-miRNA講稿學(xué)生用-PPT課件

1、miRNA簡(jiǎn)介miRNA定義： 微小RNA(microRNA，miRNA)是一種長(zhǎng)度約為22-28 nt的非編碼小分子RNA，miRNA通過與靶mRNA 3UTR(Untranslated Regions,即非翻譯區(qū)，是mRNA分子兩端的非編碼片段)完全或不完全的互補(bǔ)結(jié)合，導(dǎo)致靶mRNA降解或翻譯抑制，從而調(diào)控靶基因的表達(dá)，影響細(xì)胞增殖、分化和凋亡.它們通過miRNA介導(dǎo)的特異性的基因沉默導(dǎo)致靶mRNA降解及抑制蛋白質(zhì)的合成調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)水平。miRNA對(duì)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡有重要的調(diào)節(jié)作用。 miRNA定義：在基因組中有被翻譯成蛋白質(zhì)的區(qū)域也有非翻譯的區(qū)域而翻譯區(qū)域僅占全基因組的1 4

2、 。為何存在大部分非翻譯區(qū)域呢？ m i R N A 是來自非翻譯區(qū)域的單鏈R N A ， 存在于細(xì)胞內(nèi)部。是基因調(diào)控的重要分子。miRNA*定義RNase-III酶Dicer將pre-microRNA剪切成不完全配對(duì)的雙鏈RNA雙體（miRNA:miRNA*),即成熟microRNA和其互補(bǔ)序列所組成的二聚體，起作用的是miRNA,選擇性整合RISC中設(shè)別靶基因而起作用，而miRNA*會(huì)降解。miRNA和siRNA區(qū)別把疾病相關(guān)R N A 作為靶點(diǎn)的藥物中，s i R N A 藥物15個(gè)已經(jīng)進(jìn)入實(shí)質(zhì)性的臨床研究。s i R N A 為雙鏈R N A ， 具有與靶點(diǎn)R N A 互補(bǔ)的結(jié)構(gòu)，完全

3、互補(bǔ)靶向抑制基因表達(dá)，長(zhǎng)度與m i R N A類似， 約為19-25 個(gè)堿基對(duì)。s i R N A 在體內(nèi)由酶解旋為單鏈 與靶點(diǎn)mR N A 結(jié)合后降解。s i R N A 和m i R N A 都會(huì)抑制m R N A 向蛋白質(zhì)的翻譯 但是其作用方式卻差別頗大。一般認(rèn)為siRNA 的特異性很高 不會(huì)發(fā)生結(jié)合于非目標(biāo)mR N A 的脫靶情況(off -targeting) 。但是 研究發(fā)現(xiàn)miRNA的結(jié)合能力存在擺動(dòng) 1 個(gè)miRNA可抑制多個(gè)mRNA 的功能。研究人員預(yù)測(cè)在miRNA 靶點(diǎn)藥物開發(fā)方面,這一特點(diǎn)具有重要意義,因此miRNA的作用效果可能更高，但是作用機(jī)理更復(fù)雜，對(duì)基因調(diào)控的網(wǎng)絡(luò)

4、作用往往難以研究清楚。miRNA作用方式miRNA對(duì)其功能靶點(diǎn)的最低要求是，至少7個(gè)堿基與5端互補(bǔ)結(jié)合，就可調(diào)控其靶基因。miRNA與靶mRNA的作用方式有兩種。當(dāng)兩者完全互補(bǔ)時(shí)，miRNA的作用方式與RNA干擾相似，即與完全互補(bǔ)的同源mRNA配對(duì)結(jié)合，導(dǎo)致靶mRNA降解。而當(dāng)miRNA與靶mRNA不完全互補(bǔ)時(shí)，miRNA則通過與靶mRNA的3端非翻譯區(qū)結(jié)合，阻遏轉(zhuǎn)錄后翻譯。由于許多miRNA與靶mRNA并不完全互補(bǔ)，所以主要的作用模式是轉(zhuǎn)錄后的翻譯阻遏（調(diào)控）。張辰宇:吃什么補(bǔ)什么發(fā)現(xiàn)植物的微小核糖核酸（microRNA）可以通過日常食物攝取的方式進(jìn)入人體血液和組織器官。并且，一旦進(jìn)入體內(nèi)，

