（新高考）2023屆高考生物一輪復(fù)習(xí)講義 第10單元 第6課時 基因工程的基本工具和基本操作程序 新人教版

1、PAGE 26PAGE 第6課時基因工程的基本工具和基本操作程序課標(biāo)要求1.闡明DNA重組技術(shù)的實(shí)現(xiàn)需要利用限制性內(nèi)切核酸酶、DNA連接酶和載體三種基本工具。2.闡明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞和目的基因的檢測與鑒定等步驟。3.按照實(shí)驗(yàn)操作步驟，進(jìn)行DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)。4.利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增DNA片段并完成電泳鑒定，或運(yùn)用軟件進(jìn)行虛擬PCR實(shí)驗(yàn)。考點(diǎn)一重組DNA技術(shù)的基本工具1基因工程的概念(1)手段：按照人們的愿望，通過轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性。(2)目的：創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物

2、產(chǎn)品。(3)水平：分子水平。由于在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工，因此又叫作重組DNA技術(shù)。拓展基因工程的理論基礎(chǔ)2重組DNA技術(shù)的基本工具(1)限制性內(nèi)切核酸酶(也稱“限制酶”)(2)DNA連接酶(3)載體(1)源于選擇性必修3P71“旁欄思考”：原核生物中存在限制酶的意義是什么？提示原核生物中限制酶的作用是切割外源DNA以保證自身安全，防止外來病原物的危害。限制酶來源于原核生物，為什么不能切割自己的DNA分子？提示限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在該酶的識別序列或識別序列已經(jīng)被修飾。(2)源于選擇性必修3P72“旁欄思考”：DNA連接酶和DNA聚合酶不是(填“是”或“

3、不是”)一回事。原因是：DNA連接酶連接的是兩個DNA片段，而DNA聚合酶是把單個的脫氧核苷酸連接到已有的DNA片段上。DNA聚合酶起作用時需要以一條DNA鏈為模板，而DNA連接酶不需要模板。延伸應(yīng)用圖解限制酶的選擇原則(1)不破壞目的基因原則：如圖甲中可選擇Pst，而不選擇Sma。(2)保留標(biāo)記基因、啟動子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)原則：質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因，所以所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu)，如圖乙中不選擇Sma。(3)確保出現(xiàn)相同黏性末端原則：通常選擇與切割目的基因相同的限制酶，如圖甲中Pst；為避免目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，如圖甲也可

4、選擇Pst和EcoR兩種限制酶?？枷蛞幌拗泼负虳NA連接酶1(2022長春市高三期中)下表為常用的限制性內(nèi)切核酸酶(限制酶)及其識別序列和切割位點(diǎn)，由此推斷以下說法中，錯誤的是()限制酶名稱識別序列和切割位點(diǎn)限制酶名稱識別序列和切割位點(diǎn)BamHGGATCCKpnGGTACCEcoRCAATTCSau3AGATCHindGTYRACSmaCCCGGG注：Y為C或T，R為A或G。AHind、Sma兩種限制酶切割后形成平末端BSau3A限制酶的切割位點(diǎn)在識別序列的外部CBamH和Sau3A兩種限制酶切割后形成相同的黏性末端D一種限制酶一定只能識別一種核苷酸序列答案D解析Hind、Sma兩種限制酶沿著

5、中軸線切口切開，切割后形成平末端，A項(xiàng)正確；Sau3A限制酶識別GATC序列，切割位點(diǎn)在識別序列的外部，B項(xiàng)正確；BamH限制酶識別GGATCC序列，Sau3A限制酶識別GATC序列，切割后形成相同的黏性末端GATC，C項(xiàng)正確；Hind能識別GTCAAC，也能識別GTTAAC，D項(xiàng)錯誤。2第三代疫苗DNA疫苗是指將編碼保護(hù)性抗原蛋白的基因(如圖甲)插入到適宜的質(zhì)粒(如圖乙)中得到的重組DNA分子，將其導(dǎo)入人體內(nèi)，在人體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的產(chǎn)物可直接誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答，且可持續(xù)一段時間。限制性內(nèi)切核酸酶的切點(diǎn)分別是Bgl、EcoR和Sau3A。下列分析錯誤的是()A構(gòu)建DNA疫苗時，可用Bgl和Sau3A

6、切割目的基因和質(zhì)粒B圖乙中只用EcoR切割后的質(zhì)粒，含有2個游離的磷酸基團(tuán)C用EcoR切割目的基因和質(zhì)粒，再用DNA連接酶連接，只產(chǎn)生1種連接產(chǎn)物D抗原基因在體內(nèi)表達(dá)時不需要解旋酶答案C解析從圖甲看出，用EcoR切割目的基因后兩端各有一個切口，與圖乙中EcoR切口對接時，可有兩種可能，即可產(chǎn)生兩種重組DNA，C項(xiàng)錯誤；基因表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯，轉(zhuǎn)錄時不需要解旋酶，在RNA聚合酶的作用下，DNA即可解旋，D項(xiàng)正確?？枷蚨蚬こ梯d體的應(yīng)用3質(zhì)粒是基因工程最常用的載體，下列有關(guān)質(zhì)粒的說法正確的是()A質(zhì)粒不僅存在于細(xì)菌中，也存在于某些病毒中B細(xì)菌的基因只存在于質(zhì)粒上C質(zhì)粒為小型環(huán)狀DNA分子D質(zhì)粒是

