《儀器分析》課件第三章 紫外-可見吸收光譜法

1、第三章 紫外可見吸收光譜Ultraviolet and visible spectrophotometry UVVis 方法概述 紫外可見吸收光譜形成 光吸收的基本定律紫外可見分光光度計(jì) 分析條件選擇 紫外可見吸收光譜法應(yīng)用第一節(jié) 方法概述一、方法原理： 根據(jù)溶液中物質(zhì)的分子或離子對紫外和可見光譜區(qū)輻射能的選擇性吸收來研究物質(zhì)的組成和結(jié)構(gòu)的方法。 比色法（Colorimetry)比較有色物質(zhì)顏色深淺來確定物質(zhì)含量的方法 分光光度法（Spectrophotometry)使用分光光度計(jì)進(jìn)行吸收光譜分析的方法二、方法分類：三. 光譜波長范圍：10nm 200nm 400nm 780nm遠(yuǎn)紫外近紫外可

2、見光物質(zhì)顏色吸收光顏色波長/nm黃綠紫400-450黃藍(lán)450-480橙綠藍(lán)480-490紅綠藍(lán)490-500紅紫綠500-560紫黃綠560-580藍(lán)黃580-610綠藍(lán)橙610-650藍(lán)綠紅650-780赤650-780橙610-650黃580-610黃綠560-580綠500-560綠藍(lán)480-500藍(lán)450-480紫400-450第二節(jié) 紫外-可見吸收光譜兩個(gè)重要特征 A紫外可見吸收光譜描述了物質(zhì)對不同波長光的吸收情況。最大吸收波長max吸收系數(shù)(Lmol-1cm-1)123吸收系數(shù)是波長的函數(shù)一. 有機(jī)化合物的紫外可見光譜1. 電子躍遷類型分子軌道有：、*、 *、n 能量高低：n*躍

3、遷方式為：* ; n* ;* ;n*能量n*n*n*分子的電子能級和躍遷* n* * n* 根據(jù)分子結(jié)構(gòu) 推測可能產(chǎn)生的電子躍遷類型電子躍遷類型與分子結(jié)構(gòu)及存在基團(tuán)有密切聯(lián)系 根據(jù)吸收譜帶波長和電子躍遷類型 推測分子中可能存在的基團(tuán)（分子結(jié)構(gòu)鑒定）-*：C-H共價(jià)鍵，如CH4（125nm）； C-C鍵，如C2H6(135nm)（1） -* 和n-* 躍遷n-*：含有孤對電子的分子H2O(167nm)；CH3OH(184nm)； CH3Cl(173nm); CH3I(258nm)；(CH3)2S(229nm)；(CH3)2O(184nm) CH3NH2(215nm)；(CH3)3N(227nm)

4、以上兩種躍遷（-*和n-*），躍遷能量較高，所產(chǎn)生的吸收譜多位于真空紫外區(qū)，因而在此不加討論。（2）*和n-*躍遷a.含不飽和鍵的化合物發(fā)生*躍遷b.含雜原子的不飽和化合物發(fā)生n*躍遷* 所需能量比*躍遷小 若無共軛，200nm左右； 若有共軛體系，向長波方向移動，200700 nmn*躍遷比*躍遷所需能量小 吸收波長在200400 nm左右吸收強(qiáng)度大，在104105范圍內(nèi)強(qiáng)吸收C=O , C=C, CC C=S； O=N- ； -N=N-； C=O弱吸收吸收強(qiáng)度小，1022、 常用術(shù)語(1)發(fā)色團(tuán)含有鍵的不飽和基團(tuán)稱為發(fā)色團(tuán)。(2)助色團(tuán)一些本身在紫外和可見光區(qū)無吸收,但能使生色團(tuán)吸收峰紅移

