公開課-動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體-一等獎(jiǎng)--完整PPT課件

1、番茄-馬鈴薯 理想圖2010-3-261番茄馬鈴薯植株融合的原生質(zhì)體AB再生壁脫分化愈傷組織再分化植物原生質(zhì)體的融合植物組織培養(yǎng)番茄細(xì)胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A雜種細(xì)胞 AB去壁去壁人工誘導(dǎo)馬鈴薯細(xì)胞B知識(shí)回顧：植物體細(xì)胞雜交技術(shù)2010-3-2622.2.2 動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體2010-3-263一、動(dòng)物細(xì)胞融合1、概念：指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。2、結(jié)果：形成單核的雜交細(xì)胞3、原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性4、過程：5、意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。6、應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別

2、是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體2010-3-2644、過程：動(dòng)物細(xì)胞A 動(dòng)物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合2個(gè)完整的雜交細(xì)胞AB有絲分裂（膜融合、誘導(dǎo)方法質(zhì)融合、核融合）單核細(xì)胞2010-3-26561、什么是抗體？二、單克隆抗體回顧2、抗體的分布？抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。主要分布在血清中。7該法制備抗體的特點(diǎn)： 產(chǎn)量低、純度低， 且抗體的特異性差、靈敏度低。自主閱讀P52：抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法及缺陷是什么？思 考：如何獲取某種特定抗體？2010-3-268B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。動(dòng)物體內(nèi)的B

3、淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。2010-3-269二、單克隆抗體 由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體 稱為單克隆抗體。1、概念:單：克?。嚎贵w特點(diǎn)：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞無性繁殖（復(fù)制）化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)2010-3-2610怎樣才能大量生產(chǎn)單克隆抗體？提示1：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？提示3：有什么方法能使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能 力和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時(shí)具備呢？2010-3-2611大量生產(chǎn)單克隆抗體思路B淋巴細(xì)胞具產(chǎn)生抗體的功能骨髓瘤細(xì)胞具無

4、限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞1975年英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和柯勒設(shè)想：2010-3-2612B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？融合細(xì)胞幾種類型？骨髓瘤細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞- B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞多種雜交細(xì)胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗(yàn)陽性克隆上述雜交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)2、單克隆抗體的制備過程第1次篩選目的：得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選目的：在

5、雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。 該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能產(chǎn)生專一抗體又能無限增殖。雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？特異性強(qiáng)，靈敏度高13多孔細(xì)胞板2010-3-2614免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗(yàn)陽性專一抗體檢驗(yàn)陽性注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)單克隆抗體克隆雜交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞多種雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？本過程利用的那些技術(shù)？動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是否注射抗原（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？幾種融合細(xì)胞？?jī)纱魏Y選的目的分別是什么？2、單克隆抗體制備過程與傳統(tǒng)制備的抗體相

6、比具有什么特點(diǎn)？2010-3-26154.單克隆抗體的應(yīng)用： 作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合 優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速用于運(yùn)載藥物：制成“生物導(dǎo)彈”治療疾病：主要用于癌癥治療2010-3-2616兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)新細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)課堂小結(jié)你記住了嗎？滅活的病毒雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)2010-3-2617形成雜種細(xì)胞獲得雜種植株結(jié)果物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原 理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比

7、較項(xiàng)目1、植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較課堂小結(jié)融合前處理用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細(xì)胞分散2010-3-26182、單克隆抗體制備過程B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合B-B細(xì)胞B-瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（ B-瘤細(xì)胞）克隆化培養(yǎng)抗體檢測(cè)產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體課堂小結(jié)2010-3-2619B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC 1.右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案制備單克隆抗體不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞。(1).該實(shí)驗(yàn)方案的目的是：_(2).該方案能達(dá)到

8、預(yù)期效果嗎？為什么？課堂練習(xí)2010-3-2620B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC (3).A是從小鼠的脾臟中取得_ 該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_ 。(4).圖中B為_過程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能_ ,又能_。B淋巴細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活的病毒雙親細(xì)胞產(chǎn)生專一抗體無限增殖課堂練習(xí)2010-3-2621B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC (5)._ 技術(shù)是單克隆抗體的技術(shù)支持。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（6）單克隆抗體的特點(diǎn) _，并可大量制備。特異性強(qiáng)，靈敏度高課堂練習(xí)2010-3-26223、用a表示骨髓瘤細(xì)胞，用b表示B淋巴細(xì)胞，則細(xì)胞融合過程中兩次篩選的目的分別是（ ） A.a、aa、ab、bb 、b a、aa、ab abB. a、aa、ab、bb 、b ab、bb 、b abC. a、aa、ab、bb 、b ab 產(chǎn)生特定抗體的abD. a、aa、ab、bb 、b aa 能無限增殖的aaC課堂練習(xí)2、動(dòng)物細(xì)胞融合和植物細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（ ）A.誘導(dǎo)融合的方法完全相同 B.所