課題結題匯報課件

1、課題結題報告第1頁，共37頁。結題報告腎早期損傷定位標志物研究 重慶三峽中心醫(yī)院 杜紅心第2頁，共37頁。 立 項 依 據 研 究 內 容 研究結果 項目完成情況 預實驗結果 經費來源第3頁，共37頁。一、立 項 依 據 第4頁，共37頁。研究背景妊娠期糖代謝異常：包括妊娠期糖耐量受損（GIGT）和妊娠期糖尿?。℅DM）。GIGT：一組已有糖代謝異常并可能向糖尿病發(fā)展的病理生理過程的中間階段。GDM：妊娠期首次發(fā)生或發(fā)現的不同程度的糖代謝異常。第5頁，共37頁。 近年的研究表明, GDM 與GIGT 的總體發(fā)病率逐年升高,達7.61 %。追蹤研究顯示30 % -50%的GDM患者可在遠期發(fā)生糖

2、尿病，且有糖尿病家族史者，GDM患病機率增加，提示其有一定的免疫遺傳學背景 。研究背景第6頁，共37頁。 妊娠期糖代謝異常對妊娠的影響最常見的是導致巨大兒、胎兒窘迫和新生兒低血糖的發(fā)生；以及并發(fā)血管病變，增加妊娠期高血壓和手術產的發(fā)生率。國內外的數據表明：未治療的GDM孕婦并發(fā)癥明顯增加，且圍生兒患病率主要與治療早晚有關，證明早期篩查、診斷、干預可以降低孕產婦的并發(fā)癥及圍生兒患病率。研究背景第7頁，共37頁。 妊娠期糖代謝異常的發(fā)生與遺傳、環(huán)境及生活習慣密切相關, 近年來國內外的研究表明, 某些基因的多態(tài)性對妊娠期糖代謝異常的發(fā)生可能具有重要作用。如：葡萄糖轉運蛋白基因、葡萄糖激酶基因、磺脲類

3、藥物受體基因、胰島素受體底物基因、人類主要組織相容性基因復合體以及鈣蛋白酶-10基因、尾加壓素基因、腫瘤壞死因子-基因等均與妊娠期糖代謝異常發(fā)病有一定關聯。立項依據第8頁，共37頁。 但是目前已有的研究成果還存在爭議, 引起疾病的責任基因及其作用機理尚未明確。因此對致病基因的研究已日益成為臨床診療的迫切需要。探究及篩選與妊娠期糖代謝異常相關的基因多態(tài)性, 將會對妊娠合并糖尿病、GDM及GIGT的預防、治療、改善預后及提高廣大妊娠婦女圍產期的生命質量起到十分積極而重要的作用。同時, 對節(jié)約醫(yī)療資源、提高出生人口質量也將有十分重要的意義。立項依據第9頁，共37頁。二、研究內容 第10頁，共37頁。

4、對葡萄糖轉運蛋白基因、磺脲類藥物受體基因、人類主要組織相容性復合體基因、鈣蛋白酶-10基因、尾加壓素基因等五個可能的糖代謝異常相關基因及其相關位點的多態(tài)性進行研究，以明晰它們與妊娠期糖代謝異常的發(fā)生發(fā)展的關系。觀察可能與GIGT、GDM及T2DM的發(fā)生有關的危險因素。研究內容第11頁，共37頁。關鍵技術或方法1采用酚-氯仿法提取基因組DNA23PCR技術擴增目的基因片段PCR-RFLP方法檢測基因型4logistic回歸進行數據分析第12頁，共37頁。研究對象NGT組GIGT組GDM組T2DM組100例,貴陽醫(yī)學院附屬醫(yī)院內分泌科100例, 貴陽市婦幼保健院門診健康體檢者 各100例, 貴陽市

5、婦幼保健院門診患者實驗方法第13頁，共37頁。1. GDM及GIGT的診斷方法（NDDG標準） 1、50g葡萄糖負荷試驗篩查, 7.8mmol/L為陽性者做糖耐量試驗(OGTT) 。 2、OGTT試驗：抽血前禁食812h, 75g葡萄糖溶300ml水中35min服完, 查空腹及服糖后1、2、3 h血糖。兩次5.8、10.6、9.2、8.1mmol/L者診斷為GDM；兩次空腹血糖5.8或糖篩10.6mmol/L, 空腹血5.8mmol/L即診斷為GDM。 OGTT 4項中任何一項異?；虻?小時6.7mmol/L診斷為GIGT。診斷標準第14頁，共37頁。2. T2DM的診斷標準（1999年WHO

6、標準） 糖尿病癥狀+任意時間血漿葡萄糖水平11.1 mmol/L或 空腹血漿葡萄糖(FPG)水平7.0mmol/L或 OGTT試驗中，2h-PG水平11.1 mmol/L 診斷標準第15頁，共37頁。全血DNA的提取PCR-RFLP、PCR-AFLP凝膠電泳分離收集標本PCR擴增目的片段基因型的判定數據處理實驗步驟第16頁，共37頁。計數資料：基因頻率及基因型頻率：計量資料：危險因素采用logistic回歸分析 百分數描述 （XS）描述，采用t檢驗 Hardy-Weinberg平衡檢驗；卡方檢驗，P0.05統(tǒng)計學處理數據分析及處理：第17頁，共37頁。三、研究結果第18頁，共37頁。實驗數據及