5、,吸收強(qiáng)度增大的基團(tuán)稱為助色團(tuán)。含雜原子的飽和基團(tuán)。-F-CH3-Br-OH-OCH3-NH2-NHCH3-NH(CH3)2-NHC6H5105 強(qiáng)帶 104E2=204 nm 較強(qiáng)吸收 103(3)B 吸收帶:苯環(huán)本身振動及閉合環(huán)狀共軛雙鍵中*B 吸收帶是芳香族的主要特征吸收帶，常用來識別芳香族化合物特點(diǎn)：吸收峰在230-270nm呈現(xiàn)一寬峰，且具有精細(xì)結(jié)構(gòu)； 吸收強(qiáng)度弱， 200(4)E 吸收帶:苯環(huán)內(nèi)三個(gè)乙烯基共軛發(fā)生的*E1帶是觀察不到的；當(dāng)苯環(huán)上有發(fā)色帶時(shí)，E2帶常與K 帶合并，吸收峰向長波移動。極性溶劑中，或苯環(huán)連有取代基，其精細(xì)結(jié)構(gòu)消失 圖 苯在乙醇中的紫外吸收光譜(185nm)

6、(204nm)(230-270nm)苯乙酮的紫外吸收光譜（正庚烷溶劑）小結(jié) R帶 n* 弱吸收 K帶 *強(qiáng)吸收 B帶 *中吸收 E帶 *強(qiáng)吸收苯環(huán)共軛4. 有機(jī)化合物的紫外可見光譜 (1) 飽和烴及其衍生物： 飽和烴只有電子，產(chǎn)生*躍遷，在遠(yuǎn)紫外區(qū) 飽和烴衍生物，產(chǎn)生n*躍遷，能量低于*(2) 不飽和烴及其共軛烯烴飽和有機(jī)化合物在200-400nm不產(chǎn)生吸收峰，常用作溶劑 孤立雙鍵的化合物：雙鍵和含雜原子的雙鍵化合物產(chǎn)生* 、 n*、 n* 共軛雙鍵的化合物：使* 所需能量降低，吸收峰長移，吸收強(qiáng)度增強(qiáng)。(3) 羰基化合物羰基化合物含有C=O,可產(chǎn)生n*、 n*、*躍遷。醛酮的n*吸收帶在27

7、0-300 nm 附近，強(qiáng)度低；R帶是醛酮的特征吸收峰當(dāng)醛酮的羰基與雙鍵共軛時(shí)，形成了，不飽和醛酮，產(chǎn)生共軛，n*、*躍遷的波長長移單獨(dú)羰基：*在166nm， n*在280nm單獨(dú)雙鍵：*在170nm220nm處，=15000322nm處，=28(4) 芳香族化合物 E帶和B帶是芳香族化合物的特征吸收帶 當(dāng)苯環(huán)上有羥基、氨基等取代基時(shí),吸收峰紅移,吸收強(qiáng)度增大. 取代基不同，變化程度不同，可由此鑒定各種取代基分子式max/nmC6H62542002047400C6H5CH32622252087000C6H5Cl2641902107400C6H5I2587002077000C6H5OH27112

8、602136200C6H5O-28624002359400C6H5COOH27297023011600C6H5NH228013202308600C6H5NH3+25416920375005.影響紫外可見吸收光譜的因素1）共軛效應(yīng)-紅移(P19表3-3)共軛體系電子離域性強(qiáng)*能量低紅移多烯化合物最大吸收波長nm吸收系數(shù)1-己烯17711800非共軛1,5-己二烯17826000共軛1,3,5-己三烯26842700非共軛體系max基本不變，與烯鍵數(shù)目同步增大結(jié)論：共軛體系max紅移， 增大原因：2）取代基-紅移或藍(lán)移取代基為給電子基團(tuán)，如-NH2、-OH、-Cl，可使分子紅移；取代基為得電子基團(tuán)

