醫(yī)學(xué)診斷學(xué)課件：實驗1 白細胞計數(shù)及白細胞分類

1、1白細胞計數(shù)及白細胞分類2實驗要求1.掌握白細胞計數(shù)及分類計數(shù)的操作方法， 正常參考值及臨床意義。2.學(xué)會血涂片的制備方法。3一、白細胞計數(shù)4原理將全血用稀酸溶液稀釋一定倍數(shù)并破壞紅細胞后充入血細胞計數(shù)池內(nèi)，顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的白細胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液內(nèi)的白細胞數(shù)。56器材一次性消毒采血針一次性微量吸管試管、2ml吸管75乙醇棉球、無菌干棉球 7試劑白細胞稀釋液：2冰醋酸加亞甲藍8操作步驟1、加稀釋液取白細胞稀釋液0.38ml于小試管中。 2、采血用微量吸管吸取20l加入白細胞稀釋液中，用其上清清洗管腔內(nèi)殘余液體23次。 3、溶血混勻后室溫靜置，待液體變?yōu)樽睾稚?，即紅細胞被完全破壞。

2、4、充池混勻后沖入計數(shù)池，室溫平放23min，待細胞下沉后顯微鏡計數(shù)。 5、計數(shù)低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內(nèi)白細胞總數(shù)。 9101112結(jié)果計算=N50106式中：4個大格內(nèi)的白細胞總數(shù)4 算出每個大方格（即0.1l）內(nèi)白細胞平均數(shù)。10換算為1l。20為血液稀釋倍數(shù)。106 將1l換算為1L。13注意事項1每個大方格內(nèi)計得的白細胞數(shù)相差超過10個，表示懸液未搖勻結(jié)果不可靠。2其他注意事項和計數(shù)不準確的常見原因與紅細胞計數(shù)相似。14參考值成人410109/L 新生兒1520109/L 15二、白細胞分類 16（一）試劑和器材瑞氏（wright）染液pH6.4的磷酸鹽緩沖液干凈無油的載玻片邊緣光

3、滑干凈的推片顯微鏡、香柏油、擦鏡紙。 17（二）方法1常規(guī)消毒皮膚、采血。2在載玻片的右端沾取一滴血，沾取時勿使玻片觸及皮膚，把推玻片的一端放在血滴右側(cè)，將推片略向左移觸及血滴，血液即均勻附著于二片之間。3使推片與載玻片中間形成30度夾角，平衡地向前推進，制成血涂片后，放在空氣中待其自干，切勿加熱干燥。4置血片于水平支架上，加瑞氏染液，直至血片被蓋滿為止，計算染液滴數(shù)。18（二）方法5一分鐘后，滴加等量緩沖液，同時輕輕振動血涂片，或用口吹氣，使之與染液混勻。6再染5-10分鐘后，用水緩慢將染液沖去，沖洗前切勿將染液傾倒。7空氣中自然干燥（或用吸水紙吸干）后鏡檢，先用低倍鏡觀察血涂片染色是否良好

4、厚薄是否適宜，選擇涂片的中部及細胞分布均勻處，用油鏡按一定順序計數(shù)。 19血 涂 片 制 作：推片載玻片血液將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚薄取決于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（?。┮粡垵M意的血涂片應(yīng)厚薄均勻 頭 體 尾鮮明涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭部寫上姓名和編號李四B 1 2 320血 涂 片 染 色：勿沖洗再加瑞氏染色液5-8滴后將液和液充分混允靜置10分鐘直接流水沖洗3-5分鐘（切勿先到掉染液）涂片經(jīng)水洗干燥后用油鏡分類計數(shù)100個白細胞李四123涂片干燥后加瑞氏染色液5-8滴覆蓋整個血膜1分鐘21血涂片的觀察： 經(jīng)染色后的血涂片先用低倍鏡觀察：1.染色情況(滿意、偏酸、偏堿）2

5、.觀察細胞分布情況，選擇細胞分布均勻之處轉(zhuǎn)油鏡進行白細胞分類計數(shù)。油鏡分類時應(yīng)按一定走向，不要重復(fù)計數(shù)李四1232223（三）注意事項1血涂片的厚薄與下列因素有關(guān)：血滴大則厚，小則薄；推片與載玻片之間的角度大則厚，小則??；推抹涂片之速度快則厚、慢則薄。24（三）注意事項2推片時用力要平衡，否則血膜出現(xiàn)厚薄不勻現(xiàn)象。良好的血片應(yīng)分布均勻，位于玻片之中央，玻片兩側(cè)及上下邊緣留空隙，血片一端較薄，適于細胞形態(tài)觀察；另一端較厚，適用于寄生蟲的尋找和白細胞減少時的分類計數(shù)。25（三）注意事項3染色時應(yīng)防止染色液干而出現(xiàn)沉淀物，沖洗時不能先傾倒染液應(yīng)緩緩加水，使沉渣浮起溢去。染色時間的長短與溫度有關(guān)，天熱

6、時間短些，天冷時間長些，也可在顯微鏡下染色，白細胞的細胞核和細胞漿內(nèi)之顆粒清楚顯現(xiàn)時，即可沖洗。稀釋液過酸時，紅細胞和嗜酸性顆粒染成鮮紅色，白細胞核往往不易著色，或色甚淺；稀釋液過堿時，白細胞核色澤甚深，紅細胞呈紫紅色，嗜酸性顆粒呈暗紅色。26（三）注意事項4分類計數(shù)時如見到異?；蛭闯墒彀准毎矐?yīng)按不同種類分別計數(shù)，求出其百分數(shù)，應(yīng)注意中性分葉核粒細胞內(nèi)有無中毒顆粒和空泡。如見到空泡、有核紅細胞，也要同時記下，但不列入白細胞分類計數(shù)的百分率內(nèi)。 27NE B LM白細胞分類28細胞名稱 ( 簡稱 ) 直徑 細胞核 細胞漿 比 值 百分數(shù)() 中性粒細胞 (N) 嗜酸性粒細胞 (E) 嗜堿性粒

7、細胞 (B) 淋巴細胞 (L) 單核細胞 （ M ）10 一 15 11 一 16 10 一 l2 6 一 15 10 一 20 淡紫紅色，核分 2 5 葉，或呈杵狀。 深紫紅色，二葉核，呈眼鏡樣。 核結(jié)構(gòu)不清，分葉不明顯。 深紫紅色，圓或橢圓，染色質(zhì)致密成團塊樣。 深紫紅色，腎形、馬蹄形或不規(guī)則形，有扭曲拆疊感，染色質(zhì)呈粗網(wǎng)狀。 淡紅色漿，均勻布滿淺紫紅色細小顆粒。 淡紅色漿，布滿粗大，圓形而均勻一致紅的桔紅色顆粒。 淡紅色漿中有大小不等、分布不勻的藍黑色顆粒，并常覆蓋核上。 漿少，透明藍色，一般無顆粒，大淋巴細胞漿較多，可含有少量淡紫紅色顆粒。 漿多，淡灰藍色，有細小紫紅色顆粒，似灰塵樣彌散分布于漿中。 0.50-0.70 （ 50 70 ） 0.005-0. 05 （ 0.5 5） 0-0.01 （ 0 1 ） 0.2-0.40 （20 40） 0.03-0.80 （ 3 8 ） 29中性桿狀核粒細胞30 中性分葉核粒細胞31 中性分葉核粒細胞32 單核細胞33單核細胞