5、它們將通過調(diào)控人體內(nèi)靶基因表達(dá)的方式影響人體的生理功能，進(jìn)而發(fā)揮生物學(xué)作用。這一研究成果公布在Cell research雜志上。 生物通 ebiotrade 這一研究成果公布后吸引了媒體關(guān)注，美國(guó)大眾科學(xué)網(wǎng)站對(duì)此也進(jìn)行了報(bào)道，稱研究人員發(fā)現(xiàn)蔬菜里的核糖核酸(RNA)在食入后會(huì)進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)的血液，而且一旦進(jìn)入我們體內(nèi)，就能改變我們的基因表達(dá)。證明植物miRNA可能是食物中的“第七種營(yíng)養(yǎng)成分”（其他六種分別是水、蛋白質(zhì)、脂肪酸、碳水化合物、維他命和稀有元素）；張辰宇:微小RNA的人體之旅在實(shí)驗(yàn)中，研究人員給小鼠喂的是生米，而人類日常進(jìn)食吃的是熟米，食物經(jīng)過加熱之后是否會(huì)破壞其微小RNA呢？張辰宇指

6、出，煮過的米飯中仍然含有很多微小RNA，經(jīng)過油炸才能破壞掉大部分的微小RNA。他們還發(fā)現(xiàn)，中藥在經(jīng)過煎煮之后，藥湯里的微小RNA的濃度很高。給小鼠喂藥之后24小時(shí)，就發(fā)現(xiàn)小鼠肺部相應(yīng)的微小RNA濃度增高。他們認(rèn)為，這些發(fā)現(xiàn)為在傳統(tǒng)的中草藥中發(fā)現(xiàn)一類全新的活性分子提供了依據(jù)。對(duì)于生物學(xué)來說，更大的意義可能在于，這些研究為我們理解跨“界”的相互作用提供了新的線索。“動(dòng)物、植物之間如何的借著微小RNA互相調(diào)控的？大家說不定共進(jìn)化（co-evolution）了?！睆埑接钫f。miRNA網(wǎng)站miRNA發(fā)揮對(duì)約3 0 人類蛋白質(zhì)的表達(dá)調(diào)節(jié)作用。序列分析表明，至少有1/3的人類基因與miRNA調(diào)控相關(guān)，而且越

7、來越多的試驗(yàn)證據(jù)表明，miRNA還有很多功能未被發(fā)現(xiàn)。MiRNA最早在1993年在線蟲體內(nèi)發(fā)現(xiàn)。迄今在人體已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并命名的miRNA 超過了1萬 個(gè)。除了早期發(fā)現(xiàn)的let一7等保留命名外，一般命名為miR-數(shù)字。見網(wǎng)站：/ starBase：一個(gè)高通量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)CLIP-Seq（或稱為HITS-CLIP）和mRNA降解組測(cè)序數(shù)據(jù)支持的microRNA靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫，整合和構(gòu)建多個(gè)流行的靶標(biāo)預(yù)測(cè)軟件的交集和調(diào)控關(guān)系。網(wǎng)址：/Tarbase：一個(gè)收集已被實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的microRNA靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫。網(wǎng)址：microrna.gr/tarbase/ miRec

8、ords：一個(gè)整合的microRNA靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫。整合多個(gè)靶標(biāo)預(yù)測(cè)軟件的調(diào)控關(guān)系。網(wǎng)址：/targetScan: 基于靶mRNA序列的進(jìn)化保守等特征搜尋動(dòng)物的microRNA靶基因。是預(yù)測(cè)microRNA靶標(biāo)假陽性率較低的軟件。而且是microRNA領(lǐng)域大牛Bartel實(shí)驗(yàn)室開發(fā)的。網(wǎng)址/PicTar：基于microRNA或microRNA靶標(biāo)聯(lián)合作用等特征開發(fā)的搜尋動(dòng)物的microRNA靶基因的軟件，假陽性率也較低。是microRNA領(lǐng)域大牛Rajewsky實(shí)驗(yàn)室開發(fā)的。該文章位列miRNA相關(guān)文章引用Top5。網(wǎng)址：pic

