血尿分泌物培訓(xùn)課件

1、WORD.58/58血液常規(guī)檢查的基礎(chǔ)知識(shí)一、紅細(xì)胞（RBC）計(jì)數(shù)意義紅細(xì)胞增多見于：（1）血液中紅細(xì)胞絕對(duì)值增多，見于真性紅細(xì)胞增多癥；（2）機(jī)體長(zhǎng)期缺氧，如慢性肺源性心臟病、發(fā)紺性先天性心臟病引起繼發(fā)性紅細(xì)胞增多；（3）因一時(shí)性血漿中水分丟失過多、血液濃縮，如劇烈吐瀉、脫水、燒傷引起相對(duì)性紅細(xì)胞增多。紅細(xì)胞減少見于各種原因引起的貧血，如骨髓造血功能障礙，造血原料缺乏，紅細(xì)胞破壞過多、過早等。二、血紅蛋白（Hb）測(cè)定意義其增減的意義大致與紅細(xì)胞增減相似，但在各種不同類型貧血時(shí)，紅細(xì)胞數(shù)與血紅蛋白量的減低不一定呈平行關(guān)系。如小紅細(xì)胞性貧血時(shí)，血紅蛋白含量比紅細(xì)胞數(shù)減少更為明顯；在大紅細(xì)胞性貧血

2、時(shí)，則紅細(xì)胞減少的程度較血紅蛋白減少更為嚴(yán)重。三、紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查紅細(xì)胞大小異常包括：1.小紅細(xì)胞，直徑小于6m，厚度薄，常見于缺鐵性貧血。2.大紅細(xì)胞，直徑大于10m，體積大，常見于維生素B12或葉酸缺乏引起的巨幼紅細(xì)胞性貧血。3.紅細(xì)胞大小不均，大小相差1倍以上，常見于各種增生性貧血，但不見于再生障礙性貧血。紅細(xì)胞形態(tài)異常包括：1.球形紅細(xì)胞，直徑縮小，厚度增加，常見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、自身免疫性溶血性貧血。2.靶形紅細(xì)胞，呈靶形，主要見于珠蛋白生成障礙性貧血、某些血紅蛋白病、脾切除術(shù)后等3.橢圓形紅細(xì)胞，長(zhǎng)徑增大，橫徑縮小，呈橢圓形，見于遺傳性橢圓形細(xì)胞增多癥，也可見于巨幼紅細(xì)胞性

3、貧血。4.鐮形紅細(xì)胞，如鐮刀形、柳葉狀等，主要見于鐮形紅細(xì)胞性貧血。5.紅細(xì)胞緡線狀形成，呈平行疊串狀排列，見于骨髓瘤、高球蛋白血癥、高纖維蛋白血癥等。紅細(xì)胞染色異常，紅細(xì)胞染色深淺反映著血紅蛋白含量，包括：1.低色素性，紅細(xì)胞含血紅蛋白減少，見于缺鐵性貧血與其他低色素性貧血。2.高色素性，紅細(xì)胞含血紅蛋白較多，多見于巨幼紅細(xì)胞性貧血。3.嗜多色性，是未完全成熟的紅細(xì)胞，呈灰藍(lán)色，體積稍大，見于骨髓造紅細(xì)胞功能旺盛的增生性貧血。紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常包括：1.嗜堿性點(diǎn)彩，見于重金屬（鉛、鉍、銀等）中毒，硝基苯、苯胺等中毒與溶血性貧血、惡性腫瘤等。2.卡波（Cabot）環(huán)，可能是幼紅細(xì)胞核膜的殘余物，見

4、于溶血性貧血、某些增生性貧血。3.何-喬（Howell-Jolly）小體，可能是細(xì)胞核的殘余物，見于巨幼紅細(xì)胞性貧血、溶血性貧血與脾切除術(shù)后。四、白細(xì)胞（WBC）計(jì)數(shù)意義白細(xì)胞增多見于：急性感染：包括化膿菌感染、桿菌感染引起腎孟腎炎、膽囊炎等，病毒感染引起傳染性單核細(xì)胞增多癥、乙型腦炎等，寄生蟲感染引起急性血吸蟲病，螺旋體病引起的鉤端螺旋體病等，重度感染時(shí)可引起白細(xì)胞總數(shù)顯著增高并可出現(xiàn)明顯核左移。嚴(yán)重?zé)齻?、較大手術(shù)后、心肌梗死等引起的組織損傷、壞死。數(shù)量極度增高時(shí)，見于惡性腫瘤、白血病，尤其是慢性白血病。見于急性失血，尤其是臟破裂、宮外孕等引起的出血。見于急性化學(xué)藥物有機(jī)磷中毒，也見于糖尿病

