實(shí)驗(yàn),微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌

1、實(shí) 驗(yàn) 二.三微生物培養(yǎng)基的配制(pizh)和滅菌共二十七頁微生物培養(yǎng)基的配制(pizh)和滅菌目的要求實(shí)驗(yàn)(shyn)材料實(shí)驗(yàn)程序共二十七頁目 的 要 求了解培養(yǎng)基的配制原理(yunl)和方法，掌握其配制過程。了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。熟悉分離、培養(yǎng)微生物前的有關(guān)準(zhǔn)備工作及操作方法。共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 材 料藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO47H2O、FeSO47H2O等。高壓蒸汽滅菌器、恒溫干熱滅菌箱、細(xì)菌過濾器、紫外線殺菌燈。其它：天平、牛角匙、電爐、1N HCl、1N NaOH、pH試

2、紙、刻度(kd)搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、帶玻璃珠的三角瓶、帶棉塞的無菌試管、無棉塞的空試管、培養(yǎng)皿、吸管、各種包裝紙、防水紙、繩索、棉花、標(biāo)簽等。共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序培養(yǎng)基的配制分離(fnl)培養(yǎng)微生物常用器皿的準(zhǔn)備培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 內(nèi)容(nirng) （培養(yǎng)基的配制）培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的配制(pizh)方法和步驟四種培養(yǎng)基的配方及配制無菌水的制備共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序1 （培養(yǎng)基的種類(zhngli)）據(jù)組成成分可分為: 1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)(wzh)按一定比例配制而成。 2.半合成培養(yǎng)基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)(wzh)和另一部分天然物質(zhì)(

3、wzh)配制而成。 3.天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機(jī)物配制而成。從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為 1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。 2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。 3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.20.5%凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序1 （培養(yǎng)基的種類(zhngli)）常用凝固劑為瓊脂（其次(qc)為明膠），又叫洋菜、凍粉。共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序2 （培養(yǎng)基的配制(pizh)方法和步驟）稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。調(diào)pH值：用1N N

4、aOH或1N HCl調(diào)pH，用pH試紙對照。加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補(bǔ)水。分裝(fn zhun)：注意不要污染棉塞。包扎成捆，掛上標(biāo)簽（必須用鉛筆寫），注明何種培養(yǎng)基。滅菌備用：培養(yǎng)基滅菌后必須在370C下恒溫培養(yǎng)24h，確定無菌生長，方可使用。共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序2 （培養(yǎng)基的配制(pizh)方法和步驟）共二十七頁實(shí)驗(yàn)程序2 （培養(yǎng)基的配制方法(fngf)和步驟）共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序2 （四種培養(yǎng)基的配方(pi fng)及配制）牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)細(xì)菌，是一種天然(tinrn)培養(yǎng)基）配方如下： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 瓊脂 20

5、g 自來水 1000mL pH 7.27.4 滅菌 1.05kg/cm2，2530min共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序2 （四種培養(yǎng)基的配方(pi fng)及配制）馬鈴薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)真菌之用，是一種(y zhn)半合成培養(yǎng)基），其配方如下： 去皮馬鈴薯(或鮮豆芽)200g （50g） 蔗糖（或葡萄糖） 20g （50g） 自來水 1000mL 瓊脂 20g pH 自然 滅菌：（含蔗糖）1.05kg/cm2 20min共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序2 （四種培養(yǎng)基的配方(pi fng)及配制）淀粉瓊脂培養(yǎng)(piyng)基（高氏一號Gause1），用于分離和培養(yǎng)(pi

6、yng)放線菌，是一種合成培養(yǎng)(piyng)基。配方如下：可溶性淀粉 20.0g KNO3 1.0g K2HPO4 0.5g MgSO4 7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4 7H2O 0.01g 瓊脂 20g 自來水 1000mL 滅菌： 1.05kg/cm2 30min 共二十七頁實(shí)驗(yàn)程序3 （三種(sn zhn)培養(yǎng)基的配方及配制）無菌水的制備 無菌水為下一次微生物分離實(shí)驗(yàn)中所需要(xyo)的材料。 100mL三角燒瓶（裝有玻璃珠），裝自來水45.0mL，試管中裝9.0mL(4.5ml)自來水，塞上棉塞，包扎、滅菌備用。三角燒瓶和試管須預(yù)先塞好棉塞，并經(jīng)干熱滅菌。共二十七頁

7、實(shí)驗(yàn)程序4 （分離培養(yǎng)微生物常用器皿(qmn)的準(zhǔn)備）清洗一些玻璃儀器：如三角燒瓶、試管(shgun)、培養(yǎng)皿、吸管等。棉塞的制作 包裝培養(yǎng)皿和吸管等。 共二十七頁實(shí)驗(yàn)(shyn)程序5 （培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器加壓蒸汽滅菌法 其步驟如下： 1.滅菌器內(nèi)加入一定量的水，將用防水紙包扎好的物品放入其中。2.接通電源，進(jìn)行加熱。 3. 排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開，待排出(pi ch)大氣后關(guān)閉排氣閥；或關(guān)閉排氣閥，待壓力上升到0.5kg/cm2時(shí)再打開排氣閥，待壓力回復(fù)到0時(shí)再關(guān)閉排氣閥。 4.當(dāng)壓力達(dá)15bl/in2（即1.05kg/cm2）時(shí)，

8、此時(shí)滅菌器內(nèi)的溫度為1210C，維持30min。對熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基酸等物時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長時(shí)間。 5.滅菌時(shí)間一到，切斷電源，待壓力降至零時(shí)，才能打開排氣閥，然后打開滅菌器蓋，取出物品。共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序5共二十七頁共二十七頁實(shí) 驗(yàn) 程 序5共二十七頁實(shí)驗(yàn)程序5 （培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌(mi jn)方法）間歇滅菌法： 待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，連續(xù)3d重復(fù)進(jìn)行。在每兩次蒸煮之間，將物品（指培養(yǎng)基）放在370C恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體，以便下次蒸煮時(shí)殺滅。過濾除菌法： 不能用加熱滅菌的液

9、體物質(zhì)(wzh)（如維生素、血清），一般可用細(xì)菌過濾器進(jìn)行除菌。（教師示范）共二十七頁實(shí)驗(yàn)程序5 （培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌(mi jn)方法）共二十七頁實(shí)驗(yàn)程序5 （培養(yǎng)基和玻璃(b l)器材的滅菌方法）紫外線滅菌法： 一般30W燈管，9m3空間，距地面2m每次打開紫外線照射(zhosh)0.5h，就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射(zhosh)紫外線時(shí)先噴灑石炭酸等化學(xué)消毒劑，可增強(qiáng)滅菌效果。紫外線雖有較強(qiáng)的殺菌力，但穿透力弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用于空氣及表面殺菌。化學(xué)藥劑消毒滅菌： 微生物實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)殺菌劑有升汞、甲醛、高錳酸鉀、酒精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液，它們有的是殺菌劑，有的是抑菌劑，詳見表64。共二十七頁實(shí)驗(yàn)程序5 （培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌(mi jn)方法）共二十七頁思考題固體(gt)培養(yǎng)基加瓊脂后加熱溶化時(shí)要注意哪些問題？培養(yǎng)基中加瓊脂的作用是什么？干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌和間