7、基因工程中的重要工具酶之一答案C4下列有關(guān)基因工程中載體的說法，正確的是()A在進(jìn)行基因工程操作中，被用作載體的質(zhì)粒都是天然質(zhì)粒B所有的質(zhì)粒都可以作為基因工程中的載體C質(zhì)粒是一種獨(dú)立于細(xì)菌染色體外的鏈狀DNA分子D作為載體的質(zhì)粒DNA分子上應(yīng)有對重組DNA進(jìn)行鑒定和選擇的標(biāo)記基因答案D解析在進(jìn)行基因工程操作中，被用作載體的質(zhì)粒是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過人工改造的，A錯誤；具有一至多個限制酶切點(diǎn)、具有標(biāo)記基因的質(zhì)粒才可以作為基因工程中的載體，B錯誤；質(zhì)粒是一種獨(dú)立于真核細(xì)胞細(xì)胞核或原核細(xì)胞擬核DNA之外的環(huán)狀DNA分子，C錯誤；作為載體的質(zhì)粒DNA分子上應(yīng)有對重組DNA進(jìn)行鑒定和選擇的標(biāo)記基因，

8、而且能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存，D正確。考點(diǎn)二基因工程的基本操作程序1目的基因的篩選與獲取(1)目的基因：在基因工程的設(shè)計(jì)和操作中，用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等的基因。(2)篩選合適的目的基因從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中進(jìn)行篩選是較為有效的方法之一。利用序列數(shù)據(jù)庫和序列比對工具進(jìn)行篩選。(3)目的基因的獲取人工合成目的基因。常用PCR特異性地快速擴(kuò)增目的基因歸納總結(jié)PCR技術(shù)和DNA復(fù)制的比較易錯提醒(1)在PCR過程中實(shí)際加入的為dNTP(即dATP、dGTP、dTTP、dCTP)，既可作為合成DNA子鏈的原料，又可為DNA的合成提供能量。(2)引物既可以是DNA單鏈，也

9、可以為RNA單鏈。細(xì)胞內(nèi)的DNA進(jìn)行復(fù)制時，也需要引物，一般為RNA片段。(3)真核細(xì)胞和細(xì)菌的DNA聚合酶都需要Mg2激活。因此，PCR反應(yīng)緩沖溶液中一般要添加Mg2。(4)PCR擴(kuò)增過程中的循環(huán)圖示與規(guī)律循環(huán)次數(shù)123nDNA分子數(shù)2482n含引物A(或B)的DNA分子數(shù)1372n1同時含引物A、B的DNA分子數(shù)0212222262322n2共消耗的引物數(shù)量22112622121423122n12源于選擇性必修3P77“相關(guān)信息”：Bt抗蟲蛋白基因產(chǎn)生的Bt抗蟲蛋白只在某類昆蟲腸道的堿性環(huán)境中才能表現(xiàn)出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，腸道細(xì)胞也無特異性受體，因此，Bt抗蟲蛋白不會對人畜產(chǎn)生危

10、害。2基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因工程的核心(1)目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。(2)基因表達(dá)載體的組成及作用(3)構(gòu)建過程易錯提醒啟動子、終止子、起始密碼子、終止密碼子對比項(xiàng)目啟動子終止子起始密碼子終止密碼子本質(zhì)DNADNAmRNAmRNA位置目的基因上游目的基因下游mRNA首端mRNA尾端功能RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停下來翻譯的起始信號(編碼氨基酸)翻譯的結(jié)束信號(不編碼氨基酸)3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞生物種類植物動物微生物常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、花粉管通道法顯微注射法Ca2處理法受

11、體細(xì)胞體細(xì)胞或受精卵受精卵原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程將目的基因插入Ti質(zhì)粒的TDNA中農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上表達(dá)將含有目的基因的表達(dá)載體提純?nèi)÷?受精卵)顯微注射受精卵發(fā)育獲得具有新性狀的動物Ca2處理細(xì)胞細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)基因表達(dá)載體導(dǎo)入辨析1轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。此處“轉(zhuǎn)化”與肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中的“轉(zhuǎn)化”含義相同，實(shí)質(zhì)都是基因重組。2農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中的兩次拼接和兩次導(dǎo)入,第一次拼接是將目的基因拼接到Ti質(zhì)粒的TDNA上，第二次拼接非人工操作是指插入目的基因的TDNA拼接到受體細(xì)胞的染色體DNA上；第

12、一次導(dǎo)入是將含目的基因的Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌，第二次導(dǎo)入非人工操作是指含目的基因的TDNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。3農(nóng)桿菌特點(diǎn)能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物，而對大多數(shù)單子葉植物沒有侵染能力。農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有Ti質(zhì)粒，當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后，能將Ti質(zhì)粒上的TDNA轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。4目的基因的檢測與鑒定考向一目的基因的獲取5利用PCR既可以快速擴(kuò)增特定基因，也可以檢測基因的表達(dá)。下列有關(guān)PCR的敘述，錯誤的是()APCR用的DNA聚合酶是一種耐高溫酶B變性過程中，雙鏈DNA的解開不需要解旋酶C復(fù)性過程中，引物與模板鏈的結(jié)合遵循堿基互補(bǔ)配對原則D延伸過程中，需要

