中藥制劑提取工藝評價指標(biāo)研究概況.doc

1、中藥制劑提取工藝評價指標(biāo)研究概況中藥制劑實驗室 牛曉靜【關(guān)鍵詞】 中藥制劑；提取工藝；評價指標(biāo)中藥制劑一般是在中醫(yī)傳統(tǒng)用藥或民間驗方、 單方的基礎(chǔ)上組方， 依藥物的君、 臣、 佐、使及四氣五味為根據(jù)配方， 因此， 絕大多數(shù)的中藥制劑是復(fù)方， 其處方中的藥味組成少則幾味，多則十幾味，甚至幾十味， 成分構(gòu)成極其復(fù)雜，而復(fù)方中藥的臨床療效往往又體現(xiàn)在復(fù)方配伍的綜合作用和整體效應(yīng)上， 對其療效的物質(zhì)基礎(chǔ)、 化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)、 性質(zhì)等不甚了解，這給復(fù)方中藥的提取和精制帶來很大困難。 復(fù)方中藥的突出特點是： 體積大， 化學(xué)成分含量低，取其綜合療效。所以，欲制成療效高、體積小、濃度大、規(guī)格統(tǒng)一的制劑，必須經(jīng)過

2、提取及精制處理，以去粗取精，去偽存真。如何能夠?qū)⑺幬吨杏行С煞肿畲笙薅鹊靥崛〕鰜恚瑫r盡可能將無效物質(zhì)除去，是中藥現(xiàn)代化的一個重要問題。中藥成分常用的提取方法廣義的中藥提取也稱為分離， 是指從中藥材原料開始， 經(jīng)過一道或多道操作工序， 最終得到所需要的藥物或其半成品的全過程。 包括從原料前處理、 溶質(zhì)分離、 濃縮到得到某一物質(zhì)的整個生產(chǎn)過程， 可以分成很多個工序或單元操作過程。 前面的過程為前處理， 后面的過程為分離精制。 如何保證藥效成分最大化地被提取出來則是擺在中藥研究人員和藥品生產(chǎn)廠家面前的技術(shù)問題 1 。中藥所含成分十分復(fù)雜，提取的方法較多。常用的傳統(tǒng)提取方法有煎煮法、回流法、連續(xù)回流

3、法、浸漬法、滲漉法、水提醇沉法、醇提水沉法、酸堿法、沉降、離心、鹽析法、離子交換法和結(jié)晶法等。近年來，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，新技術(shù)、新設(shè)備的不斷出現(xiàn)，一些新提取方法己開始引入中藥提取的研究和開發(fā)。如超聲波提取、微波提取、超臨界流體萃取、 膜提取、 高速逆流色譜提取、 酶法、 半仿生提取、 破碎提取、 空氣爆破法、大孔樹脂吸附分離和雙水相萃取等2 。這些新工藝的應(yīng)用，與傳統(tǒng)方法相比，具有產(chǎn)率高、純度高、速度快、物耗、能耗少等特點，使得中藥提取既符合傳統(tǒng)的中醫(yī)理論，又有著廣闊研究和應(yīng)用前景。. 提取工藝主要評價指標(biāo)化學(xué)方法在中藥新藥的開發(fā)過程中， 化學(xué)方法是常用的提取工藝評價指標(biāo)選擇方法。 主要有水

4、浸 出物、 有機溶劑浸出物、 大類成分、 指標(biāo)成分等。 選擇的依據(jù)主要是根據(jù)中藥化學(xué)和藥理的研究文獻， 結(jié)合復(fù)方的功能主治， 選擇多個指標(biāo)作為評價指標(biāo)進行綜合評價， 最后獲得最優(yōu) 的提取制備工藝。該方法的優(yōu)點是量化程度高，表述清楚，也易于操作，且耗資較少，目前應(yīng)用較多，多采用正交試驗設(shè)計、均勻設(shè)計、星點設(shè)計- 效應(yīng)響應(yīng)面優(yōu)化法等方法。缺點是有時獲得的提取制備工藝不是最優(yōu)的，而且只能部分代表其療效。劉小花等 3 用 L9(3) 4 優(yōu)選參橘止咳滴丸的最佳提取工藝，以提取物得率、肉桂酸和橙皮昔的含量為指標(biāo)，RP-HPLay定2種指標(biāo)成分的含量，設(shè)置指標(biāo)結(jié)果的權(quán)重，綜合評分后再進行統(tǒng)計分析。 也有學(xué)

