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文檔簡介
1、實(shí) 驗(yàn) 二.三微生物培養(yǎng)基的配制(pizh)和滅菌共二十七頁微生物培養(yǎng)基的配制(pizh)和滅菌目的要求實(shí)驗(yàn)(shyn)材料實(shí)驗(yàn)程序共二十七頁目 的 要 求了解培養(yǎng)基的配制原理(yunl)和方法,掌握其配制過程。了解幾種滅菌方法,掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。熟悉分離、培養(yǎng)微生物前的有關(guān)準(zhǔn)備工作及操作方法。共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 材 料藥品:牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯、蔗糖;可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO47H2O、FeSO47H2O等。高壓蒸汽滅菌器、恒溫干熱滅菌箱、細(xì)菌過濾器、紫外線殺菌燈。其它:天平、牛角匙、電爐、1N HCl、1N NaOH、pH試
2、紙、刻度(kd)搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、帶玻璃珠的三角瓶、帶棉塞的無菌試管、無棉塞的空試管、培養(yǎng)皿、吸管、各種包裝紙、防水紙、繩索、棉花、標(biāo)簽等。共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序培養(yǎng)基的配制分離(fnl)培養(yǎng)微生物常用器皿的準(zhǔn)備培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 內(nèi)容(nirng) (培養(yǎng)基的配制)培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的配制(pizh)方法和步驟四種培養(yǎng)基的配方及配制無菌水的制備共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序1 (培養(yǎng)基的種類(zhngli))據(jù)組成成分可分為: 1.合成培養(yǎng)基:由各種純化學(xué)物質(zhì)(wzh)按一定比例配制而成。 2.半合成培養(yǎng)基:有一部分純化學(xué)物質(zhì)(wzh)和另一部分天然物質(zhì)(
3、wzh)配制而成。 3.天然培養(yǎng)基:利用天然來源的有機(jī)物配制而成。從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為 1.液體培養(yǎng)基:不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。 2.固體培養(yǎng)基:在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。 3.半固體培養(yǎng)基:在液體培養(yǎng)基中加入0.20.5%凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序1 (培養(yǎng)基的種類(zhngli))常用凝固劑為瓊脂(其次(qc)為明膠),又叫洋菜、凍粉。共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序2 (培養(yǎng)基的配制(pizh)方法和步驟)稱量:按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。溶化:在搪瓷杯中加入所需水量,玻棒攪勻,加熱溶解。調(diào)pH值:用1N N
4、aOH或1N HCl調(diào)pH,用pH試紙對照。加瓊脂溶化:加熱過程中要不斷攪拌,可適當(dāng)補(bǔ)水。分裝(fn zhun):注意不要污染棉塞。包扎成捆,掛上標(biāo)簽(必須用鉛筆寫),注明何種培養(yǎng)基。滅菌備用:培養(yǎng)基滅菌后必須在370C下恒溫培養(yǎng)24h,確定無菌生長,方可使用。共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序2 (培養(yǎng)基的配制(pizh)方法和步驟)共二十七頁實(shí)驗(yàn)程序2 (培養(yǎng)基的配制方法(fngf)和步驟)共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序2 (四種培養(yǎng)基的配方(pi fng)及配制)牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基(用于分離和培養(yǎng)細(xì)菌,是一種天然(tinrn)培養(yǎng)基)配方如下: 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 瓊脂 20
5、g 自來水 1000mL pH 7.27.4 滅菌 1.05kg/cm2,2530min共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序2 (四種培養(yǎng)基的配方(pi fng)及配制)馬鈴薯(或豆芽汁)蔗糖(或葡萄糖)瓊脂培養(yǎng)基(用于分離和培養(yǎng)真菌之用,是一種(y zhn)半合成培養(yǎng)基),其配方如下: 去皮馬鈴薯(或鮮豆芽)200g (50g) 蔗糖(或葡萄糖) 20g (50g) 自來水 1000mL 瓊脂 20g pH 自然 滅菌:(含蔗糖)1.05kg/cm2 20min共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序2 (四種培養(yǎng)基的配方(pi fng)及配制)淀粉瓊脂培養(yǎng)(piyng)基(高氏一號Gause1),用于分離和培養(yǎng)(pi
