定量檢驗(yàn)方法學(xué)的分析性能驗(yàn)證淺析

1、王青 女，1972年出生，遺傳學(xué)碩士，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心常規(guī)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、技術(shù)主管， 多年來從事臨檢、生化、細(xì)胞遺傳等專業(yè)檢驗(yàn)工作，熟練掌握各項(xiàng)檢驗(yàn)專業(yè)技術(shù)及ISO15189 質(zhì)量管理體系，具有較為扎實(shí)的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)及遺傳學(xué)專業(yè)知識(shí)。依據(jù)衛(wèi)生部醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法第三十條款和CNAS-CL02： 2008醫(yī)學(xué) 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則（IOS15189:2007）第5.5條款的相關(guān)要求，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)方法 學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)，以檢查其分析性能和對(duì)預(yù)期用途的適用性。近年來，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心在實(shí)驗(yàn)室認(rèn) 可的工作中，進(jìn)行了大量的性能驗(yàn)證試驗(yàn)，累積了較豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，本文從“5W+1HA個(gè) 方面，對(duì)定量檢驗(yàn)方法學(xué)的性

2、能驗(yàn)證進(jìn)行匯總，供大家探討和交流。一、為什么要做性能驗(yàn)證？性能驗(yàn)證是為了確保實(shí)驗(yàn)室開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目，所應(yīng)用的檢測(cè)系統(tǒng)的分析性能或檢驗(yàn)項(xiàng) 目的方法學(xué)能夠滿足檢測(cè)及臨床要求，從而保證患者標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。二、進(jìn)行性能驗(yàn)證的場(chǎng)所？按照實(shí)驗(yàn)室管理辦法和認(rèn)可準(zhǔn)則的要求，醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)承擔(dān)所開展檢驗(yàn)項(xiàng)目 的性能驗(yàn)證工作。三、何時(shí)需要做性能驗(yàn)證？1、以下情況應(yīng)完成初次性能驗(yàn)證：新安裝的儀器擬開展的項(xiàng)目；新開展項(xiàng)目；同一項(xiàng) 目的試劑變更廠家或檢驗(yàn)方法發(fā)生變更時(shí);儀器校準(zhǔn)、發(fā)生故障維修后或更換主要的配件后， 可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生較大的影響時(shí)，可選擇其所開展的部分檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行分析性能證。2、何時(shí)需要做性能評(píng)估/

3、評(píng)價(jià)？初次驗(yàn)證后，對(duì)精密度、正確度及可報(bào)告范圍等性能參數(shù)至少每12個(gè)月進(jìn)行一次評(píng)估， 可通過評(píng)估如CV、均值等室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的變化趨勢(shì)（批間精密度）、室間質(zhì)評(píng)項(xiàng)目的結(jié)果 的可接受性（正確度）、臨床醫(yī)護(hù)人員對(duì)結(jié)果的反饋（可報(bào)告范圍）、小樣本的驗(yàn)證等多種 方式進(jìn)行。若評(píng)估的結(jié)果不可接受，則需重新進(jìn)行性能驗(yàn)證。四、哪些人員可以進(jìn)行性能驗(yàn)證試驗(yàn)？性能驗(yàn)證試驗(yàn)應(yīng)由實(shí)驗(yàn)室有資質(zhì)的檢驗(yàn)人員完成，必要時(shí)可由技術(shù)支持人員協(xié)助完成 試驗(yàn)；而性能驗(yàn)證報(bào)告必須由資深的檢驗(yàn)人員完成，并經(jīng)科室主任審核后歸檔保存。五、性能驗(yàn)證包括哪些方面？定量項(xiàng)目性能驗(yàn)證的內(nèi)容包括但不限于：精密度（批內(nèi)、批間）；正確度；檢測(cè)低限 （靈敏度）

4、；攜帶污染率；線性范圍；可報(bào)告范圍；生物參考區(qū)間；檢驗(yàn)結(jié)果量值溯源；測(cè) 量不確定度；等。六、如何實(shí)施性能驗(yàn)證？1、性能驗(yàn)證試驗(yàn)的準(zhǔn)備工作1.1范圍、材料、方案：應(yīng)確定定量檢測(cè)的項(xiàng)目；所需的儀器、配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì) 控品等材料;制定完整的性能驗(yàn)證方案(尤其是各項(xiàng)性能參數(shù)的判斷標(biāo)準(zhǔn)的制定及其依據(jù))。1.2試驗(yàn)要求：儀器應(yīng)進(jìn)行校準(zhǔn)或保養(yǎng)；要盡可能在相同條件下進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)；所有試 驗(yàn)均需在室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控的情況下方可進(jìn)行。2、性能驗(yàn)證試驗(yàn)主要討論精密度、正確度、攜帶污染率、線性范圍、可報(bào)告范圍的試驗(yàn)方法。2.1精密度主要包括批內(nèi)精密度和批間精密度兩項(xiàng)2.1.1批內(nèi)精密度標(biāo)本選擇：選擇低、中、高三個(gè)濃

5、度或中、高兩個(gè)濃度的新鮮標(biāo)本/質(zhì)控品；試驗(yàn)方法：連續(xù)重復(fù)測(cè)定20/21次；結(jié)果計(jì)算：計(jì)算后20次檢測(cè)結(jié)果的SD和CV；判斷標(biāo)準(zhǔn)：以能力驗(yàn)證/室間質(zhì)評(píng)評(píng)價(jià)界限作為允許總誤差(TEa)，批內(nèi)精密度1/4TEa； 或者符合試劑說明書的要求。注意事項(xiàng)：若選擇標(biāo)本，則其濃度應(yīng)盡可能接近質(zhì)控品或試劑說明書中評(píng)價(jià)該性能所提 供的標(biāo)本濃度。2.1.2批間精密度標(biāo)本選擇：選擇低、中、高三個(gè)濃度或中、高兩個(gè)濃度的新鮮標(biāo)本/質(zhì)控品；試驗(yàn)方法：每天1次測(cè)試，連續(xù)測(cè)試20天；或每天2次測(cè)試，連續(xù)測(cè)試10天；或每 天4次測(cè)試，連續(xù)測(cè)定5天；結(jié)果計(jì)算：剔除離群值后，計(jì)算20次檢測(cè)結(jié)果的SD和CV；判斷標(biāo)準(zhǔn)：1/3TEa；或