9、tar.mdc-berlin.de/ PITA：基于靶位點(diǎn)的可接性（target-site accessibility）和自由能預(yù)測(cè)microRNA的靶標(biāo)。是著名的生物信息學(xué)家Segal實(shí)驗(yàn)室開發(fā)的。網(wǎng)址：genie.weizmann.ac.il/pubs/mir07/mir07_data.html RNA22：基于序列特征預(yù)測(cè)microRNA的結(jié)合位點(diǎn)。是幾個(gè)流行的microRNA靶標(biāo)預(yù)測(cè)軟件的其中一個(gè)。IBM公司的研究團(tuán)隊(duì)開發(fā)的。網(wǎng)址：cbcsrv.watson.ibm/rna22.htmlmiRanda和microRNA.org：是著名的Memorial Sloan-Kettering

10、癌癥研究中心的研究人員開發(fā)的軟件和數(shù)據(jù)庫。miRanda的最新版本又叫mirSVR。網(wǎng)址： MicroCosm：EMBL-EBI的Enright 實(shí)驗(yàn)室開發(fā)的microRNA靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫。網(wǎng)址：miRTarBase：整合實(shí)驗(yàn)證實(shí)的microRNA靶標(biāo)的數(shù)據(jù)庫。網(wǎng)址： miRGator v2.0：整合microRNA表達(dá)、靶標(biāo)和疾病相關(guān)信息的數(shù)據(jù)庫。網(wǎng)址：MiRNAMap:動(dòng)物的microRNA基因及其靶標(biāo)的數(shù)據(jù)庫。網(wǎng)址： miRDB: 動(dòng)物microRNA靶標(biāo)預(yù)測(cè)和功能注釋數(shù)據(jù)庫。網(wǎng)址： RNAhybrid：一個(gè)基于miRNA-target配對(duì)自由能預(yù)測(cè)microRNA的靶標(biāo)的軟件。網(wǎng)址： mi

11、RGen：microRNA基因和microRNA靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫。網(wǎng)址：m i R N A與腫瘤研究m i R N A 的研究普遍集中于監(jiān)測(cè)腫瘤的發(fā)生發(fā)展和靶向腫瘤治療。( 1 ) m i R N A 在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用， 參與了腫瘤發(fā)生發(fā)展的各個(gè)階段。結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展的各個(gè)階段， 經(jīng)歷了不典型增生、腺瘤、癌及腫瘤轉(zhuǎn)移等一系列變化， 每一個(gè)階段都有相應(yīng)的基因發(fā)生改變， 同時(shí)也有調(diào)控這些基因的m i R N A 發(fā)生變化。事實(shí)上， m i R N A 與基因之間相互調(diào)控，共同突破平衡， 才導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展。作為腫瘤發(fā)生的重要信號(hào)通路。 m i R N A與腫瘤研究( 2 ) m i R

12、N A 具有很好的組織特異性。經(jīng)篩查檢測(cè)4 8 個(gè)m i R N A 確定腫瘤的組織來源準(zhǔn)確率達(dá)9 0 。( 3 ) m i R N A 具有腫瘤發(fā)生的階段特異性， 同一種腫瘤在發(fā)生發(fā)展不同分期階段具有不同的m i R N A 表達(dá)譜。 ( 4 ) m i R N A 分子較小， 在石蠟包埋的組織中較m R N A 更為穩(wěn)定， 對(duì)于石蠟保存的組織檢測(cè)m i R N A 將更為準(zhǔn)確。( 5 ) 最近有報(bào)道證實(shí)血清或者血漿中游離m i R N A 也是有價(jià)值的腫瘤監(jiān)測(cè)指標(biāo)， 能夠穩(wěn)定地被檢測(cè)并且提示腫瘤狀態(tài)，使m i R N A 作為新的腫瘤標(biāo)志物具有較好的應(yīng)用前景。m i R N A與腫瘤研究部