5、者通過均勻設(shè)計與正交設(shè)計兩種方法對金蓮花提取工藝進行研究， 考 察不同提取條件下的提取率及樣品中總黃酮的含量， 并用同一標(biāo)準(zhǔn)評價兩種設(shè)計方法。 結(jié)果 正交設(shè)計與均勻設(shè)計試驗所得的結(jié)果相近，結(jié)論基本一致4 。王文娣等5 通過比較正交設(shè)計與星點設(shè)計- 效應(yīng)面法兩種實驗設(shè)計方法， 優(yōu)選淫羊藿提取工藝； 結(jié)論星點設(shè)計- 效應(yīng)面法在該提取工藝研究中優(yōu)于正交實驗設(shè)計法。 鑒于中藥多組分、 多靶點的作用特點， 設(shè)置多指標(biāo)檢測標(biāo)準(zhǔn)已成為優(yōu)化中藥復(fù)方制劑提取工藝的重要手段。 但是， 對多指標(biāo)如何做出一個合理的綜合評價， 確定各個評價指標(biāo)的分析方法則是最終確立提取工藝的關(guān)鍵。目前多用綜合評分法、全概率評分法、一測

6、多評法、層次分析法等對測定指標(biāo)進行分析， 以確定最佳提取工藝， 這些評價分析方法較多個指標(biāo)設(shè)計單指標(biāo)分析的傳統(tǒng)方法更加快捷、全面、實用、科學(xué)。楊興鑫等6 采用正交試驗設(shè)計優(yōu)選益心腦復(fù)方最佳提取工藝條件，以黃甚甲背、三七總皂昔、羥基紅花黃色素A、桅子甘、浸膏得率5項指標(biāo)為評價標(biāo)準(zhǔn)，其權(quán)重采用層次分析法(AHP)進行分析7。石召華等用多指標(biāo)試驗全概率評分法研究兒瀉貼提取工藝，采用全概率公式評分法結(jié)合正交設(shè)計優(yōu)化制備工 藝，結(jié)果工藝合理，穩(wěn)定可行8 。生物學(xué)方法中藥有君臣佐使的組方原則， 起效的可能不止某一種或某幾種成分， 應(yīng)該是多種成分的協(xié)同作用。 因此， 復(fù)方中藥必須作為一個整體加以評價。 化學(xué)

7、方法忽略了藥物間各種成分的層次性與聯(lián)系性， 沒有體現(xiàn)出方劑的整體作用， 也不符合臨床用藥綜合成分作用的特點。 生 物學(xué)方法則體現(xiàn)了整個制劑所含全部成分的綜合作用， 符合中醫(yī)的整體思想， 其結(jié)果與臨床 療效具有直接的相關(guān)性。 合理的生物學(xué)指標(biāo)或藥效學(xué)指標(biāo)可代表藥物主要的功能主治， 重復(fù) 性好， 量效關(guān)系清楚。 其優(yōu)點： (1) 整體制劑所含全部成分的綜合作用； (2) 與臨床作用接近， 對療效更具評價力。近年來， 針對中藥制劑提取工藝采用生物學(xué)方法作為評價指標(biāo)的研究也比較多。 劉瑞連9 以凝血酶時間 (TT) 為指標(biāo)， 考察地龍?zhí)崛∫褐锌鼓镔|(zhì)的活性大小，以紫外分光光度法測其蛋白含量為指標(biāo)， 用

8、 L9(3) 4 正交試驗考察地龍的提取工藝。 說明其活性成分提取與熱有關(guān)，加熱提取能夠使其抗凝活性增強。劉志輝等10采用異丙腎上腺素(ISO) 致大鼠心肌缺血損傷模型， 比較冠心平顆粒水提取和水提醇沉取粗多糖2 種工藝在藥效學(xué)方面的影響。 結(jié)果水提工藝樣品能更好的降低 CK LDH MDAZK平(P0.01),且水提醇沉工藝樣品對心肌間質(zhì)血管充血無明顯改善作用。提示冠心平顆粒中制黃精工藝為水提取，不宜進行醇沉處理。史萬忠等 11 考察中藥補腎益精方水提物和醇提物化學(xué)成分指標(biāo)與藥效的相關(guān)性， 以淫羊藿苷和柚皮苷的含量及干浸膏的得率來評價， 醇提工藝優(yōu)于水提工藝； 而以對模型大鼠的藥效為指標(biāo)，