13、DNA聚合酶、ATP和4種核糖核苷酸答案D6利用重疊延伸PCR技術(shù)進(jìn)行定點(diǎn)突變可以實(shí)現(xiàn)對纖維素酶基因進(jìn)行合理性改造，其過程如下圖所示。下列分析不正確的是()APCR1過程中的產(chǎn)物AB是依賴引物a和引物b擴(kuò)增的結(jié)果B引物c和引物b上均含有與模板鏈不能互補(bǔ)的堿基C過程需要先加熱至90以上后再冷卻至50左右D過程需要利用引物a和引物d獲得突變產(chǎn)物AD答案D考向二基因工程的基本操作程序7(2022云南高三聯(lián)考)戊型肝炎病毒是一種RNA病毒，ORF2基因編碼的結(jié)構(gòu)蛋白(pORF2)位于病毒表面，構(gòu)成病毒的衣殼。我國科研人員利用基因工程技術(shù)，在大腸桿菌中表達(dá)pORF2，制備戊型肝炎疫苗，過程如圖。下列關(guān)于

14、該疫苗的敘述，正確的是()A過程需要的酶是RNA聚合酶，原料是A、U、G、CB重組基因表達(dá)載體上的啟動子需來源于戊型肝炎病毒C過程需要用聚乙二醇處理大腸桿菌使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)D過程大量制備pORF2蛋白前應(yīng)做相應(yīng)的檢測與鑒定答案D解析戊型肝炎病毒是一種RNA病毒，過程是以病毒RNA為模板合成DNA，獲取目的基因的過程，需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶，原料是四種脫氧核苷酸，A項(xiàng)錯誤；啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，其作用是供RNA聚合酶的識別結(jié)合以驅(qū)動目的基因的轉(zhuǎn)錄，啟動子具有物種或組織特異性，構(gòu)建在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)pORF2蛋白的載體時，需要選擇大腸桿菌細(xì)胞的啟動子

15、，而不能選擇其他物種和組織細(xì)胞的啟動子，B項(xiàng)錯誤；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是Ca2處理法，需要用Ca2處理大腸桿菌，增大大腸桿菌細(xì)胞壁的透過性，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，C項(xiàng)錯誤。8某質(zhì)粒上有Sal、Hind、BamH三種限制酶切割位點(diǎn)，同時還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程，如下圖所示。請回答下列問題：(1)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞，采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。其中用到的質(zhì)粒是_；該質(zhì)粒含有一段特殊的DNA片段，稱為_。該方法中農(nóng)桿菌的作用是_。(2)在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，和只用一種酶切割目的基因的兩端及質(zhì)粒相比，選用Hind和

16、Sal兩種酶的好處是_。(3)含有目的基因的農(nóng)桿菌可根據(jù)標(biāo)記基因進(jìn)行篩選。若農(nóng)桿菌在含有氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基上都可以生長繁殖，農(nóng)桿菌中是否已含有目的基因？_(填“是”或“否”)。為什么？_。(4)將已經(jīng)轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌進(jìn)行如下操作，篩選出符合要求的農(nóng)桿菌。先把轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌接種到A培養(yǎng)基中培養(yǎng)，長出菌落后，用無菌牙簽挑取A上的單個菌落，分別接種到B(含氨芐青霉素)和C(含四環(huán)素和氨芐青霉素)兩個培養(yǎng)基的相同位置上，一段時間后，菌落的生長狀況如圖所示。含目的基因的菌落位于B或C上的哪些菌落中？請?jiān)趫D中相應(yīng)的位置上圈出來。答案(1)Ti質(zhì)粒TDNA感染煙草細(xì)胞，把目的基因插入到煙草細(xì)胞的染色體DN

17、A上(2)防止目的基因自連和質(zhì)粒自連，以提高帶有目的基因的重組質(zhì)粒的合成效率(3)否含有目的基因的質(zhì)粒中抗四環(huán)素基因被破壞(4)如圖所示考點(diǎn)三DNA的粗提取與鑒定和DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定1DNA的粗提取與鑒定(1)基本原理原理：利用DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。DNA的性質(zhì)：DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精；DNA能溶于2molL1的NaCl溶液。DNA的鑒定：在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍(lán)色。(2)操作流程注意事項(xiàng)加入酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。2DNA片

18、段的擴(kuò)增及電泳鑒定(1)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)PCR原理：利用了DNA的熱變性原理，通過調(diào)節(jié)溫度來控制DNA雙鏈的解聚與結(jié)合。電泳：DNA分子具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷。在電場的作用下，這些帶電分子會向著與它所帶電荷相反的電極移動，這個過程就是電泳。PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。(2)PCR實(shí)驗(yàn)操作步驟(3)DNA的電泳鑒定注意事項(xiàng)1為避免外源DNA等因素的污染，PCR實(shí)驗(yàn)使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌處理。2每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換。3電泳時

19、，DNA分子的相對分子質(zhì)量越大，受到的阻力越大，遷移速率越慢，DNA分子的相對分子質(zhì)量越小，受到的阻力越小，遷移速率越快?？枷蛞籇NA的粗提取與鑒定9下列利用洋蔥進(jìn)行“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是()A將研磨液加入切碎的洋蔥，充分研磨后過濾，要棄去上清液B采用體積分?jǐn)?shù)為95%酒精溶液析出DNA的方法可去除部分雜質(zhì)C用塑料離心管是因?yàn)橛貌Ａщx心管容易破損D將白色絲狀物溶解在NaCl溶液中，加入二苯胺試劑后振蕩，觀察顏色變化答案B解析將研磨液加入切碎的洋蔥，充分研磨后過濾，要棄去沉淀物，收集上清液，A錯誤；DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精，利用這一原理可將DNA與