9、，如-R，-OCOR，則使分子藍(lán)移；苯環(huán)或烯烴上的H被各種取代基取代，多產(chǎn)生紅移。3）酸度-紅移或藍(lán)移影響物質(zhì)存在型體C6H5OHC6H5O-C6H5NH2C6H5NH3+4）異構(gòu)現(xiàn)象a.同分異構(gòu)b.互變異構(gòu)400nm270nm酮式：204nm處弱吸收烯醇式：245nm處強(qiáng)吸收=15000c.順反異構(gòu)空間位阻max=294 nm max=280 nm = 2.7104 =1.4 1045)溶劑效應(yīng)a.對最大吸收波長的影響 隨著溶劑極性的增大例：異亞丙基丙酮 溶劑 正己烷 氯仿 水 * 230 nm 238 nm 243 nm n* 329 nm 315 nm 305 nm結(jié)論：*躍遷吸收峰向長

10、波方向移動，即發(fā)生紅移 n*躍遷吸收峰向短波方向移動，即發(fā)生藍(lán)移發(fā)生*躍遷的基團(tuán)，*的極性比強(qiáng)發(fā)生n* 躍遷的基團(tuán)，n的極性比* 強(qiáng)n*非極性溶劑中極性溶劑中*非極性溶劑中極性溶劑中E非E極E非E極原因：隨著溶劑極性的增大*躍遷吸收峰發(fā)生紅移 n*躍遷吸收峰發(fā)生藍(lán)移b. 對光譜精細(xì)結(jié)構(gòu)和吸收強(qiáng)度的影響 當(dāng)物質(zhì)處于氣態(tài)時(shí)，其振動光譜和轉(zhuǎn)動光譜亦表現(xiàn)出來，因而具有非常清晰的精細(xì)結(jié)構(gòu)。當(dāng)它溶于非極性溶劑時(shí)，由于溶劑化作用，限制分子的自由轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)動光譜就不表現(xiàn)出來隨著溶劑極性的增大，分子振動也受到限制，精細(xì)結(jié)構(gòu)就會逐漸消失，合并為一條寬而低的吸收帶。苯的B吸收帶苯蒸汽苯的乙醇溶液選擇溶劑的原則未知物與

11、已知物必須采用相同溶劑盡可能使用非極性溶劑，以獲得精細(xì)結(jié)構(gòu)所選溶劑在測定波長范圍內(nèi)應(yīng)無吸收或吸收很小常用溶劑有庚烷、正己烷、水、乙醇等。書中p22表3-5列出一些常用溶劑的適用波長范圍。二、無機(jī)化合物的吸收光譜電子的躍遷方式可能發(fā)生在受配位體影響的金屬離子的原子軌道之間受金屬離子影響的配位體的分子軌道之間兩種軌道之間1.dd配位場躍遷按晶體場理論，金屬離子與水或其它配體生成配合物時(shí)，原來能量相同的d 軌道會分裂成幾組能量不等的d 軌道，d軌道之間的能量差稱為分裂能，配合物吸收輻射能，發(fā)生dd躍遷，吸收光的波長取決于分裂能的大小配位體的配位場越強(qiáng)，d 軌道的分裂能就越大 ，吸收峰波長就越短。一些

12、配位體配位場強(qiáng)度順序(p 22)I- Br- Cl-F-OH- C2O42- =H2O SCN- 吡啶=NH3 乙二胺聯(lián)吡啶鄰二氮菲 NO2- CN-dd躍遷躍遷概率較小,很小，一般只有0.1-100 L. mol-1，定量分析價(jià)值不大,可用于配合物的結(jié)構(gòu)研究Cu(H2O)42+ 吸收峰在794 nm 淺藍(lán)色Cu(NH3)42+ 吸收峰在663 nm 深藍(lán)色 H2O的配位場強(qiáng)度NH3的配位場強(qiáng)度原因：2.電荷轉(zhuǎn)移躍遷配合物中金屬離子與配體之間，一方的電子向主要屬于另一方的軌道的躍遷a.產(chǎn)生電荷轉(zhuǎn)移躍遷的必要條件： 組分之一具有電子給予體的特性； 另一組分具有電子接受體的特性。b.電荷轉(zhuǎn)移躍遷的