6、yng)放線菌,是一種合成培養(yǎng)(piyng)基。配方如下:可溶性淀粉 20.0g KNO3 1.0g K2HPO4 0.5g MgSO4 7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4 7H2O 0.01g 瓊脂 20g 自來水 1000mL 滅菌: 1.05kg/cm2 30min 共二十七頁實(shí)驗(yàn)程序3 (三種(sn zhn)培養(yǎng)基的配方及配制)無菌水的制備 無菌水為下一次微生物分離實(shí)驗(yàn)中所需要(xyo)的材料。 100mL三角燒瓶(裝有玻璃珠),裝自來水45.0mL,試管中裝9.0mL(4.5ml)自來水,塞上棉塞,包扎、滅菌備用。三角燒瓶和試管須預(yù)先塞好棉塞,并經(jīng)干熱滅菌。共二十七頁
7、實(shí)驗(yàn)程序4 (分離培養(yǎng)微生物常用器皿(qmn)的準(zhǔn)備)清洗一些玻璃儀器:如三角燒瓶、試管(shgun)、培養(yǎng)皿、吸管等。棉塞的制作 包裝培養(yǎng)皿和吸管等。 共二十七頁實(shí)驗(yàn)(shyn)程序5 (培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法)干熱滅菌法:電熱烘箱作為干熱滅菌器加壓蒸汽滅菌法 其步驟如下: 1.滅菌器內(nèi)加入一定量的水,將用防水紙包扎好的物品放入其中。2.接通電源,進(jìn)行加熱。 3. 排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣,可將排氣閥打開,待排出(pi ch)大氣后關(guān)閉排氣閥;或關(guān)閉排氣閥,待壓力上升到0.5kg/cm2時(shí)再打開排氣閥,待壓力回復(fù)到0時(shí)再關(guān)閉排氣閥。 4.當(dāng)壓力達(dá)15bl/in2(即1.05kg/cm2)時(shí),
8、此時(shí)滅菌器內(nèi)的溫度為1210C,維持30min。對熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基酸等物時(shí),應(yīng)適當(dāng)降低壓力,延長時(shí)間。 5.滅菌時(shí)間一到,切斷電源,待壓力降至零時(shí),才能打開排氣閥,然后打開滅菌器蓋,取出物品。共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序5共二十七頁共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序5共二十七頁實(shí)驗(yàn)程序5 (培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌(mi jn)方法)間歇滅菌法: 待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里,每天蒸煮1次,每次煮沸1h,連續(xù)3d重復(fù)進(jìn)行。在每兩次蒸煮之間,將物品(指培養(yǎng)基)放在370C恒溫條件下培養(yǎng)過夜,這樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體,以便下次蒸煮時(shí)殺滅。過濾除菌法: 不能用加熱滅菌的液
9、體物質(zhì)(wzh)(如維生素、血清),一般可用細(xì)菌過濾器進(jìn)行除菌。(教師示范)共二十七頁實(shí)驗(yàn)程序5 (培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌(mi jn)方法)共二十七頁實(shí)驗(yàn)程序5 (培養(yǎng)基和玻璃(b l)器材的滅菌方法)紫外線滅菌法: 一般30W燈管,9m3空間,距地面2m每次打開紫外線照射(zhosh)0.5h,就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射(zhosh)紫外線時(shí)先噴灑石炭酸等化學(xué)消毒劑,可增強(qiáng)滅菌效果。紫外線雖有較強(qiáng)的殺菌力,但穿透力弱,即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除,因此只適用于空氣及表面殺菌。化學(xué)藥劑消毒滅菌: 微生物實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)殺菌劑有升汞、甲醛、高錳酸鉀、酒精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液,它們有的是殺菌劑,有的是抑菌劑,詳見表64。共二十七頁實(shí)驗(yàn)程序5 (培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌(mi jn)方法)共二十七頁思考題固體(gt)培養(yǎng)基加瓊脂后加熱溶化時(shí)要注意哪些問題?培養(yǎng)基中加瓊脂的作用是什么?干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌和間
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