急性毒性作用以及其試驗方法

1、關(guān)于急性毒性作用及其試驗方法第一張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、概念和試驗?zāi)康? 急性毒性（acute toxicity）概念 指機(jī)體（人或?qū)嶒瀯游铮┮淮?，?4小時內(nèi)多次接觸外來化合物所引起的中毒效應(yīng)（包括死亡）。 2 急性毒性試驗 是研究一次或24小時內(nèi)多次給予實驗動物被檢化學(xué)物后，觀察在短期內(nèi)（一般7天）引起動物毒性表現(xiàn)的實驗。第二張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月3 急性毒性試驗的目的 (1) 測定受試物對一種或幾種實驗動物的半數(shù)致死量（LD50），以初步估計其對人類毒 害的危險性。 (2) 了解受試物的毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能的靶器官，闡明受試物急性毒性的劑量反應(yīng)關(guān)

2、系。 (3) 為進(jìn)一步進(jìn)行亞慢性和慢性試驗以及其它特殊毒性試驗的劑量設(shè)計和毒性判定指標(biāo)的選擇提供依據(jù)第三張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月二、實驗動物的選擇 動物種類 一般常用大鼠或小鼠；如果同時用兩種動物，其中一種為非嚙齒類如狗、猴等更為理想 2動物年齡 動物年齡不易過老過幼，一般應(yīng)選用初成年者， 大、小鼠為出生后23個月左右，體重一般分別為200g（180240g）和20g（1825g）左右； 狗為生后一年左右。 所有動物進(jìn)入實驗室后，至少飼養(yǎng)觀察一周，選取其健康動物，體重相差應(yīng)在10以內(nèi)，動物性別除另有要求，雌雄分別試驗外，一般常雌雄各半。 第四張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于202

3、2年6月三、給予被檢物的途徑和方法 原則上要求與人類攝入該物質(zhì)的實際途徑相同，對食品中化學(xué)物質(zhì)來說，主要是經(jīng)口給予，在急性毒性試驗中，多采用灌胃法。 四、觀察指標(biāo)和時間 1.觀察指標(biāo) 在測定LD50中，主要觀察指標(biāo)：動物死亡數(shù)目,動物主要中毒癥狀和開始出現(xiàn)的時間死亡的時間也要記錄。 第五張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月器官系統(tǒng) 觀察項目 中毒后一般表現(xiàn) 中樞神經(jīng)系統(tǒng) 和軀體運(yùn)動系統(tǒng) 行為 姿態(tài)改變、叫聲異常、不安、呆臥少動 動作 痙攣、震顫、運(yùn)動失調(diào)、麻痹、驚厥、強(qiáng)制性動作 對刺激反 應(yīng)性 易興奮、知覺過敏或缺乏知覺 肌肉張力 強(qiáng)直、馳緩 血液循環(huán)系統(tǒng) 心區(qū)觸診 震顫、心動過速或過緩

4、、心律不齊、心搏過強(qiáng)或減弱 腸胃系統(tǒng) 腹形 膨脹、凹陷、嘔吐、腹瀉、便秘 糞便硬度 顏色 不成形、黑色或灰色 嚙齒類動物中毒表現(xiàn)觀察項目 第六張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月生殖泌尿系統(tǒng) 陰戶、乳腺 膨脹、分泌增多 陰莖 脫垂 會陰部 被糞便污穢 皮膚和毛發(fā) 顏色、張力 發(fā)紅、褶皺、松弛、出現(xiàn)皮疹、豎毛 粘膜 結(jié)膜、口腔 分泌物增多、充血、蒼白、紫紺、黃疸 眼 眼瞼 上瞼下垂 眼球 眼球突出、眼球震顫 透明度 混濁 其它 直腸、腳爪部的皮膚溫度 降低或升高 一般情況 姿勢正常、消瘦 第七張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月2 觀察時間 1）一般觀察一周即可。因急性毒性實驗中，動