13、分腫瘤與miRNA變化（2倍高，0.5低）A549/T與A549細(xì)胞miRNA芯片的qPCR驗(yàn)證miRNA在腫瘤治療中的希望miRNAs在腫瘤發(fā)生發(fā)展中所起的重要作用給新型抗癌藥物的開發(fā)帶來了希望。改變腫瘤中miRNAs的表達(dá)量被視為一種新的治療策略，主要包括引入抑癌基因性miRNAs、敲除或削減癌基因性miRNAs早期發(fā)現(xiàn)的miRNAmiRNA可以作為腫瘤抑制因子或者癌基因，在癌癥中發(fā)揮其功能，let一7在肺癌中表達(dá)降低，是腫瘤預(yù)后較差的生物標(biāo)記。在體外轉(zhuǎn)染let一7g可以抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞死亡。在免疫缺陷小鼠體內(nèi)，let-7g可以抑制腫瘤形成。let-7對(duì)一些癌基因(如Kras

14、、HMGA2)以及抑癌基因(如BRCA1)均可起到重要的調(diào)節(jié)作用 ，miR-200在腫瘤表達(dá)低，生存率低，表達(dá)高，生存率高。作為腫瘤抑制因子miR一122可以抑制癌細(xì)胞的某些特性，例如克隆存活、不依賴支持物生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、侵襲、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、裸鼠成瘤。這些結(jié)果表明，在肝臟中miR-122作為腫瘤抑制因子行使其功能。在體外miR-122可以直接抑制內(nèi)皮細(xì)胞生成血管。在鼠肝細(xì)胞癌模型中，證實(shí)了miR-122以ADAM17為靶點(diǎn)發(fā)揮其抑瘤活性。 作用機(jī)理miR-143和miR-145在結(jié)腸腺瘤形成早期，表達(dá)下調(diào)，促使腺瘤形成。對(duì)其3端突起處進(jìn)行化學(xué)修飾，使其活性增強(qiáng)、抵抗核酸酶。這種經(jīng)化學(xué)修飾后的mi

15、R-143復(fù)合物可以抑制人DLD一1結(jié)腸癌細(xì)胞移植瘤形成，有可能成為治療結(jié)腸癌的RNA藥物 作為癌基因m i R - 2 1 是目前唯一的在幾乎所有腫瘤中表達(dá)上調(diào)的m i R N A ， 其參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、浸潤(rùn)以及腫瘤的血管生成等多個(gè)環(huán)節(jié)，并且在體外已經(jīng)證實(shí)與多個(gè)抗腫瘤藥物的敏感性有關(guān)。目前認(rèn)為，m i R-2 1 調(diào)控腫瘤細(xì)胞的多種藥物敏感性的機(jī)制主要與m i R-2 1 參與調(diào)控細(xì)胞周期， 抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。迄今為止，m i R - 2 1 比較明確的靶分子有P T E N 、P D C D 4 、M a s p i n 、T P M I 、N F I B 、R E C K 、

16、S P R Y 2 及M A R C K S 等。 作為腫瘤診斷用miRNA作為分子標(biāo)記作為腫瘤的診斷準(zhǔn)確率達(dá)90 。僅用1個(gè)miR-205指標(biāo)來區(qū)分肺鱗癌及非鱗癌的敏感性就達(dá)96 ，特異性達(dá)90。在實(shí)際應(yīng)用方面，miRNA的表達(dá)水平可以從石蠟包埋的腫瘤組織 、血清、胸腹腔積液，甚至痰液中檢測(cè)，應(yīng)用范圍廣，甚至可以實(shí)現(xiàn)無創(chuàng)檢測(cè)，符合人們對(duì)理想分子標(biāo)志的所有要求。經(jīng)典的miRNA合成途徑miRNA 可能來自于基因組的基因間隔區(qū)或者編碼基因的內(nèi)含子中。首先在細(xì)胞核內(nèi)編碼miRNA 的基因通過RNA 聚合酶II 或RNA 聚合酶III 轉(zhuǎn)錄生成初級(jí)miRNA(pri-miRNA)，pri-miRNA