20、蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離，進(jìn)行DNA的粗提取，B正確；用塑料離心管可減少提取過程中DNA的損失，C錯誤；將白色絲狀物溶解在NaCl溶液中，加入二苯胺試劑后，將試管置于沸水中加熱5min，觀察顏色變化，D錯誤。10下圖是“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)中的兩個操作步驟示意圖。下列相關(guān)敘述不正確的是()A選用植物細(xì)胞提取DNA時需先研磨破碎細(xì)胞B圖2所示實(shí)驗(yàn)操作中有一處明顯錯誤，可能導(dǎo)致試管2中藍(lán)色變化不明顯C圖1所示操作的原理是DNA不能溶于酒精，而蛋白質(zhì)等雜質(zhì)能溶于酒精D圖2試管1的作用是證明物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液遇二苯胺試劑出現(xiàn)藍(lán)色答案D解析圖2所示實(shí)驗(yàn)的試管中溶液的液面高于燒杯中的液

21、面，可能導(dǎo)致加熱不充分，試管2中藍(lán)色變化不明顯，B正確；圖2試管1起對照作用，目的是證明沸水浴下物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液遇二苯胺試劑不會出現(xiàn)藍(lán)色，而DNA遇二苯胺試劑出現(xiàn)藍(lán)色，D錯誤。考向二DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定11利用PCR可以在體外進(jìn)行DNA片段的擴(kuò)增，下列有關(guān)“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)敘述，錯誤的是()APCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓蒸汽滅菌處理BPCR利用了DNA的熱變性原理CPCR所用的緩沖液和酶從冰箱拿出之后，迅速融化D在向微量離心管中添加反應(yīng)組分時，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換答案C解析PCR所用緩

22、沖液和酶從冰箱拿出之后，應(yīng)放在冰塊上緩慢融化，這樣才能不破壞緩沖液中穩(wěn)定性較差的成分，同樣保護(hù)酶的活性不被破壞，C錯誤。12下列有關(guān)電泳的敘述，不正確的是()A電泳是指帶電分子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程B待測樣品中DNA分子的大小和構(gòu)象、凝膠的濃度等都會影響DNA在電泳中的遷移速率C進(jìn)行電泳時，帶電分子會向著與其所帶電荷相同的電極移動DPCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定答案C重溫高考真題演練1(2019江蘇，10)下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的敘述，錯誤的是()A用同樣方法從等體積兔血和雞血中提取的DNA量相近BDNA析出過程中，攪拌操作要輕柔以防DNA斷裂C預(yù)冷的酒精可用來進(jìn)一步純化粗

23、提的DNAD用二苯胺試劑鑒定DNA需要進(jìn)行水浴加熱答案A解析哺乳動物(如兔)成熟的紅細(xì)胞中無細(xì)胞核和眾多細(xì)胞器，不能提取到DNA，故兔血不宜作為該實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)材料，A錯誤；為防止DNA斷裂，在DNA析出過程中攪拌操作要輕柔且沿著一個方向，B正確；DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精溶液，預(yù)冷的酒精溶液可用來進(jìn)一步純化粗提的DNA，C正確；在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色，因此，用二苯胺試劑鑒定DNA需要進(jìn)行水浴加熱，D正確。2(2020北京，12)為了對重金屬污染的土壤進(jìn)行生物修復(fù)，研究者將從楊樹中克隆的重金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(HMA3)基因與外源高效啟動子連接，導(dǎo)入楊樹基因組中

24、(如圖)。為檢測獲得的轉(zhuǎn)基因楊樹苗中是否含有導(dǎo)入的HMA3基因，同時避免內(nèi)源HMA3基因的干擾，在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，應(yīng)選擇的引物組合是()ABCD答案B解析引物擴(kuò)增的片段含有啟動子和HMA3基因，引物擴(kuò)增的片段不含啟動子，引物擴(kuò)增的片段既含有啟動子，又含有HMA3基因序列。圖示中克隆的重金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(HMA3)基因與外源高效啟動子連接，導(dǎo)入楊樹基因組中，若要檢測獲得的轉(zhuǎn)基因楊樹苗中是否含有導(dǎo)入的HMA3基因和高效啟動子，需要檢測是否含有高效啟動子序列和HMA3基因序列，應(yīng)選擇的引物組合是，B正確。3(2021山東，25)人類基因啟動子上游的調(diào)控序列中含有BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)，該位點(diǎn)結(jié)合BC