5、物的中毒癥狀以及死亡，一般多出現(xiàn)在給予被檢物后2448h以內(nèi)。2）如中毒反應(yīng)出現(xiàn)較遲，主要在48h或34天后出現(xiàn)，則觀察期也必須相應(yīng)延長至2周甚至4周，特別是4870h內(nèi)。 第八張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 急性毒性評價第九張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、 半數(shù)致死量和急性毒作用帶半數(shù)致死量 1）LD50值受多種因素影響： 包括：實驗動物的物種、品系、性別、年齡、受試化合物濃度及稀釋溶液的性質(zhì)、喂飼條件以及試驗者的熟練程度等。2）存在一定的取樣誤差3）LD50是一個點的界限，所以是一個質(zhì)反應(yīng)，而不能代表受試物的急性特征。 第十張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于202

6、2年6月2 急性毒作用帶（acute effect zone, Zac）： 指化合物的毒性上限與毒性下限的比值，也就是引起試驗動物的死亡之劑量與最低劑量的劑量范圍的寬窄。通常以LD50代表毒性上限，急性閾劑量（閾濃度）代表毒性下限，其公式為： Zac=LD50LimacZac值的大小可反應(yīng)急性閾劑量距離LD50的寬窄。Zac值越大，表明化合物引起急性死亡的危險越小，反之表明引起急性死亡的危險性越大。 二、急性毒性分級 目前，我國食品安全性毒理學(xué)評價程序中，借用國際上的六級標(biāo)準(zhǔn)。第十一張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月急性毒性分級大鼠經(jīng)口LD50(mg/Kg體重）大約相當(dāng)于體重70Kg人

7、的致死劑量幾種化學(xué)物質(zhì)急性毒性舉例6級，極毒 1 稍嘗，7滴肉毒桿菌毒素（致死量3050mg人）5級，劇毒1507滴1茶匙對硫磷（615） 西力生（30） 磷化鋅（47）4級，中等毒51500 1茶匙35g倍硫磷（250395）氯丹（57） 六六六（125）敵百蟲（450）3級，低毒 5015000 35350g二氯乙烷（770） 苯甲酸鈉（2000） 賽力散（2080）棉草枯（5000）2級，實際無毒500115000 3501050g化森鋅（5200）驅(qū)蚊酯（8200）1級，無毒 15000 1050g福美鐵（17000） 第十二張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) LD50計

8、算方法 第十三張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、寇氏法（也叫平均劑量法）1 原理要求各組實驗動物數(shù)相等，相鄰組劑量成等比級數(shù)，若滿足此要求，則受試物劑量的對數(shù)與死亡率成比例關(guān)系要求各劑量大致有一半組所產(chǎn)生的反應(yīng)率在1050之間，另一半在5090之間，最好還有反應(yīng)率在0及100的組，故需預(yù)試。 2 劑量分組小動物常設(shè)510個劑量組，每組610只。首先確定最高、最低量兩個組，分別可使動物90和10死亡。預(yù)試時按2倍或3倍遞增劑量，每次三個劑量水平（如200，400，800mgKg或100、300、900mgKg）測試動物死亡率。 第十四張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月3 計算

9、公式： 當(dāng)p10，pk1，上式可簡化為 其中，xk:最高劑量的對數(shù)； d：相鄰兩組劑量之比的對數(shù)； pi：各組死亡率； i：組數(shù)； SElgLD50：標(biāo)準(zhǔn)誤差對數(shù)； ni：各組動物數(shù)。 LD50的95%可信限為： lg1（lgLD501.96SELD50） SE lg LD50 = dpi (1- pi )/ni 1/2第十五張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月三、霍恩法 （ 也叫劑量遞增法或流動平均法）1 特點動物數(shù)量固定，劑量也固定，因而簡單易行使用動物數(shù)量較少但可信限范圍較大，不夠精確2 劑量分組 一般分四或五組，每組四或五只動物，各組中雌鼠與雄鼠數(shù)應(yīng)分別相等，該方法對劑量系列要求嚴(yán)格，主要有兩種：第十六張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月1）劑量遞增公比為： 即， 1.002.154.64 10t t=0,1,2，32）劑量遞增公比為： 即， 1.003.16 10t t=0,1,2，33 預(yù)試（1） 以10，100，1000mgKg劑量，各用23只小鼠灌胃。根據(jù)24h內(nèi)所產(chǎn)生的效應(yīng)和反應(yīng)來初步判斷毒性。 （2） 以215mgKg劑量用5只動物灌胃，以24h內(nèi)產(chǎn)生的效應(yīng)和反應(yīng)來初步判斷毒性。 第十