IL-27在慢性乙型肝炎患者中的表達(dá)及臨床意義

1、 通訊作者：劉小琴，Email：。IL-27在慢性乙型肝炎患者中的表達(dá)及臨床意義劉小琴1 陳春華1 朱珉之2 張宏宇2 （213001江蘇 常州，江蘇省常州市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科1；肝病研究所2）摘要 目的 探討IL-27在慢性乙型肝炎患者中的表達(dá)及臨床意義。方法 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）對(duì)61例慢性乙型肝炎（CHB）患者及50例健康對(duì)照者血清IL-27表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果 CHB患者血清IL-27表達(dá)水平（39.1918.99 pg/mL）高于正常對(duì)照組（19.709.34 pg/mL），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.622，P0.001）； 隨著病情進(jìn)展，CHB患者IL-27表達(dá)水平

2、顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；HBeAg陽(yáng)性組IL-27表達(dá)水平（43.0916.12 pg/mL）雖高于與HBeAg陰性組（36.9820.30 pg/mL），但無(wú)顯著性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.121，P=0.230）；CHB患者血清IL-27表達(dá)水平與ALT呈正相關(guān)（r=0.267，P=0.037）。 結(jié)論 IL-27在CHB患者中呈高表達(dá)，且在慢性HBV感染進(jìn)程中與肝臟炎癥反應(yīng)相關(guān)。關(guān)鍵詞 肝炎，乙型，慢性；白介素27The expression of serum interleukin-27 in patients with chronic hepatitis B vi

3、rusLIU Xiao-qin1, CHEN Chun-hua1, ZHU Min-zhi2, ZHANG Hong-yu2. (1Department of Clinical Lab, The Third Peoples Hospital of Changzhou, Jiangsu, 213001, China; 2Institute of liver diseases) Corresponding author：Liu Xiao-qin, Email：Abstract Objective To investigate the expression of serum interleukin-

4、27(IL-27) in patients with chronic hepatitis B virus(CHB) and its clinical significance. Methods The concentration of serum IL-27 in 61 patients with CHB and 50 healthy controls were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results The level of serum IL-27 in patients with CHB was sign

5、ificantly higher than those in control group (39.1918.99 vs 19.709.34, t=6.622，P0.001). With the progression of CHB, the level of serum IL-27 became much higher (P0.05). Although the level of serum IL-27 in HBeAg positive patients were higher than those in HBeAg negative patients, there was no stati

6、stical difference between two groups (43.0916.12 vs 36.9820.30, t=1.121，P=0.230). The level of serum IL-27 was positively correlated with the level of ALT in patients with CHB (r=0.267，P=0.037). Conclusion IL-27 was highly increased in patients with CHB, and exhibits correlation with liver inflammat

7、ion during chronic HBV infection.Key words Hepatitis B，chronic；interleukin-27乙型肝炎病毒（HBV）是一種嗜肝的非細(xì)胞病變性DNA病毒，它能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生急性或慢性肝炎。機(jī)體感染HBV病毒后，因免疫狀態(tài)不同，導(dǎo)致的結(jié)果也不同1。研究發(fā)現(xiàn)，免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)在HBV感染肝細(xì)胞損傷及病毒清除中發(fā)揮重要作用2。適度的免疫反應(yīng)能夠清除機(jī)體內(nèi)的HBV病毒，過度的免疫反應(yīng)則會(huì)導(dǎo)致肝損傷，而過低的免疫反應(yīng)則會(huì)使病毒在機(jī)體內(nèi)長(zhǎng)期存在。IL-27是經(jīng)典的IL-6/IL-12家族的螺旋狀細(xì)胞因子，由p28亞基和EB病毒誘導(dǎo)基因3（EBI