25、L11A蛋白后，基因的表達(dá)被抑制。通過改變該結(jié)合位點(diǎn)的序列，解除對基因表達(dá)的抑制，可對某種地中海貧血癥進(jìn)行基因治療?？蒲腥藛T擴(kuò)增了基因上游不同長度的片段，將這些片段分別插入表達(dá)載體中進(jìn)行轉(zhuǎn)化和熒光檢測，以確定BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)的具體位置。相關(guān)信息如圖所示。(1)為將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入載體指導(dǎo)熒光蛋白基因表達(dá)，需在引物末端添加限制酶識別序列。據(jù)圖可知，在F1F7末端添加的序列所對應(yīng)的限制酶是_，在R末端添加的序列所對應(yīng)的限制酶是_。本實(shí)驗(yàn)中，從產(chǎn)物擴(kuò)增到載體構(gòu)建完成的整個過程共需要_種酶。(2)將構(gòu)建的載體導(dǎo)入除去BCL11A基因的受體細(xì)胞，成功轉(zhuǎn)化后，含F(xiàn)1F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的載體表達(dá)熒

26、光蛋白，受體細(xì)胞有熒光，含F(xiàn)7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光。含F(xiàn)7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光的原因是_。(3)向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，含F(xiàn)1F4與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞不再有熒光，而含F(xiàn)5F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞仍有熒光。若基因上游調(diào)控序列上與引物序列所對應(yīng)的位置不含有BCL11A蛋白的結(jié)合位點(diǎn)序列，據(jù)此結(jié)果可推測，BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)位于_，理由是_。答案(1)SalEcoR6(2)F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達(dá)(3)引物F4與F5在調(diào)控序列上所對應(yīng)序列之間的區(qū)段上根據(jù)有無熒光情況判斷，F(xiàn)1F4與R擴(kuò)增產(chǎn)物上均有結(jié)合位點(diǎn)，因此結(jié)合位點(diǎn)位于F4所對應(yīng)調(diào)控序列的下

27、游(右側(cè))；F5F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物上均無結(jié)合位點(diǎn)，可知結(jié)合位點(diǎn)位于F5所對應(yīng)調(diào)控序列的上游(左側(cè))，所以結(jié)合位點(diǎn)位于引物F4與F5在調(diào)控序列上所對應(yīng)序列之間的區(qū)段上解析(1)據(jù)題意可知，需要將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入并指導(dǎo)熒光蛋白基因的表達(dá)，則含有啟動子的擴(kuò)增后的產(chǎn)物讀取方向與熒光蛋白基因的讀取方向一致，故擴(kuò)增后的產(chǎn)物中的R端與熒光蛋白基因中限制酶Mun識別序列端結(jié)合，才能保證擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入并指導(dǎo)熒光蛋白基因的表達(dá)。要做到定向插入，需要引物末端兩端添加限制酶的識別序列，且被限制酶識別并切割后，兩端的黏性末端不能相同。而擴(kuò)增后的產(chǎn)物中可能含有Mun和Xho的識別位點(diǎn)，故在引物末端添加限制酶的識別

28、序列不能被限制酶Mun和Xho所識別，故應(yīng)該選用添加限制酶EcoR和限制酶Sal識別序列，由圖中可知，限制酶Mun識別并切割后的黏性末端與限制酶EcoR識別并切割后的黏性末端相同，故R末端添加的序列所對應(yīng)的限制酶是EcoR，在F1F7末端添加的序列所對應(yīng)的限制酶是Sal；熒光蛋白基因中含有限制酶EcoR的識別位點(diǎn)，故對載體使用限制酶Mun和Xho切割。綜上所述，對載體使用限制酶Mun和Xho切割，對擴(kuò)增后的產(chǎn)物用限制酶EcoR和限制酶Sal切割，然后在DNA連接酶的催化作用下，連接形成重組載體；產(chǎn)物擴(kuò)增中需要使用TaqDNA聚合酶催化，合成更多的產(chǎn)物，故從產(chǎn)物擴(kuò)增到載體構(gòu)建完成的整個過程共需要

29、6種酶，分別是TaqDNA聚合酶、限制酶EcoR、限制酶Sal、限制酶Mun、限制酶Xho、DNA連接酶。(2)受體細(xì)胞中已經(jīng)除去BCL11A基因，故擴(kuò)增產(chǎn)物中的BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)不會抑制熒光蛋白基因的表達(dá)；基因的表達(dá)需要RNA聚合酶與啟動子結(jié)合，才能完成熒光蛋白基因的轉(zhuǎn)錄過程；含 F1F6與 R 擴(kuò)增產(chǎn)物的載體表達(dá)熒光蛋白，受體細(xì)胞有熒光，含F(xiàn)7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光，則可能是F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達(dá)。(3)向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，此時重組載體上的BCL11A基因表達(dá)，產(chǎn)生BCL11A蛋白，BCL11A蛋白與BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合后，導(dǎo)致熒光

30、蛋白基因被抑制；含F(xiàn)1F4與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞不再有熒光，則說明BCL11A蛋白的結(jié)合位點(diǎn)在引物F4與引物R之間的序列上；含F(xiàn)5F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞仍有熒光，則說明BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)在引物F5的上游序列，故據(jù)此結(jié)果可推測，BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)位于引物F4與F5在調(diào)控序列上所對應(yīng)序列之間的區(qū)段上。一、易錯辨析1限制酶也可以識別和切割RNA()2DNA連接酶能將兩堿基通過氫鍵連接起來()3E.coliDNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端()4用PCR方法擴(kuò)增目的基因時需要設(shè)計(jì)兩種引物()5DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精()6在凝膠中DNA分子的遷移速率只與DNA分