7、圖表：第19頁，共37頁。12型:404,372bp11型:372bp22型:404bpCAPN-10 19位點多態(tài)性分析：第20頁，共37頁。CAPN-10 43位點多態(tài)性分析：GG型:144bpAA型:121,23bpGA型:144,121,23bp第21頁，共37頁。CAPN-10 63位點多態(tài)性分析：CT型:192,162,30bpTT型:192bpCC型:162,30bp第22頁，共37頁。相關危險因素分析：單因素logistic回歸分析結果第23頁，共37頁。相關危險因素分析：多因素logistic回歸分析結果（GIGT組、GDM組與NGT組）第24頁，共37頁。相關危險因素分析：

8、多因素logistic回歸分析結果（T2DM組與NGT組）第25頁，共37頁。項目完成情況：第26頁，共37頁。主要考核指標完成情況 ：對7個可能相關的基因及其相關位點的多態(tài)性與妊娠期糖代謝異常的關系進行研究，明晰了它們與妊娠期糖代謝異常相關疾病的發(fā)生和發(fā)展之間的關系； 根據實驗室數據及統(tǒng)計結果，我們可以得出以下結論：可能與妊娠期糖代謝異常發(fā)病相關目的基因及其位點7個，它們具體是： 技術指標方面:第27頁，共37頁。CAPN-10基因多態(tài)性可能與GDM、T2DM遺傳易感性有關；CAPN-10基因SNP43位點G等位基因可能與GDM的發(fā)生有關，而16和63位點則與GDM的發(fā)生無關。CAPN-10

9、基因SNP43位點G等位基因可能與T2DM的發(fā)生有關，而16和63位點則與T2DM的發(fā)生無關。CAPN-10基因SNP43位點多態(tài)性、糖尿病家族史、BMI和年齡是GDM 、T2DM發(fā)生的重要危險因素。技術指標方面：第28頁，共37頁。尾加壓素基因rs228648 位點單核苷酸多態(tài)性可能在決定受研究人群的妊娠期糖尿病遺傳易感性中起重要作用。G等位基因可能與GDM發(fā)生有關,而rs228648位點的A型純合子可能是GDM的一個重要的保護因素。尾加壓素基因rs228648 位點單核苷酸多態(tài)性可能在決定妊娠期糖尿病遺傳易感性中起重要作用。G等位基因可能與妊娠期糖代謝異常發(fā)生有關，rs228648的基因型

10、頻率與糖尿病家族史有關聯。技術指標方面：第29頁，共37頁。GLUT1基因基因型頻率和等位基因頻率在GDM、GIGT和T2DM中分布差異均無統(tǒng)計學意義。提示GLUT1基因可能與GDM、GIGT遺傳易感性無關。TNF-基因的-308 G/A、TNF-基因的+252 A/G單核苷酸多態(tài)性研究顯示：GDM患者存在TNF-啟動子-308G-A等位基因的突變，可能是通過上調血漿TNF-水平，增加胰島素抵抗，最終導致GDM發(fā)生。同時TNF-基因多態(tài)性與GDM沒有顯著相關性。技術指標方面：第30頁，共37頁。脂聯素基因+45位點 GG基因型與GDM的遺傳易感性顯著相關，與GIGT的遺傳易感性無關。TCF7L

11、2基因rs7903146位點 CT基因型與GDM遺傳易感性顯著相關，與GIGT的遺傳易感性無顯著相關性。同時，基因-基因的交互作用研究顯示：脂聯素基因+45位點、TNF-基因-308位點基因型之間有交互作用。其他基因及位點間未顯示明顯的交互作用。技術指標方面：第31頁，共37頁。撰寫研究論文6篇，2篇已發(fā)表于國家級核心期刊；其余均已出投到相關學術刊物待發(fā)表；培養(yǎng)碩士研究生2名：周龍、闞林。2011年6月，二名研究生均以優(yōu)異成績從貴陽醫(yī)學院畢業(yè)，并且獲得碩士學位。 技術指標方面：第32頁，共37頁。社會、環(huán)境效益方面 ：社會效益：尋找妊娠期糖代謝異常致病過程中起關鍵作用的基因，具有至關重要的意義，是近年來婦產科、優(yōu)生及內分泌領域的研究熱點。探索及篩選與妊娠期糖代謝異常相關的基因多態(tài)性,對妊娠合并糖尿病、GDM及GIGT的預防、治療、改善、預后及提高廣大妊娠婦女圍產期的生命質量具有積極的作用。環(huán)境效益：本研究課題采用成本最低廉的酚-氯仿法從外周血有核細胞中提取基因組DNA；然后用針對