5、酮癥酸中毒、尿毒癥等引起的代性中毒。白細(xì)胞總數(shù)減少見于：革蘭陰性桿菌感染，如傷寒、副傷寒沙門菌，病毒感染，如流感、病毒性肝炎，寄生蟲感染，如瘧疾等。某些血液病，如再生障礙性貧血、粒細(xì)胞缺乏癥、白細(xì)胞不增多型白血病等。自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、免疫抗體導(dǎo)致的白細(xì)胞減少。理化損傷與藥物反應(yīng)，如苯與其衍生物引起的放射線損傷、化學(xué)品中毒，如氯霉素、保泰松、抗癌藥等引起的各種反應(yīng)。其他，如肝硬化、脾功能亢進(jìn)等。五、白細(xì)胞分類（DC）意義中性粒細(xì)胞（N）總數(shù)的增多或減少的臨床意義與白細(xì)胞相似。嗜酸性粒細(xì)胞（E）增多見于：過敏性變態(tài)反應(yīng)，如支氣管哮喘、藥物性皮疹、血管神經(jīng)性水腫、血清病等。寄生蟲病，

6、如腸道寄生蟲鉤蟲、蛔蟲等。某些皮膚病，如濕疹、天皰瘡、剝脫性皮炎等。急性傳染病恢復(fù)時(shí)，一般在常起病時(shí)細(xì)胞數(shù)減少，當(dāng)開始恢復(fù)時(shí)可呈現(xiàn)增多，提示病情好轉(zhuǎn)。某些血液病與惡性腫瘤，如慢性粒細(xì)胞性白血病、淋巴瘤、肺癌等。嗜酸性粒細(xì)胞減少見于：當(dāng)腎上皮質(zhì)功能亢進(jìn)或應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素治療時(shí)。急性發(fā)熱性傳染病，尤其在傷寒、副傷寒、嚴(yán)重?zé)齻?、大手術(shù)后。嗜堿性粒細(xì)胞（B）增多見于：某些血液病如慢性粒細(xì)胞性白血病、紅細(xì)胞增多癥；脾切除術(shù)后、疫苗預(yù)防注射后等。嗜堿性粒細(xì)胞減少一般無臨床意義。1.淋巴細(xì)胞（L）增多見于：初生嬰兒、兒童的生理性增多；某些血液病如再生障礙性貧血、粒細(xì)胞減少癥可引起淋巴細(xì)胞相對(duì)性增多；某些感

7、染，如病毒感染性疾病、細(xì)菌性感染如百日咳、慢性感染如結(jié)核病的恢復(fù)期；急、慢性淋巴細(xì)胞性白血病。2.淋巴細(xì)胞減少大多是相對(duì)性減少，或見于長(zhǎng)期接觸放射線或應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素治療后。單核細(xì)胞（M）增多見于：某些感染如結(jié)核病活動(dòng)期，亞急性細(xì)菌性心膜炎、瘧疾等；某些血液病，如淋巴瘤、高雪病、單核細(xì)胞性白血病且可出現(xiàn)原、幼單核細(xì)胞。單核細(xì)胞減少一般無特殊臨床意義。六、白細(xì)胞的常見形態(tài)變化中性粒細(xì)胞的核象變化包括：核左移，常見于感染，尤以急性化膿性感染最常見，其他如急性中毒、急性溶血時(shí)也可出現(xiàn)。核右移，主要見于營(yíng)養(yǎng)性巨幼紅細(xì)胞性貧血、使用抗代藥物治療后、感染恢復(fù)期等。中性粒細(xì)胞的形態(tài)異常包括：中毒顆粒：常見