17、與來自蛋白質(zhì)編碼基因mRNA相似，有5 端帽式結(jié)構(gòu)和3 端多聚腺苷酸尾結(jié)構(gòu)，長(zhǎng)度可達(dá)數(shù)千個(gè)堿基。接著p r i -miRNA 在一種RNaseIII(Drosha 酶)和它的伴侶分子(DiGeorge syndrome critical region gene 8, DGCR8)組成的復(fù)合物作用下，剪切為7080 個(gè)核苷酸長(zhǎng)度、具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA 前體(pre-miRNA)。 作用機(jī)理miRNA 前體在Ran-GTP 依賴的核質(zhì)/ 細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白輸出蛋白5(exportin 5)的作用下，從核內(nèi)運(yùn)輸?shù)桨|(zhì)中。隨后miRNA前體在另一種RNaseIII(Dicer酶)的作用下被剪切成21-

18、28 個(gè)核苷酸長(zhǎng)度，而且其5端磷酸化和3端有2 nt 的懸垂序列，類似于siRNA 的不完全配對(duì)的雙鏈RNA，它們是由成熟miRNA與miRNA* 組成的二聚體，miRNA*是pre-miRNA中的一段RNA，其位置恰好與成熟的miRNA 相對(duì)。最后在RNA 解旋酶作用下生成成熟miRNA 和miRNA*，成熟miRNA結(jié)合到RNA誘導(dǎo)的基因沉默復(fù)合物(RNA-induced silencingcomplex, RISC)中發(fā)揮作用，miRNA* 則被降解。 推測(cè)mirtron途徑 在無脊椎動(dòng)物和哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)一種不依賴Drosha酶而產(chǎn)生miRNA的新途徑,即mirtron途徑。該途徑的發(fā)現(xiàn)

19、為進(jìn)一步解釋miRNA的產(chǎn)生機(jī)制提供了重要資料以及新的研究思路。 疾病治療研究基因的功能通常是將其從基因組中敲除，然后觀察敲除前后的變化，但在破譯miRNA的功能，一般不會(huì)采用這種策略，而是通過增強(qiáng)或減弱該miRNA的表達(dá)來鑒定其功能。miRNA mimics是模擬生物體內(nèi)源的miRNAs，運(yùn)用化學(xué)合成的方法合成，能增強(qiáng)內(nèi)源性miRNA的功能。miRNA mimics進(jìn)一步增強(qiáng)內(nèi)源miRNA的沉默作用，降低細(xì)胞內(nèi)靶向蛋白表達(dá)量，進(jìn)行功能獲得性（gain-of-function）研究 疾病治療 miRNA inhibitor是化學(xué)修飾的專門針對(duì)細(xì)胞中特異的靶miRNA的抑制劑。近年來人工合成的m

20、iRNA（artificial miRNA，amiRNA）已經(jīng)成功應(yīng)用于沉默預(yù)期靶基因的表達(dá)及其功能研究，人工合成的miRNAs既能夠特異性地沉默單一基因，也可以同時(shí)沉默多個(gè)相關(guān)但不相同的基因。miRNA inhibitors，特異的靶向和敲除單個(gè)的miRNA分子，可以削弱內(nèi)源miRNA的基因沉默效應(yīng)，提高蛋白表達(dá)量， 反義技術(shù)：miR21: 5-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3反義DNA:5-TCAACATCAGTCTGATAAGCTA-3硫代、氟代、甲基化等修飾，L2000轉(zhuǎn)染。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。同以往的反義寡核苷酸技術(shù)類似。 反義藥物抑制過高表達(dá)的miRNA時(shí)，使用互補(bǔ)核酸的反義