31、子的大小相關(guān)()二、填空默寫1(選擇性必修3 P67)基因工程：按照人們的愿望，通過轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。2(選擇性必修3 P71)限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開。3(選擇性必修3 P72)載體上有特殊的標(biāo)記基因，便于重組DNA分子的篩選。4(選擇性必修3 P77)PCR反應(yīng)需要在一定的緩沖溶液中才能進(jìn)行，需提供DNA模板、2種引物、4種脫氧核苷酸和耐高溫的DNA聚合酶。5(選擇性必修3 P80)基因表達(dá)載體是載體的一種，除目的基因、標(biāo)記基因外，還必須含有啟動子、終止子等。6(選

32、擇性必修3 P81)轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。課時精練一、選擇題1若要利用某目的基因(見圖甲)和P1噬菌體載體(見圖乙)構(gòu)建重組DNA(見圖丙)，限制性內(nèi)切核酸酶的酶切位點(diǎn)分別是Bgl(AGATCT)、EcoR(GAATTC)和Sau3A(GATC)。下列分析合理的是()A用EcoR切割目的基因和P1噬菌體載體B用Bgl和EcoR切割目的基因和P1噬菌體載體C用Bgl和Sau3A切割目的基因和P1噬菌體載體D用EcoR和Sau3A切割目的基因和P1噬菌體載體答案D解析解答本題的關(guān)鍵是要看清切割后目的基因插入的方向，只有用EcoR和Sau3A切割目的基因

33、和P1噬菌體載體，構(gòu)建的重組DNA中RNA聚合酶在插入的目的基因上的移動方向才一定與圖丙相同。2農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒是植物基因工程中常用的載體，下列相關(guān)敘述正確的是()ATi質(zhì)粒是能夠自主復(fù)制的單鏈DNABTi質(zhì)粒中磷酸基團(tuán)都與兩個脫氧核糖相連接C重組Ti質(zhì)粒的受體細(xì)胞只能是植物愈傷組織細(xì)胞DTi質(zhì)粒上的基因可全部整合到受體細(xì)胞染色體上答案B3利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似(如下圖所示)。圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。下列敘述錯誤的是()A用PCR方法擴(kuò)增目的基因時不必知道基因的全部序列B設(shè)計(jì)引物時需要避免引物之間形成堿基互補(bǔ)配對而造成引物自連C復(fù)性

34、溫度過高可能導(dǎo)致PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物D第四輪循環(huán)產(chǎn)物中同時含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例為15/16答案D解析用PCR方法擴(kuò)增目的基因時，要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成(兩種)引物，但不必知道基因的全部序列，A正確；復(fù)性的目的是使兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條DNA單鏈結(jié)合，因此復(fù)性溫度過高可能引起兩種引物不能與兩條DNA單鏈結(jié)合，進(jìn)而導(dǎo)致PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物，C正確；DNA復(fù)制為半保留復(fù)制，第四輪循環(huán)即DNA復(fù)制4次，共形成2416個DNA分子，其中含有最初模板鏈的2個DNA分子含有引物A或引物B，其余14個DNA分子均含有引物A和引物B，所

35、以第四輪循環(huán)產(chǎn)物中同時含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例為14/167/8，D錯誤。4(2022北京高三一模)下圖表示pBR322質(zhì)粒和人生長激素基因所在片段的結(jié)構(gòu)信息，將二者構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌并進(jìn)行篩選。下列敘述錯誤的是()注：AmpR：氨芐青霉素抗性基因，TetR：四環(huán)素抗性基因A應(yīng)選擇的限制酶組合是酶F和酶GB所選用的受體菌不能含有AmpR和TetR基因C用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選出含重組質(zhì)粒的受體菌D同時用三種限制酶處理圖中質(zhì)粒，電泳后可得到4個條帶答案C解析為避免切割后DNA片段的自身環(huán)化，又保留質(zhì)粒上的標(biāo)記基因，切割時應(yīng)選擇的限制酶組合是酶F和酶G，A正確；所選用的受體

36、菌不能含有AmpR和TetR基因，以便于對含有目的基因的受體菌的選擇，B正確；用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選出的有導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體菌和導(dǎo)入原質(zhì)粒的受體菌，C錯誤；據(jù)圖可知，同時用三種限制酶處理圖中質(zhì)粒，因酶E有兩個作用位點(diǎn)，故將質(zhì)粒切割成了4個DNA片段，電泳后可得到4個條帶，D正確。5科學(xué)家將馬鈴薯胰蛋白酶抑制劑基因Pin導(dǎo)入楊樹細(xì)胞，培育成了抗蟲楊樹。下圖表示含目的基因的DNA分子和農(nóng)桿菌質(zhì)粒，圖中AmpR表示氨芐青霉素抗性基因，NeoR表示新霉素抗性基因，箭頭表示識別序列完全不同的4種限制酶的酶切位點(diǎn)。下列敘述不正確的是()A目的基因插入到質(zhì)粒的TDNA上，才能整合到受體細(xì)胞染色體中B為使