9、則顯示出水提物延緩骨礦丟失的作用明顯優(yōu)于醇提物的趨勢。 化學(xué)成分指標(biāo)與藥效指標(biāo)顯示出矛盾的結(jié)果。 作為臨床治療藥物， 其生命力在于療效。 在提取工藝和方法的選擇時， 提取物的藥效優(yōu)劣應(yīng)是優(yōu)先考慮的， 對中藥制劑的提取工藝研究應(yīng)結(jié)合藥效實驗進行篩選， 則不僅可以對化學(xué)成分指標(biāo)和藥效進行相關(guān)性考察， 而且可在化學(xué)成分指標(biāo)不能代表藥效時選擇藥效作為評價指標(biāo)，使篩選出的工藝更趨科學(xué)、合理。微生物學(xué)方法對一些清熱解毒或外用消炎殺菌的藥物可用最小抑菌濃度作提取效果的指標(biāo)。 周琴妹 12對選用L9(3) 4 正交表安排試驗， 以大黃素的含量和體外抑菌圈大小為指標(biāo)， 用全概率公式評分法尋求斂瘡液最佳制備工藝。

10、 按最佳工藝條件實驗制備3 批樣品， 其外觀澄明， 大黃素含量高，藥效試驗效果明顯，說明優(yōu)化的工藝合理，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。有效組分綜合評價將化學(xué)方法與生物學(xué)方法結(jié)合起來， 發(fā)揮各自優(yōu)點， 可找出產(chǎn)生復(fù)方功能主治作用的物質(zhì)的主要部分有效組分， 用它作評價指標(biāo)， 更具科學(xué)性和合理性。 優(yōu)點是評價指標(biāo)具有針對性， 既具有化學(xué)方法的優(yōu)點， 也具有藥理學(xué)方法的優(yōu)點； 缺點是遺漏了其他的有效成分。黃義 13 通過實驗以干膏得率、 多個有效成分含量及小鼠耳廓腫脹度為指標(biāo)對白花三地提取工藝進行考察， 試圖得到能夠充分發(fā)揮藥效的提取工藝路線， 并為如何制定合理的評價標(biāo)準(zhǔn)提供新的思路。 單純考察化學(xué)指標(biāo)所得出的實驗結(jié)

11、論存在著相當(dāng)?shù)钠嫘裕?與通過考察藥效學(xué)指標(biāo)所得出的結(jié)論之間常常會不一致。這就為中藥提取工藝的研究提供了一種新的思路， 即在采用化學(xué)指標(biāo)的同時， 更要注重將化學(xué)指標(biāo)與藥效學(xué)指標(biāo)相結(jié)合。 通過對兩種考察指標(biāo)的綜合評價，從而得出更為科學(xué)、更具實用性的研究成果。鄭林等 14 用化學(xué)指標(biāo)結(jié)合藥效學(xué)指標(biāo)評價紫金透骨噴霧劑不同提取工藝的科學(xué)性及合理性，分別采用6種提取工藝制備紫金透骨噴霧劑樣品，用HPLCU定白花丹醍、水楊酸甲酯和 militarine 含量，并觀察6 種工藝樣品的抗急性軟組織損傷作用和抗炎作用。結(jié)果：乙醇低溫提取( 滲漉、 浸漬 ) 樣品的效果優(yōu)于乙醇回流提取和水煎煮提取， 且滲漉提取樣

12、品優(yōu)于浸漬提取。 通過化學(xué)成分指標(biāo)和藥效學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果的綜合分析， 紫金透骨噴霧劑以乙醇滲漉提取工藝的綜合指標(biāo)優(yōu)于其他工藝。中藥指紋圖譜方法中藥指紋圖譜的方法是從中藥復(fù)方整體作用的特點出發(fā)， 用多種化學(xué)成分形成的圖譜特征作為評價指標(biāo)， 代表性的指紋圖譜評價方法有峰面積比值法15 和相似系數(shù)法16-17 ， 后者已開發(fā)形成了試行軟件。 其優(yōu)點是本方法較靈敏地表征了提取工藝參數(shù)波動導(dǎo)致的藥材提取物整體質(zhì)量變化情況， 并可用于指導(dǎo)工藝參數(shù)的調(diào)整， 優(yōu)于傳統(tǒng)的以單一化學(xué)成分含量為指標(biāo)的工藝評價方法18 ， 能更全面地評價提取工藝的優(yōu)劣。 現(xiàn)代中藥有效性研究多采用譜效學(xué)的思路進行。 “中藥譜效學(xué)”通過指