8、于嚴(yán)重的化膿性感染、大面積燒傷等?？张葑冃裕撼Ｒ娪趪?yán)重感染，特別是敗血癥，因粒細(xì)胞受損發(fā)生脂肪變性所致。核變性，臨床意義同空泡變性。棒狀小體，僅見于白血病細(xì)胞中，但在急性淋巴細(xì)胞白血病則不出現(xiàn)棒狀小體。淋巴細(xì)胞形態(tài)變異根據(jù)形態(tài)特點(diǎn)分為3型：型（空泡型）、型（不規(guī)則型）、型（幼稚型）。除以上3型外，尚可有呈漿細(xì)胞樣或組織細(xì)胞樣的異形淋巴細(xì)胞，見于：病毒感染性疾??；某些細(xì)菌性感染，原蟲、螺旋體感染；某些免疫性疾病、藥物過敏等。七、血小板計(jì)數(shù)意義血小板減少見于：血小板生成減少，如再生障礙性貧血、急性白血病、骨髓纖維化、放射線損傷；血小板破壞過多，如免疫性血小板減少性紫癜、過敏性藥物損傷；血小板消耗過

9、多，如彌散性血管凝血、血栓性血小板減少性紫癜；血小板分布異常，如脾腫大、輸入大量血漿血液受稀釋等。血小板增多見于：急性大失血和溶血后可呈反應(yīng)性增多；骨髓增生病，如原發(fā)性血小板增多癥、慢性粒細(xì)胞性白血病、真性紅細(xì)胞增多癥等。血小板學(xué)形態(tài)檢查正常血小板呈圓形或橢圓形，直徑24m，含嗜天青顆粒。功能正常的血小板多數(shù)個(gè)成簇聚集，若呈單個(gè)分散分布提示血小板功能不良。幼稚血小板體積大，胞質(zhì)藍(lán)色加深。當(dāng)血小板異常增生時(shí)，呈大小不等，形態(tài)異常。血常規(guī)檢驗(yàn)中的注意事項(xiàng)血細(xì)胞檢驗(yàn)是指對(duì)血液中白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血小板（PLT）、血紅蛋白（HGB）與相關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)數(shù)檢測(cè)分析，也稱血常規(guī)檢驗(yàn)。血常規(guī)檢驗(yàn)

10、不僅是診斷各種血液病的主要依據(jù)，而且對(duì)其它系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別也可提供許多重要信息，是臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中最常用、最重要的基本容之一。血常規(guī)檢驗(yàn)的最原始的手段是通過顯微鏡人工鏡檢，隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，高科學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，血液細(xì)胞分析儀已成為取代鏡檢進(jìn)行血常規(guī)分析的重要手段，尤其是帶分類的血液分析儀。無論是鏡檢、還是使用血液分析儀，要獲得血常規(guī)檢驗(yàn)的穩(wěn)定可靠、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，防止臨床診療人出錯(cuò)誤的判斷，實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)要充分考慮影響血常規(guī)檢驗(yàn)中的多種影響因素，并嚴(yán)格加以控制：一標(biāo)本的采集為了取得準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果，必須取得高質(zhì)量的標(biāo)本。高質(zhì)量的標(biāo)本是高質(zhì)量檢驗(yàn)的第一步。保證血液標(biāo)本中各項(xiàng)細(xì)胞的完整形態(tài)是作為血常

11、規(guī)檢驗(yàn)用的高質(zhì)量的標(biāo)本的最基本的要求。血液細(xì)胞檢驗(yàn)標(biāo)本的制備分為采集和抗凝2個(gè)步驟。1標(biāo)本的采集按采血部位的不同，取得血常規(guī)檢驗(yàn)標(biāo)本，最常用的途徑是靜脈采血和末梢毛細(xì)血管采血。各類文獻(xiàn)均表明，靜脈血血樣是最可靠的標(biāo)本，手指血是末梢毛細(xì)血管血樣中與靜脈血差異最小且較為穩(wěn)定的血樣。有研究表明，與靜脈血相比，手指血的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性仍然較差：白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯高（+8%）而血小板計(jì)數(shù)明顯低（-9%）。因此，絕大多數(shù)專家建議：血常規(guī)檢驗(yàn)特別是應(yīng)用血液分析儀時(shí)，應(yīng)使用靜脈血。2標(biāo)本的抗凝用于血常規(guī)檢驗(yàn)的血樣必須經(jīng)抗凝劑抗凝處理，在目前的眾多抗凝劑中，EDTA鹽（EDTA-Na2,EDTA-K2,EDTA-K