8、3）亞基組成異源二聚體復(fù)合物。IL-27能雙向調(diào)節(jié)T細(xì)胞，對(duì)Th1、Th2、Th17以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）具有廣泛的調(diào)節(jié)作用，是維持免疫平衡的一個(gè)重要細(xì)胞因子3。近年來(lái)，多項(xiàng)研究結(jié)果顯示IL-27在肝臟疾病中發(fā)揮重要作用4-6。本研究通過檢測(cè)CHB患者血清IL-27的表達(dá)水平，初步探討IL-27在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用。1材料與方法1.1研究對(duì)象收集常州市第三人民醫(yī)院2012年1月至2012年12月住院的CHB患者61例，男37例，女24例，年齡（4612）歲。其中HBeAg陽(yáng)性者22例，陰性者39例；輕度CHB患者（輕度組）21例，中度CHB患者（中度組）20例，重度CHB患者（

9、重度組）20例。健康對(duì)照者50例，男28例，女22例，年齡（4811）歲。CHB患者診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)和中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的慢性乙型肝炎防治指南。所有病例入組前3個(gè)月，未使用免疫調(diào)節(jié)類藥物，無(wú)合并HCV、HDV、HGV、HIV感染和自身免疫性肝病，無(wú)原發(fā)性肝癌及肝臟轉(zhuǎn)移性腫瘤。CHB患者ALT、AST及PT顯著高于對(duì)照組（P0.05），見表1。表1 各組的基本臨床資料對(duì)比需將CHB的輕、中、重分組的臨床資料分別列于該表中。臨床特征CHB組（n=61）健康對(duì)照組（n=50）統(tǒng)計(jì)值P值年齡（歲）性別（男/女）ALT（U/L）AST（U/L）TBiL（mol/L）A

10、LB（g/L）PT（s）461237/24162（84344.5）89（54.5193.5）15.8（12.221.8）42.744.5113.401.03481128/2224（1836）28（2036.5）13.95（10.819.4）44.064.2812.261.14t=0.9102=0.245Z=7.686Z=6.331Z=1.568t=1.579t=5.508=0.365=0.6200.0010.001=0.117=0.1170.0011.2儀器和試劑人IL-27 ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自eBioscience公司；BIO-RAD 680酶標(biāo)儀；肝功能檢測(cè)采用HITACH 7600

11、全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑；乙肝5項(xiàng)標(biāo)志物檢測(cè)采用雅培i2000化學(xué)發(fā)光儀及配套試劑；凝血檢測(cè)采用Sysmex CA-7000全自動(dòng)血凝儀；HBV-DNA采用ABI 7900熒光定量PCR檢測(cè)，試劑購(gòu)自上海復(fù)星診斷有限公司。1.3標(biāo)本采集和檢測(cè)所有受試者晨起空腹采集肘靜脈血4ml于血清管中，離心分離血清，-70保存待檢。應(yīng)用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清IL-27水平，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，A值為縱坐標(biāo)，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，將樣本的A值帶入方程式，計(jì)算出樣本濃度，具體操作按試劑盒操作說明進(jìn)行。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈偏態(tài)分布的數(shù)據(jù)用中位數(shù)與四分位數(shù)M

12、（P25P75）表示，2組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)。呈正態(tài)分布的資料以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，2組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。連續(xù)變量相關(guān)性分析采用Pearson或Spearman相關(guān)分析，分類資料的比較采用Fisher確切概率法。以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1 不同程度CHB患者血清IL-27表達(dá)水平的比較CHB患者血清IL-27表達(dá)水平（39.1918.99 pg/mL）顯著高于對(duì)照組（19.709.43 pg/mL），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.62

13、2，P0.001）。其中重度組IL-27表達(dá)水平（52.1217.61 pg/mL）顯著高于中度組（37.5614.45 pg/mL）和輕度組（28.4117.23 pg/mL），中度組IL-27表達(dá)水平顯著高于輕度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），見表2。表2 CHB患者血清IL-27表達(dá)水平與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)相關(guān)性分析指標(biāo)ALTASTTBiLALBPTHBV-DNAr值P值0.2670.0370.2320.0720.0110.9300.0680.6000.0270.8340.1850.1543討論當(dāng)機(jī)體感染HBV后，在HBV特異性抗原的刺激下，免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)之間的平衡會(huì)被破壞。Th1

