根圖表 2-1根霉照片資料圖表 SEQ 圖表 * ARABIC 2-

6、4曲霉孢子囊圖表 SEQ 圖表 * ARABIC 1-3毛霉圖表 2-5青霉曲霉思考題12、黑曲霉和黑根霉在形態(tài)特征上有何區(qū)別？菌絲：根霉無隔有假根，曲霉無隔有足細胞。孢子梗：根霉位于假根上，曲霉由氣生菌絲分化而來。孢子囊形態(tài)：根霉孢子囊外表平滑，曲霉外表不平滑，呈絮狀。13、如果要求對*放線菌或霉菌不同發(fā)育時期基內(nèi)菌絲氣生菌絲孢子絲或繁殖菌絲進展連續(xù)觀察，寫出實驗方案。選取對數(shù)期菌落進展同步培養(yǎng)，分化出處于同一生長階段的菌。接種，假設(shè)放線菌則在平皿上插上至少7個載玻片，霉菌則至少接五個小室。養(yǎng)觀察：在適宜條件下培養(yǎng)，每隔一天在一樣時間內(nèi)取出一個蓋玻片進展觀察記錄。六、實驗小結(jié)本次試驗的成功需要注意幾個方面的問題。首先，在接種的時候不應該在固體培養(yǎng)基上接種太多太厚的孢子，并且接種需要接在固體培養(yǎng)基小塊兒的邊緣，以便于霉菌的生長。其次，無菌環(huán)境下進展各種操作也是非常重要的，這樣可以保證菌種不被污染。再者，本次實驗在觀察霉菌的形態(tài)的時候，有特別的關(guān)注不同霉菌的細節(jié)及不同之處。比方菌絲是否有隔，孢子囊形態(tài)等特征。通過細心比擬各種霉菌細節(jié)狀態(tài)的不同，我們就可以用來分別鑒定一些霉菌，擴展了視野