6、者符合試劑說明書的要求。注意事項(xiàng)：若選擇標(biāo)本，首先應(yīng)考慮檢測(cè)物的穩(wěn)定性，濃度要求同批內(nèi)精密度；若檢測(cè) 物不穩(wěn)定，則必須使用質(zhì)控品進(jìn)行該試驗(yàn)。2.2 正確度可采用以下七種方法進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)：分析已知值的參考物質(zhì)：因?qū)嶒?yàn)室不易得到參考物質(zhì)，較少使用。分析廠商或第三方提供的已經(jīng)賦值的質(zhì)控品：因采用質(zhì)控品進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)，尚存在 爭(zhēng)議，較少使用。加樣回收試驗(yàn)：因大部分用于臨床診斷的檢驗(yàn)項(xiàng)目為微量或痕量物質(zhì)，試驗(yàn)難度較大;不宜采用。方法學(xué)比對(duì)試驗(yàn)；適用于引進(jìn)新方法時(shí)，可以與原有的方法進(jìn)行比較，最少分析20 個(gè)新鮮標(biāo)本，要求濃度覆蓋線性范圍，用兩種方法同時(shí)測(cè)定同樣的樣品(偏倚1/2Tea)， 進(jìn)行相關(guān)回歸分

7、析。分割樣本室間比對(duì)：要求與使用相同檢測(cè)方法的、質(zhì)量保證措施較好的、或已獲認(rèn)可 或的實(shí)驗(yàn)室，或與使用配套分析系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果滿意。分析室間質(zhì)評(píng)物:最為常用。檢測(cè)衛(wèi)生部臨檢中心質(zhì)評(píng)物，檢測(cè)結(jié)果均在允許范圍內(nèi)。分析廠商提供的參考物質(zhì)：當(dāng)以上六種方法均難以實(shí)施時(shí)，此方法最為實(shí)用。選擇使 用A、B兩個(gè)不同批號(hào)校準(zhǔn)品，使用A批號(hào)校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)，對(duì)B批號(hào)的校準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)， 連續(xù)測(cè)定6次，排除第1次的分析結(jié)果，計(jì)算其余5次檢測(cè)結(jié)果的平均值，要求每次檢測(cè) 結(jié)果和均值都在校準(zhǔn)品定值可接受范圍內(nèi)；并計(jì)算檢測(cè)均值與廠家賦值的偏倚，以B (廠家 提供的校準(zhǔn)品B類不確定度)作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。2.3攜帶污染率(加樣

8、針)標(biāo)本選擇：取高濃度室內(nèi)質(zhì)控品或高濃度新鮮標(biāo)本，混合均勻后放置于1、2、3杯位 置，再取去離子水或生理鹽水放置于4、5、6杯位置；試驗(yàn)方法：對(duì)以上6份標(biāo)本連續(xù)進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定值分別為H1、H2、H3、L1、L2、L3；結(jié)果計(jì)算：攜帶污染率=(L1-L3) x100% / (H3-L3)；判斷標(biāo)準(zhǔn)：生化檢驗(yàn)項(xiàng)目2%。2.4線性評(píng)價(jià)標(biāo)本選擇：選取接近線性范圍上限的高值標(biāo)本與接近下限的低值標(biāo)本；無法獲取合適的 標(biāo)本可使用添加物或校準(zhǔn)品；上述條件均無法滿足時(shí)，可選用滿足臨床需求的高值標(biāo)本。試驗(yàn)方法：標(biāo)本分別按5： 0 (100%)、4： 1 (80%)、3： 2 (60%)、2： 3 (40%)、1：

9、 4 (20%)、0： 5 (0%)的比例進(jìn)行稀釋，每個(gè)稀釋度重復(fù)測(cè)定3次計(jì)算均值。結(jié)果計(jì)算：將實(shí)測(cè)值與理論值作比較(偏離應(yīng)小于10%)，計(jì)算Y= bX + a，驗(yàn)證線性 范圍。判斷標(biāo)準(zhǔn)：b在0.971.03范圍內(nèi)，a接近于0。2.5可報(bào)告范圍適用于實(shí)驗(yàn)室開展的線性范圍不能滿足臨床標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果需求的定量檢驗(yàn)項(xiàng)目。標(biāo)本選擇：取一份接近線性范圍高限值濃度的病人標(biāo)本，用去離子水、生理鹽水、低值 血清或廠商推薦的稀釋液進(jìn)行系列稀釋，稀釋比例參照廠商提供的機(jī)內(nèi)稀釋倍數(shù)。試驗(yàn)方法：每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定2次計(jì)算均值。結(jié)果計(jì)算：每個(gè)濃度實(shí)際測(cè)定的均值和稀釋后的理論估計(jì)值，兩者進(jìn)行差值相對(duì)百分?jǐn)?shù) 計(jì)算，如果結(jié)果20%，此稀釋度為技術(shù)上的可接受限?？蓤?bào)告范圍的高限=可接受最大稀釋倍數(shù)x線性范圍（AMR）上限值；可報(bào)告范圍的低限：線性范圍的檢測(cè)低限或功能靈敏度為可報(bào)告