14、細(xì)胞主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫，Th2細(xì)胞主要介導(dǎo)體液免疫，清除HBV主要依賴于細(xì)胞免疫。如果Th1細(xì)胞亞群占優(yōu)勢(shì)，將促進(jìn)細(xì)胞免疫反應(yīng)，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）活性增強(qiáng)，從而清除細(xì)胞內(nèi)病毒，但同時(shí)增強(qiáng)了肝臟的炎癥反應(yīng)從而加重肝細(xì)胞的損傷；如果Th2細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)，將促進(jìn)體液免疫，CTL細(xì)胞活性減弱，雖然肝細(xì)胞損傷減輕，但不能有效清除HBV。近來(lái)研究表明，Th17/Treg細(xì)胞以及相關(guān)因子的失衡在慢性HBV感染進(jìn)程中也發(fā)揮重要作用7。Th17細(xì)胞分泌的IL-17可引起肝細(xì)胞炎性損傷，而Treg細(xì)胞及相關(guān)因子可使機(jī)體對(duì)HBV免疫耐受，導(dǎo)致HBV感染慢性化。IL-27是IL-6/IL-12家族的新成員，由EB

15、I-3和p28組成，主要來(lái)源于樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DCs）。當(dāng)DCs表面的Toll樣受體受到外界信號(hào)刺激的時(shí)候，通過激活下游因子MyD88、IRF3、c-Rel以及JNK等通路介導(dǎo)IL-27的表達(dá)。IL-27受體由WSX-1和gp130兩個(gè)亞基組成，表達(dá)于多種免疫細(xì)胞表面。IL-27與WSX-1結(jié)合后可促進(jìn)Th1細(xì)胞分化并產(chǎn)生IFN-等細(xì)胞因子誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)8。Neufert等9研究發(fā)現(xiàn)IL-27可抑制Treg細(xì)胞分泌TGF-，導(dǎo)致劇烈的炎癥反應(yīng)。同時(shí)，IL-27可通過激活STAT1和STAT3信號(hào)通路抑制Th17細(xì)胞產(chǎn)生IL-17來(lái)發(fā)揮抗炎作用10。因此，IL-27在T

16、細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)中起著“雙刃劍”作用，同時(shí)起著促炎和抗炎作用。本研究結(jié)果顯示，CHB患者血清IL-27表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組，與國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道4-6, 11一致，且隨著病情的進(jìn)展，IL-27表達(dá)水平也越高，其中重度CHB患者血清IL-27表達(dá)水平顯著高于中度患者，中度CHB患者IL-27表達(dá)水平顯著高于輕度患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），與Kao等5研究結(jié)果一致。因此，IL-27在促進(jìn)HBeAg轉(zhuǎn)陰中的作用還有待進(jìn)一步研究。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CHB患者IL-27表達(dá)水平與ALT呈正相關(guān)，提示IL-27與肝臟炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。綜上所述，IL-27在慢性HBV感染進(jìn)程中呈高表達(dá)，與肝臟炎

17、癥反應(yīng)密切相關(guān)，可能參與了CHB的發(fā)病機(jī)制。IL-27作為一個(gè)重要的免疫調(diào)節(jié)因子，能雙向調(diào)節(jié)T細(xì)胞，深入研究IL-27及其受體在HBV感染中的生物學(xué)功能，將有助于闡明HBV感染后機(jī)體的免疫過程及免疫耐受的形成機(jī)制，對(duì)HBV感染的臨床轉(zhuǎn)歸及治療具有一定意義。參考文獻(xiàn):1 鄭燕華, 王慶紅, 田易,等. 慢性乙肝患者肝內(nèi)IL-23/IL-17信號(hào)途徑與Treg細(xì)胞之間的相互作用J. 免疫學(xué)雜志,2011,37(5):401-406.2 Kuo A, Gish R. HYPERLINK /pubmed/22541703 Chronic hepatitis B infectionJ. Clin Liv

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