37、目的基因與質(zhì)粒高效重組，最好選用EcoR和PstC成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞會表現(xiàn)為不抗氨芐青霉素、抗新霉素D可用PCR等技術(shù)或抗原抗體雜交技術(shù)檢測目的基因是否表達(dá)答案D解析農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的TDNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上，根據(jù)這一特點(diǎn)，將目的基因插入到質(zhì)粒的TDNA上，才能整合到受體細(xì)胞染色體中，A正確；應(yīng)選用EcoR和Pst切割質(zhì)粒，氨芐青霉素抗性基因被破壞，故成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞會表現(xiàn)為不抗氨芐青霉素、抗新霉素，C正確；檢測目的基因是否表達(dá)應(yīng)檢測是否成功產(chǎn)生蛋白質(zhì)，可用抗原抗體雜交技術(shù)，D錯誤。6(2022揚(yáng)州市高三期中)實(shí)時熒光RTPCR可用于RNA病毒

38、的核酸檢測，其原理是：在PCR復(fù)性過程中探針和引物一起與模板結(jié)合，探針兩側(cè)分別帶有熒光基團(tuán)和抑制熒光發(fā)出的淬滅基團(tuán)，新鏈延伸過程中，DNA聚合酶會破壞探針，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離而發(fā)出熒光。利用RTPCR進(jìn)行核酸檢測的相關(guān)過程如圖所示。下列說法錯誤的是()A做RTPCR之前，需要先根據(jù)cDNA的核苷酸序列合成引物和探針BRNA不能作為PCR擴(kuò)增的模板，故需要將樣本中的RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA后再進(jìn)行擴(kuò)增C若檢測結(jié)果有強(qiáng)烈熒光信號發(fā)出，說明被檢測者沒有感染病毒D病毒的檢測還可以檢測病毒表面的物質(zhì)或病毒引發(fā)產(chǎn)生的抗體，其原理都是抗原抗體雜交答案C解析PCR擴(kuò)增必須以DNA為模板，RNA不能作為PC

39、R擴(kuò)增的模板，所以需要將樣本中的RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA后再進(jìn)行擴(kuò)增，B正確；若檢測結(jié)果有強(qiáng)烈熒光信號發(fā)出，說明被檢測者極有可能感染了病毒，C錯誤。7一種雙鏈DNA分子被三種不同的限制酶切割，切割產(chǎn)物通過電泳分離，用大小已知的DNA片段的電泳結(jié)果作為分子量標(biāo)記(下圖左邊一列)。關(guān)于該雙鏈DNA，下列說法錯誤的是()A呈環(huán)狀結(jié)構(gòu)B分子質(zhì)量大小為10kbC有一個Not和兩個EcoR切點(diǎn)D其Not切點(diǎn)與EcoR切點(diǎn)的最短距離為2kb答案D解析單用EcoR處理和利用EcoR和Not雙酶切時產(chǎn)生的結(jié)果不同，說明DNA含有Not酶切位點(diǎn)，因?yàn)橛肗ot處理只產(chǎn)生了一個10kb的條帶，所以該分子必須是環(huán)狀的，且長

40、度一定是10kb，A、B正確；因?yàn)橛肗ot處理只產(chǎn)生了一個10kb的條帶，說明該環(huán)狀DNA上含有一個Not切割位點(diǎn)，單用EcoR處理后產(chǎn)生了4kb和6kb兩個條帶，說明該環(huán)狀DNA上含有2個EcoR切割位點(diǎn)，C正確；用EcoR處理后產(chǎn)生的4kb的片段，進(jìn)一步被Not酶切為3kb和1kb的片段，可以得知Not切點(diǎn)與EcoR切點(diǎn)的最短距離為1kb，最大距離為3kb，D錯誤。8科學(xué)家將蘇云金桿菌中的Bt抗蟲蛋白基因(抗蟲基因)導(dǎo)入棉花的愈傷組織細(xì)胞，鑒定后，將含抗蟲基因的受體細(xì)胞組織培養(yǎng)獲得棉花植株。經(jīng)棉鈴蟲飼喂實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)棉花植株并無抗蟲性狀，科學(xué)家提取棉花葉片細(xì)胞中的有關(guān)成分進(jìn)行了如下操作，下列分

41、析錯誤的是()A提取細(xì)胞中的蛋白質(zhì)，采用抗原抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測，若能檢測到Bt抗蟲蛋白，則可能是抗蟲基因表達(dá)效率低B若經(jīng)A檢測確定細(xì)胞中無Bt抗蟲蛋白，可采用核酸分子雜交技術(shù)檢測細(xì)胞中的RNA，若測到Bt抗蟲蛋白的mRNA，則可能是抗蟲基因能轉(zhuǎn)錄，但不能正常翻譯C若經(jīng)B檢測確定細(xì)胞中無Bt抗蟲蛋白的mRNA，可采用核酸分子雜交技術(shù)檢測細(xì)胞中的DNA，若能檢測到抗蟲基因，則可能是抗蟲基因反向插入載體DNA分子中D若經(jīng)C檢測確定細(xì)胞中無抗蟲基因，則可能只是載體DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞答案D解析抗原、抗體能特異性結(jié)合，可提取細(xì)胞中的蛋白質(zhì)，采用抗原抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測，若能檢測到Bt抗蟲蛋白，說明抗