21、藥物非常有效。主要在修飾上，用硫代、氟代、甲基化等修飾，也有用鎖核酸BNA(bridged nucleic)人工核酸將反義藥物的2位和4位碳通過橋結(jié)構(gòu)連接而抗核酸酶分解。同基因的反義藥物類似，不同的是miRNA反義藥物是靶向miRNA正義鏈。首個(gè)在人體中試驗(yàn)的miRNA藥物病毒中同樣發(fā)現(xiàn)了基因編碼的miRNAs，病毒miRNAs在蛋白質(zhì)編碼基因中所起的調(diào)節(jié)作用可能是在病毒中維持復(fù)制、逃逸宿主免疫等。文獻(xiàn)報(bào)道，miR一122與靶基因的5-UTR相結(jié)合，可以促進(jìn)丙型肝炎HCV的復(fù)制 ，目前已經(jīng)開發(fā)miR-122作為抗病毒治療靶點(diǎn)，丹麥制藥公司Santafis Pharma宣布其開發(fā)的丙型肝炎新型治

22、療手段SPC3649(鎖核酸LNA-antimiRTM-122)開始進(jìn)入人體第一階段臨床試驗(yàn)，這是世界上首個(gè)在人體中試驗(yàn)的miRNA藥物。miRNA藥物2019年5月28日，丹麥制藥公司Santaris Pharma的SPC3649為世界上首例miRNA藥物進(jìn)入臨床研究，作用靶點(diǎn)為miR-122,為丙型肝炎藥物，miR-122是肝細(xì)胞中表達(dá)高的miRNA，與丙型肝炎病毒增殖有關(guān)。48例健康人參與了I期臨床試驗(yàn)。2009年葛蘭素史克和美國(guó)Regulus公司合作進(jìn)行反義抑制miRNA靶點(diǎn)藥物研究，合同金額6億美圓。 前景siRNA藥物出來后，對(duì)原來專一性反義抑制靶基因的反義藥物（例如抑制Bcl2基

23、因的G3139）研究認(rèn)為沒有放大效應(yīng)，抑制效果有限。認(rèn)為siRNA藥物的靶向性也好，不會(huì)出現(xiàn)脫靶效應(yīng)，并且有放大效應(yīng)，比反義藥物作用敏感。但是同miRNA藥物比較，miRNA的結(jié)合能力變化大，1個(gè)miRNA可以抑制多個(gè)甚至幾十個(gè)mRNA的功能，因此認(rèn)為miRNA靶點(diǎn)藥物的特點(diǎn)是1個(gè)靶點(diǎn)可能將該類疾病的相關(guān)因子一網(wǎng)打盡，因此可能比siRNA藥物具有更高的有效性。 同Bcl2相關(guān)的目前進(jìn)行比較多的研究是過表達(dá)miR-181,145,15a,15b,16,34,或用反義抑制21 腫瘤耐藥性胃癌細(xì)胞系SGC7901和長(zhǎng)春新堿耐藥細(xì)胞比較，后者24個(gè)miRNAs下調(diào)2倍以上，11個(gè)miRNAs 上調(diào)2倍

24、以上。Q-RTPCR進(jìn)一步證明miR-181s下調(diào)4倍。耐藥可能通過miRNAs水平改變調(diào)節(jié)引起，CDDP引起卵巢癌細(xì)胞的let-7e,miR-30c,miR-25b,miR130a,miR335的不同表達(dá)水平變化，認(rèn)為這6個(gè)可能相關(guān)于耐藥。 腫瘤耐藥性胃癌細(xì)胞系SGC7901和長(zhǎng)春新堿耐藥細(xì)胞比較，后者M(jìn)DR表達(dá)增加，miR-181b下調(diào)，Bcl2表達(dá)增加。高表達(dá)miR-181b使MDR表達(dá)增加下降，Bcl2蛋白水平下降，miR-181b的Q-RTPCR表達(dá)增加，對(duì)化療藥物敏感性增加和凋亡敏感性。耐藥可能通過miRNAs水平調(diào)節(jié)改變，CDDP引起的卵巢癌細(xì)胞let-7e,miR-30c,mi