13、吸收波長取決于電子給予體的電子親和力：Fe2+(SCN)2+Fe3+(SCN)2+hSCN-Fe3+Fe(III) - SCN-Fe(III) - Cl-SCN-的電子親和力比Cl-小最大吸收波長：電荷轉(zhuǎn)移躍遷概率較大,很大，一般在10000 以上，可用于配合物的定量分析電子親和力越小，激發(fā)所需的能量越低，吸收波長就越長。3.金屬離子影響下的配位體*躍遷茜素磺酸鈉H弱酸性黃色max=420 nm弱堿性紫紅色max=560 nm紅色max=475 nm第三節(jié) 光吸收的基本定律一、朗伯-比耳定律當(dāng)一束強(qiáng)度為I0的平行單色光垂直照射到厚度為db的液層上，由于吸收層中吸光質(zhì)點(diǎn)的吸收，入射光的強(qiáng)度將為，

14、當(dāng)液層厚度增加時(shí)，光被吸收的部分按指數(shù)式直線的增加 I0入射光強(qiáng)度It透射光強(qiáng)度b吸收層厚度（光程）db每一小薄層厚度s每一小薄層截面積ItI0bdbII-dIs1. 朗伯-比耳定律推導(dǎo)每一小薄層所含吸光質(zhì)點(diǎn)的個(gè)數(shù)為dn每個(gè)吸光質(zhì)點(diǎn)的截面積為a假若：則：ItI0bdbII-dIs每一小薄層吸光質(zhì)點(diǎn)總截面積為dS = a dn (1)光通過每一小薄層后，強(qiáng)度下降：-dI = k1IdS=k1I a dn (2)dn = 6.021023 c S db (3)將(3)代入(2),并合并常數(shù)整理得：-dI /I= k2 c db (4)積分得：KbcIIlnt0=定義：T=It/I0 透光率A=-l

15、gT 吸光度A=lg(I0/It)= lg1/T = kbc朗伯-比爾Lambert - Beer定律公式：光吸收的基本定律吸光度具有加和性，可應(yīng)用于多組分的同時(shí)測定 注：若溶液中含有不止一種吸光物質(zhì)，則總吸光度等于各個(gè)組分吸光度之和： A=A1+A2+.+An 入射光為平行單色光且垂直照射朗伯-比爾定律前提條件：吸光物質(zhì)為均勻非散射體系吸光物質(zhì)之間無相互作用2.吸光系數(shù)，摩爾吸光系數(shù)，與桑德爾靈敏度(1) 吸光系數(shù)aA= Kbc a的單位: Lg-1cm-1當(dāng)c的單位用gL-1表示時(shí)，用a表示 Aabc(2) 摩爾吸光系數(shù) ()的單位: Lmol-1cm-1表示物質(zhì)對光吸收能力的大?。?，A，

16、分析靈敏度a. 物理意義：當(dāng)物質(zhì)的量濃度為1mol/L，液層厚為1cm時(shí)，吸光物質(zhì)對某波長的吸光度。A bcb. 與靈敏度的關(guān)系 是選擇顯色反應(yīng)的依據(jù)max104 Lmol-1cm-1較靈敏c. 影響值的因素 入射光波長： =f（） 與被測物質(zhì)的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)有關(guān) 溫度，酸度，介質(zhì) 不隨 c或A值變化d. 值的計(jì)算 例如已知含F(xiàn)e2+12.5g/25mL，用鄰二氮非顯色后形成Fe(Phen)3 用2cm比色皿在508nm測得A=0.19 ，求=？ 解 CFe=12.5g/25mL=12.510-6/55.85/0.025 = 8.9510-6mol/L=A/b/C=0.19/2/C= 1.1104