13、紋圖譜與藥物的效應(yīng)進行關(guān)聯(lián)，反映中藥復(fù)方內(nèi)在質(zhì)量及化學(xué)成分與效應(yīng)之間的關(guān)系 19 。江濱 20 以綿茵陳藥材指紋圖譜主峰保留率和保肝的藥效學(xué)評價為指標(biāo)，研究了綿茵陳提取工藝、大孔吸附樹脂精制工藝，在“全譜保留”的基礎(chǔ)上，使精制工藝得膏率降低到 2.5 ，精制后干燥粉中綠原酸含量達13.55 ，有利于“去粗存精” ，提高制劑載藥量；精制前后的小鼠急性肝損傷實驗表明茵陳大孔樹脂精制產(chǎn)物保留了其護肝藥效，且未發(fā)現(xiàn)其急性毒性反應(yīng)。在未全面掌握中藥活性成分的背景下，作為成分群的指紋圖譜控制中藥質(zhì)量是一種進步，將指紋圖譜引入工藝評價指標(biāo)亦是進步， “譜效結(jié)合”亦有助于克服藥效學(xué)指標(biāo)的靈敏性和可靠性的局限。

14、當(dāng)然，這種評價思路還需要經(jīng)過中醫(yī)臨床研究的佐證。3 如何合理選擇指標(biāo)目前常用的評價指標(biāo)一個共有的缺陷就是忽視了中藥復(fù)方病證結(jié)合的特點。 當(dāng)今中醫(yī)臨床的診療模式是辨證與辨病相結(jié)合， 決定了中藥必須是病證結(jié)合的最佳體現(xiàn)， 只有這樣， 才能提高傳統(tǒng)中藥的療效， 克服傳統(tǒng)中藥的缺點，保持傳統(tǒng)中藥的優(yōu)點。 也就是說， 中藥新藥的開發(fā)必須既要考慮治療病的有效成分， 又要考慮治療證的有效成分。 因此如何選擇合適的評價指標(biāo)， 建立一個完整的評價體系， 使提取工藝達到上述目標(biāo)是中藥制劑開發(fā)過程中需要注意的重要問題。在一定的劑量范圍內(nèi)， 中藥中與藥效關(guān)系密切的主要化學(xué)成分的含量越高， 其藥效越強。但由于在提取過程

15、中， 不可避免地會使得其他化學(xué)成分的含量也發(fā)生變化， 包括與藥效不密切，甚至相反的化學(xué)成分，同時，主要化學(xué)成分間也會發(fā)生相互作用，相互影響。結(jié)果并不是主要化學(xué)成分的含量越高，其藥效越強，而是主要化學(xué)成分的含量保持一定的比例關(guān)系， 才能達到療效最強。因此， 要確定主要化學(xué)成分間比例關(guān)系， 一方面用主要化學(xué)成分的含量對提取工藝綜合評價， 同時以湯劑主要化學(xué)成分間的比例為參考進行評價， 建立整套的指紋圖譜體系； 另一方面結(jié)合生物學(xué)指標(biāo)進行綜合評價， 即以藥理作用和藥效的綜合效用設(shè)計與臨床效果相平行的生物測定方法。這樣， 既可選擇合適的提取工藝，也可重新進行提取工藝的優(yōu)化，直至獲得最優(yōu)的工藝， 將中藥

16、復(fù)方的新藥開發(fā)研究與基礎(chǔ)研究緊密結(jié)合起來21 ， 特別是將中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究融于新藥開發(fā)的過程中， 同時也保證了中藥新藥開發(fā)的科研水平， 既能夠體現(xiàn)當(dāng)代中醫(yī)病證結(jié)合的診療模式， 又能提高中藥復(fù)方新藥的治療效果， 從而保持傳統(tǒng)中藥的特點。 因此建立科學(xué)的合理的標(biāo)準(zhǔn)化的中藥提取工藝整體評價體系， 是我國中成藥實現(xiàn)現(xiàn)代化的重要步驟，也是我國中成藥走向世界的前提和保證。參考文獻李軍紅 , 劉淑芝 , 金日顯 . 中藥提取新技術(shù)研究概述 . 中國中醫(yī)藥信息雜志,2008,15(1):93馬玉 哲 , 張 俊 杰 , 李 紅 霞 . 中藥有效成分提取分離技術(shù) 最新進展 . 河北理工大學(xué)學(xué) 報 (

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