42、蟲基因能表達(dá)。但棉花植株并無抗蟲性狀，則可能是抗蟲基因表達(dá)效率低，合成的Bt抗蟲蛋白太少，A正確；核酸分子雜交技術(shù)的原理是堿基互補(bǔ)配對，檢測細(xì)胞中的RNA，若測到Bt抗蟲蛋白的mRNA，說明抗蟲基因能轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞中無Bt抗蟲蛋白，說明抗蟲基因不能正常翻譯，導(dǎo)致棉花植株并無抗蟲性狀，B正確；核酸分子雜交技術(shù)檢測細(xì)胞中的DNA，若能檢測到抗蟲基因，而抗蟲基因又不能表達(dá)，則可能是抗蟲基因反向插入載體DNA分子中，C正確；由題干信息“鑒定后，將含抗蟲基因的受體細(xì)胞組織培養(yǎng)獲得棉花植株”可知，導(dǎo)入受體細(xì)胞的是重組DNA分子，D錯誤。9某線性DNA分子含有5000個堿基對(bp)，先用限制酶a切割，再把得到

43、的產(chǎn)物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如表。限制酶a和b的識別序列和切割位點(diǎn)如圖所示。下列敘述不正確的是()a酶切割產(chǎn)物(bp)b酶再次切割產(chǎn)物(bp)2100；1400；1000；5001900；200；800；600；1000；500Aa酶與b酶切斷的化學(xué)鍵相同Ba酶與b酶切出的黏性末端能相互連接C僅用b酶切割，則得到2個DNA分子產(chǎn)物D限制酶將一個DNA分子片段切成兩個片段需消耗兩個水分子答案C解析限制酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵，A正確；由圖可以看出，a酶和b酶切割后產(chǎn)生的黏性末端互補(bǔ)，它們之間能相互連接，B正確；由表格可以看出，b酶把大小為2100bp的DNA片段切成大小分別為1

44、900bp和200bp的兩個DNA片段，把大小為1400bp的DNA片段切成大小分別為800bp和600bp的兩個DNA片段，說明b酶在該DNA分子上有2個切割位點(diǎn)，因此僅用b酶切割，可得到3個DNA分子產(chǎn)物，C錯誤。10熒光定量PCR技術(shù)可定量檢測樣本中DNA含量，其原理是：在PCR反應(yīng)體系中加入引物的同時，加入與某條模板鏈互補(bǔ)的熒光探針，當(dāng)TaqDNA聚合酶催化子鏈延伸至探針處會水解探針，使熒光監(jiān)測系統(tǒng)接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一次，就有一個熒光分子生成(如圖)。Ct值(循環(huán)閾值)的含義為：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達(dá)設(shè)定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。下列說法不正確的是()A檢測新冠病毒時，需加入逆轉(zhuǎn)

45、錄酶將新冠病毒RNA轉(zhuǎn)化為cDNABPCR每個循環(huán)包括變性、復(fù)性(引物和模板結(jié)合)、延伸3個階段CCt值越大表示被檢測樣本中病毒數(shù)目越多，患者危險性更高D若樣本被污染，RNA酶將病毒RNA降解，檢測結(jié)果可能為陰性答案C解析Ct值越大表示被檢測樣本中病毒數(shù)目越少，患者危險性更低，C錯誤；若樣本被污染，RNA酶將病毒RNA降解，則逆轉(zhuǎn)錄無法得到相應(yīng)DNA，檢測結(jié)果可能為陰性，D正確。11某中學(xué)生物興趣小組進(jìn)行DNA的粗提取與鑒定時，選取如下實(shí)驗(yàn)材料：新鮮花椰菜、體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精、研磨液(含表面活性劑SDS、DNA酶抑制劑EDTA、適量的NaCl)、0.015molL1的NaCl溶液、二苯胺

46、試劑、蒸餾水以及其他必要實(shí)驗(yàn)器材。下列有關(guān)選擇實(shí)驗(yàn)材料的理由，敘述不正確的是()A新鮮的花椰菜DNA含量豐富，易獲取BSDS具有瓦解植物細(xì)胞膜的作用CDNA溶于冷酒精，而蛋白質(zhì)等雜質(zhì)不溶DEDTA可減少提取過程DNA的降解答案C12缺乏維生素A容易導(dǎo)致夜盲癥或營養(yǎng)不良，甚至能夠威脅到生命。而胡蘿卜素可以在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化成維生素A?？茖W(xué)家嘗試通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)富含胡蘿卜素的大米。八氫番茄紅素合酶(其基因用psy表示)和胡蘿卜素脫飽和酶(其基因用crtI表示)參與胡蘿卜素的合成。pmi為磷酸甘露醇異構(gòu)酶基因，它編碼的蛋白質(zhì)可使細(xì)胞在特殊培養(yǎng)基上生長。根據(jù)以上信息分析，下列敘述錯誤的是()Apmi基因作

47、為標(biāo)記基因可以鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因Bpsy基因和crtI基因的序列中可以含有用到的限制酶的識別序列C可通過基因槍法將目的基因?qū)胨镜氖荏w細(xì)胞DPCR技術(shù)不能檢測目的基因是否表達(dá)出相應(yīng)的蛋白質(zhì)答案B二、非選擇題13如圖pIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tsr為硫鏈絲菌素(一種抗生素)抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達(dá)能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶Sac、Sph、Bgl在pIJ702上分別只有一處識別序列?；卮鹣铝袉栴}：pIJ702pZHZ8Bgl5.7kb6.7kb表1固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度(g/mL)012510不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況注：“”表示生長；“”表示不生長。表2(1)限制酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的_斷裂，切割形成的末端有_兩種。(2)以Sac