17、Lmol-1cm-1 (3) 桑德爾靈敏度S （g/cm2 )a.物理意義：當(dāng)光度檢測器的檢測極限為A=0.001時(shí)，單位截面積光程內(nèi)所能檢測出來的吸光物質(zhì)最低含量。 0.001A =0.001 = bc cb= 0.001 M S= M 103 = (g/cm2) 上例中的靈敏度： M 55.85 S= = = 0.005g/cm2 1.1104b.S與的關(guān)系：例1鋼中Mn的測定：稱鋼樣0.500g，溶解MnO4-50mL容量瓶，搖勻，從中取5.00mL50mL容量瓶定容，用2cm比色皿在525nm ,=2235 , 測A=0.124 , 計(jì)算Mn%=？(Mn=54.94) 解例2用Phen

18、法測Fe，欲配Fe2+標(biāo)液 1L，使其稀釋100倍時(shí)，放在1.0cm的比色皿中，測得A=0.50，問稱取(NH4)2Fe(SO4)26H2O（Mr= 392.13）多少克？(=1.1104) 解 稀釋后所以：例3某試液用2.0cm比色皿測T=60%，若改用3.0cm，求T% 和A (1)A1= -lgT= -lg0.60 =0.222(3) A=- lgT解T2%=46.45例4丁二肟測Ni，Ni標(biāo)液10g/mL，取5.00mL，顯色后測A=0.292；稱鎳礦渣0.6261g，分解定容100mL，取2.00mL顯色測AX=0.300，求Ni%=？ mS=10gmol-15.00 mL= 50.

19、0g 解A bc例5含F(xiàn)e47.0mg/L，取5.0mL100mL定溶顯色，b= 1cm，A=0.467，510nm。求 a，S 解= 1.11 104Lmol-1cm-1 3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及應(yīng)用正偏離負(fù)偏離斜率= b實(shí)際工作中常出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成直線（發(fā)生彎曲）的現(xiàn)象。有時(shí)向C軸彎曲(負(fù)偏離)；有時(shí)會發(fā)生向A軸彎曲（正偏離），此現(xiàn)象稱之對朗伯比爾定律的偏離。若在偏離Lambert-Beers Law范圍內(nèi)進(jìn)行分析測定，將給分析結(jié)果帶來較大誤差。A= kbc二、偏離Lambert - Beer Laws的原因 物理因素： 如果入射光由1、2二種波長的光組成在1、2處有1 2負(fù)偏離1與2差別越大

20、，1與2差別越大，偏離越嚴(yán)重入射光不純（非單色光）造成偏離情況一般較小(1) 非單色光引起的偏離 (2) 非平行光入射引起的偏離 b b(3) 介質(zhì)不均勻引起的偏離 I0=It+Ia+I散正偏離正偏離造成入射光的散射損失max ，變化較小，線性關(guān)系好，誤差小。選擇max為入射波長的原因：在max處測量靈敏度最高改變?nèi)芤旱恼酃庵笖?shù) C0.01mol/L時(shí),折光指數(shù)基本不變；2、化學(xué)因素(1)溶液濃度過高：改變吸光微粒的吸光能力 C，吸光微粒間電場相互作用，改變了，LambertBeers Law適用于稀溶液(2)溶液中的化學(xué)反應(yīng)離解：MRM+R絡(luò)合：MR+RMR2酸效應(yīng)：MR+HM+HRA= k

21、bc平衡濃度3、其他因素： 比色皿不對稱；泄漏光的影響；電源及儀器穩(wěn)定性等等第三節(jié) 紫外可見分光光度計(jì)一、基本部件： 按工作波長分紫外 用于無機(jī)物和有機(jī)物的測定可見 用于無機(jī)物和有機(jī)物的測定紅外 用于有機(jī)物的結(jié)構(gòu)分析按入射光束數(shù)量分單光束雙光束儀器型號光源單色器比色皿檢測器顯示器工作范圍(nm)72鎢燈玻璃棱鏡玻璃硒光電池檢流計(jì)420700721鎢燈玻璃棱鏡玻璃硒光電池檢流計(jì)360700722鎢燈光柵玻璃光電管數(shù)顯180860724鎢燈光柵玻璃、石英光電倍增管數(shù)顯325850753氘燈光柵玻璃、石英光電倍增管數(shù)顯200800二、分光光度計(jì)類型： 1、單光束分光光度計(jì)光源記錄與數(shù)據(jù)處理單色器試樣