12、3）是對(duì)白細(xì)胞形態(tài)和血小板影響相對(duì)較小的抗凝劑，最適合用于血常規(guī)檢驗(yàn)。除采血因素的影響（生理性因素、采血部位等）外，多數(shù)情況下，血樣的質(zhì)量取決于血液和抗凝劑的比例。血液比例過高時(shí)，由于抗凝劑相對(duì)不足，血漿中出現(xiàn)微凝血塊的可能性增加，在用于血細(xì)胞分析儀時(shí)，微凝血塊可能阻塞儀器，同時(shí)影響一些檢驗(yàn)指標(biāo)。血液比例過低，抗凝劑相對(duì)過剩，對(duì)檢驗(yàn)指標(biāo)會(huì)造成嚴(yán)重影響。血液經(jīng)EDTA抗凝后，白細(xì)胞的形態(tài)會(huì)發(fā)生改變，這種改變和時(shí)間與EDTA濃度有關(guān)。EDTA的最佳濃度（與血液比）為1.5mg/ml,如果血樣少，EDTA的濃度達(dá)到2.5mg/ml，中性粒細(xì)胞腫脹、分葉消失，血小板腫脹、崩解、產(chǎn)生正常血小板大小的碎片

13、，這些改變都會(huì)使血常規(guī)檢驗(yàn)和血細(xì)胞計(jì)數(shù)得出錯(cuò)誤結(jié)果。這一點(diǎn)在用自動(dòng)血細(xì)胞分析儀時(shí)尤為重要。靜脈血和末梢血均可經(jīng)抗凝劑抗凝成全血標(biāo)本（標(biāo)本中不含稀釋液，或?qū)?biāo)本造成的稀釋的影響極?。?，顯而易見，末梢血抗凝標(biāo)本要達(dá)到合適的血液和抗凝劑的比例是非常困難的。因此，多數(shù)專家建議，在制備全血比例是非常困難的。因此，多數(shù)專家建議，在制備全血標(biāo)本時(shí)，應(yīng)使用定量的含EDTA鹽的真空采血管采集靜脈血。無論鏡檢，或是使用血液細(xì)胞分析儀，由于絕大多數(shù)的對(duì)標(biāo)本稀釋的稀釋液中含有抗凝劑，在一定量的稀釋液中可直接加入微量靜脈血或末梢血液（10-40l）即可制備成通常所說的預(yù)稀釋標(biāo)本。多數(shù)情況下，預(yù)稀釋標(biāo)本的制備適用于末梢血

14、的血樣。二標(biāo)本的稀釋血液是由血細(xì)胞和血漿兩部分組成的紅色粘稠混懸液。在進(jìn)行血細(xì)胞檢驗(yàn)計(jì)數(shù)時(shí)，直接用血液計(jì)數(shù)是困難的，無論是鏡檢還是用血細(xì)胞分析儀，血液均需合適準(zhǔn)確的稀釋后才能進(jìn)行血細(xì)胞的檢驗(yàn)計(jì)數(shù)?；谘?xì)胞分析儀的基本原理，在血細(xì)胞分析儀的設(shè)計(jì)應(yīng)用中，稀釋倍數(shù)和計(jì)數(shù)容量是最重要的設(shè)計(jì)指標(biāo)之一。自50年代初，美國(guó)庫爾特先生研制了電阻法（小孔原理）血細(xì)胞分析儀以來，血細(xì)胞的稀釋液為介質(zhì)的流動(dòng)的形式通過傳感器測(cè)量計(jì)數(shù)（如圖-1），血細(xì)胞通過傳感器時(shí)一定需要排隊(duì)通過，否則可能就會(huì)造成重合損失（如圖-2）。實(shí)際應(yīng)用時(shí)，是將血液稀釋于稀釋液中形成稀釋標(biāo)本（稀釋比為1：N），以流動(dòng)檢測(cè)的方式測(cè)出一定量（V）