25、R125b,miR-130a,miR335等不同表達(dá)水平變化，認(rèn)為這6個(gè)miRNAs同耐藥直接相關(guān)。實(shí)際可能有相當(dāng)多的miRNAs參加化療耐藥的影響，調(diào)節(jié)部分miRNAs可能增加化療耐藥的敏感性。cardiac fibroblasts directly to cardiomyocytesCirculation Research published online April 26, 2019心肌成纖維細(xì)胞-心肌細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室器皿中首次將實(shí)驗(yàn)鼠心臟病發(fā)作后留下的疤痕組織變成心肌細(xì)胞。最新研究一旦在人類身上試驗(yàn)成功，將有助于科學(xué)家們研發(fā)出新的心臟衰竭療法。研究小組成功利用誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）

26、人工制成癌干細(xì)胞并在小鼠身上得到驗(yàn)證日本京都大學(xué)研究小組將Oct3/4,Sox2,c-myc,klf4通過逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)入小鼠的成纖維細(xì)胞，把成纖維細(xì)胞變成類似胚胎干細(xì)胞的多能干細(xì)胞，并將其命名為iPS.研究一般方法miRNA表達(dá)低，轉(zhuǎn)染過表達(dá)方法：（1） 載體方法，慢病毒方法（2）miRNA mimics模擬物， 成熟sense，Antisense 為兩條合成，不完全配對(duì)，文獻(xiàn)miR-181b，成熟sense連模擬物為一條鏈，單鏈，可以委托合成，有現(xiàn)成庫，成熟sense，Antisense在/找到，成熟sense就為紅色區(qū)，Antisense則在后面2個(gè)不配對(duì)區(qū)改成配

27、對(duì)，并且鏈用3-benzen-pyridine(BP)修飾。已進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（文獻(xiàn)miR143） 抑制相關(guān)基因表達(dá)siRNA與miRNA藥物不同1、根據(jù)mRNA序列，寫出siRNA,aiRNA序列及可能的修飾方式：GUGGGACUUUGGAAAUACA2 miR-181b序列是: 5-AACAUUCAUUGCUGUCGGUGGGU -3，設(shè)計(jì)出反義藥物序列和miRNA藥物可能的序列和修飾方式結(jié)論miRNAs的發(fā)現(xiàn)無疑是對(duì)現(xiàn)有真核生物基因表達(dá)調(diào)控的補(bǔ)充，其在基因調(diào)控及生物發(fā)育中的作用正在被不斷研究并開發(fā)。miRNAs在體內(nèi)不僅作為功能分子發(fā)揮作用，還參與并決定基因表達(dá)調(diào)控、蛋白質(zhì)翻譯，從而影響細(xì)胞

28、代謝等所有生命進(jìn)程。結(jié)論由miRNA介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)正迅速從基礎(chǔ)研究領(lǐng)域邁進(jìn)臨床應(yīng)用，相信不久的將來將有越來越多的RNA干擾藥物進(jìn)入臨床研究和應(yīng)用。循環(huán)miRNAs作為一種無創(chuàng)性檢測(cè)手段在疾病的早期診斷和預(yù)后中也展示出廣闊的應(yīng)用前景。相信不久的將來將有越來越多的臨床檢測(cè)得到應(yīng)用?；A(chǔ)研究方面的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的論文將越來越多。結(jié)論雖然miRNAs在疾病發(fā)生發(fā)展過程中的作用是“因”還是“果”仍需更多研究來證明，但可以認(rèn)為對(duì)miRNAs的深入研究推動(dòng)了從RNA、DNA和蛋白質(zhì)三大生物分子方面對(duì)疾病進(jìn)行預(yù)測(cè)、診斷和治療的進(jìn)程。結(jié)論但是siRNA、miRNA的RNAi技術(shù)真正能應(yīng)用于日常生活雖然為時(shí)尚早，還需要科學(xué)家們進(jìn)一步廣泛深入細(xì)致持久的研究。盡管如此，我們依然可以預(yù)測(cè)，與其它基因技術(shù)一樣， siRNA 、miRNA的RNAi技術(shù)將在不久的將來會(huì)在基因治療和基因應(yīng)用中發(fā)揮極大的作用，并將給整個(gè)生物理論帶來巨大而深遠(yuǎn)的影響lnc