22、池檢測器參比池2、雙光束分光光度計(jì)光源記錄與數(shù)據(jù)處理單色器試樣池檢測器參比池兩束光交替入射S和R，檢測器測得兩信號的比值優(yōu)點(diǎn)：a.補(bǔ)償光源和檢測系統(tǒng)的不穩(wěn)定性，提高精密度和準(zhǔn)確度 b.進(jìn)行自動掃描3、雙波長分光光度計(jì)光源單色器切光器檢測器單色器12試樣池兩束光同時(shí)入射試樣池，檢測器測得兩波長吸光度的差值優(yōu)點(diǎn)：a.校正背景吸收，消除吸收光譜重疊干擾； b.適合于混濁液和多組分混合物的定量分析； c.避免用兩吸收池帶來的誤差。氧化還原反應(yīng)第四節(jié) 光度法分析條件選擇一、顯色反應(yīng)及其條件： 1、顯色反應(yīng)和顯色劑選用適當(dāng)?shù)脑噭⒋郎y組分轉(zhuǎn)化為有色物質(zhì)的反應(yīng)，稱之“顯色反應(yīng)”，所用試劑稱之“顯色劑”(1)

23、 顯色反應(yīng)絡(luò)合反應(yīng)（螯合反應(yīng)）a.靈敏度高、選擇性好 （104）；顯色反應(yīng)的選擇b.有色絡(luò)合物組成恒定，符合一定的化學(xué)式；c.有色絡(luò)合物性質(zhì)穩(wěn)定；d.有色絡(luò)合物與顯色劑間顏色差別足夠大（ 60nm）；e.顯色反應(yīng)條件易于控制（以保證測定結(jié)果良好的重現(xiàn)性）。(2)顯色劑光度分析中大多使用有機(jī)試劑作為顯色劑，一般的有機(jī)顯色劑分子中含有：生色團(tuán)，助色團(tuán)。2、顯色反應(yīng)條件的選擇（略）結(jié)合實(shí)驗(yàn)自學(xué)1.吸光度測量的誤差二、光度測量誤差及測量條件的選擇 （1）偏離朗伯-比耳定律 （2）測量（讀數(shù)）誤差：光源不穩(wěn)、檢測器、顯示器和噪音等誤差的總和。（1）對(1)式微分得：（2）將（2）(1)得：（3）若以有限

24、值表示，則（3）為：（3）又（4）則：（5）測量誤差讀數(shù)誤差光度計(jì)上T的標(biāo)尺是均勻的，T基本為一定值(0.002-0.01）。以 |Er|T作圖，可看出Er有一極小值當(dāng)一階導(dǎo)=0時(shí)，有極值：則：lnT+1=0此時(shí) T=0.368（相應(yīng)地A=0.434）當(dāng)T=0.368（36.8%）或A=0.434時(shí)，Er最?。ㄗ钚。?；當(dāng)T很大或很小時(shí)，Er較大，當(dāng)T0或T100時(shí)，Er（即）；當(dāng)T=15%70%（A=0.150.80）時(shí)，Er較小適宜的讀數(shù)范圍；雖當(dāng)T=36.8%時(shí)Er最小，但仍有2.72%，這說明光度法的測量誤差至少有2%左右。幾點(diǎn)說明0.3682.測量條件的選擇(1)測量波長的選擇原則：最

25、大吸收；當(dāng)有干擾時(shí)：“吸收最大，干擾最小”。(2)吸光度范圍的選擇A = 0.20.8（T= 65%15% ），以保證相對誤差較小。A的大小控制可通過改變b或C來達(dá)到(5)有時(shí)干擾物（生成物）有色時(shí)可改變試劑加入順序后（使被測物不顯色）的顯色劑作參比。3. 參比溶液的選擇(1)試液、試劑及顯色劑均無色時(shí)蒸餾水參比；(2)試液有色而其他試劑及顯色劑均無色時(shí)不加顯色劑的試樣作參比（試樣空白）；(3)顯色劑有色而其他試劑及試液無色時(shí)不加試液的顯色溶液作參比（試劑空白）；(4)干擾離子及顯色劑有色，而其他試劑無色時(shí)掩蔽被測離子后的顯色溶液作參比（試劑空白）；第五節(jié) 紫外可見吸收光譜法應(yīng)用一、定性分析二

26、、定量分析三、物理化學(xué)常數(shù)測定 用紫外可見吸收光譜鑒定未知物的結(jié)構(gòu)較困難，因譜圖簡單，吸收峰個(gè)數(shù)少，主要表現(xiàn)化合物的發(fā)色團(tuán)和助色團(tuán)的特征。一、定性分析 利用紫外可見吸收光譜可確定有機(jī)化合物中不飽和基團(tuán)，還可區(qū)分化合物的構(gòu)型、構(gòu)象、同分異構(gòu)體1. 單組分物質(zhì)的定量分析二、 定量分析測定條件： 選擇合適的分析波長（max） A：0.2-0.8 選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤簶?biāo)準(zhǔn)曲線法：A-C曲線（1） 一般方法（2） 示差吸光光度法a. 工作原理若某試樣中被測組分含量較高，則用一濃度比待測液稍低的標(biāo)液代替空白作參比（調(diào)節(jié)T=100%；A=0），測定試樣的AX上式意義：在符合朗伯-比爾定律測定濃度范圍內(nèi)，示差法

27、測得的相對吸光度(A)與被測溶液和參比溶液的濃度差(Cs-Cx,即C)成正比，即可用于定量測定。高含量組分的測定定量分析依據(jù)b.示差吸光光度法的準(zhǔn)確度示差法之所以能提高測定結(jié)果的準(zhǔn)確度，是擴(kuò)大了讀數(shù)標(biāo)尺的結(jié)果。普通的分光光度法：以試劑為空白，測得試樣Cx的Tx=5.0%, 配制一濃度稍低的標(biāo)準(zhǔn)溶液Cs,測得Ts=10.0。示差法: 用Cs 來調(diào)節(jié)儀器令T=100%, 再測定試樣Cx。此時(shí)試液的T50，儀器標(biāo)尺擴(kuò)大10倍，令讀數(shù)落在適宜的范圍內(nèi)，提高了測定的準(zhǔn)確度例1.以試劑為空白參比調(diào)T=100%，測某有色液A=1.301，假設(shè)T=0.003，求光度測量誤差Er=？若以T=10%為參比，示差光

28、度法測該試液的T=？此時(shí)Er又為多少？解：已知T=10-A=10-1.301=0.050=5.0%若示差法：例2. 鋅標(biāo)液CZn=0.00100mol/L和含Zn樣品各測A=0.700和A=1.000，問兩種溶液透射率相差多少？如果用0.00100mol/L Zn 標(biāo)液作參比，試液的A=？示差法與普通光度法相比，讀數(shù)標(biāo)尺放大了多少倍？解：1.A= - lgT則T1=10-A=10-0.700=0.200=20.0%T2=10-1.000=0.1000=10.0% 故透光率相差10.0%2. A相對=A= bC=1.000-0.700=0.3003. 標(biāo)尺放大倍數(shù)為：2.多組分的同時(shí)測定吸光度具有加和性1. 不重疊 (1)x、y二組分互不干擾（最簡單）A1 = 1bcxA2 = 2bcy(2)x、y二組分單向重疊(3)x、y二組分雙向重疊3.雙波長吸光光度法光源單色器切光器檢測器單色器12試樣池兩束光1