15、的稀釋標(biāo)本的血細(xì)胞數(shù)（T），經(jīng)換算后得出血液中的細(xì)胞濃度（L）：L-TN/V。由此可見，準(zhǔn)確合理的稀釋倍數(shù)（在用于儀器時(shí)，RBC、PLT的稀釋倍數(shù)一般為1：10000至1：3000；WBC、HGB的稀釋倍數(shù)一般為1：250左右）和準(zhǔn)確、穩(wěn)定的測(cè)量容量是血細(xì)胞檢測(cè)的又一重要基礎(chǔ)。稀釋倍數(shù)過低，會(huì)形成細(xì)胞排隊(duì)通過傳感器的重合缺損；稀釋倍數(shù)過大，則會(huì)造成一定測(cè)量容量血細(xì)胞的數(shù)量過少，這都會(huì)嚴(yán)重影響血液細(xì)胞檢驗(yàn)的測(cè)量精度。三標(biāo)本的儲(chǔ)存如前文所述，抗凝劑因時(shí)間和濃度的不同，會(huì)造成對(duì)血細(xì)胞形態(tài)的影響。有研究表明，用EDTA抗凝靜脈血標(biāo)本，在標(biāo)本收集后的5分鐘或30分鐘后，8小時(shí)（室溫）檢測(cè)，可以得到最佳的

16、檢測(cè)結(jié)果。如果不需要血小板和白細(xì)胞分類的準(zhǔn)確數(shù)據(jù)，則標(biāo)本可以在2-8的條件下存入至24小時(shí)。預(yù)稀釋標(biāo)本一般需要在標(biāo)本制備后10分鐘予以測(cè)量；如果稀釋液中添加細(xì)胞穩(wěn)定劑，預(yù)稀釋標(biāo)本的存放時(shí)間也不可超過4小時(shí)?？傊绊懷Ｒ?guī)檢驗(yàn)結(jié)果的因素很多，要想取得準(zhǔn)確的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，就要在實(shí)驗(yàn)的每一個(gè)步驟中都嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。血液標(biāo)本的采集與運(yùn)送是保證結(jié)果的重要環(huán)節(jié)血液標(biāo)本的采集與運(yùn)送是保證結(jié)果的重要環(huán)節(jié)，正確的血液常規(guī)標(biāo)本的采集、接收與保存，使標(biāo)本中的待測(cè)成分不受影響，保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。圍適用于血液白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板、紅細(xì)胞比積、紅細(xì)胞體積分布寬度、平均血紅蛋白含量、平均血紅蛋白濃度、平

17、均紅細(xì)胞體積、血小板體積分布寬度、血小板壓積、白細(xì)胞分類、嗜酸細(xì)胞計(jì)數(shù)。采血時(shí)凡位于體表的淺靜脈均可作為采血部位，通常采用肘部靜脈，肘部靜脈不明顯時(shí)，可用手背靜脈或踝靜脈。幼兒可于頸外靜脈采血。采血處應(yīng)避免有皮膚紅腫、潰瘍等現(xiàn)象。采血時(shí)如病人檢測(cè)項(xiàng)目多，應(yīng)先采常規(guī)血，防止血小板發(fā)生聚集。止血帶壓迫時(shí)間不能過長(zhǎng)，最好不超過0.5 min，以避免瘀血和血液濃縮（有試驗(yàn)證明，壓迫時(shí)間過長(zhǎng)，可引起纖溶活性增強(qiáng)，血小板釋放與某些因子活性增強(qiáng)，影響某些實(shí)驗(yàn)結(jié)果）。最好采用封閉式真空采血器，既有利于標(biāo)本的收集運(yùn)送和保存，又便于防止血液交叉感染。抽血時(shí)避免產(chǎn)生大量泡沫，否則可能導(dǎo)致溶血。溶血標(biāo)本會(huì)造成紅細(xì)胞計(jì)

18、數(shù)降低，紅細(xì)胞比積降低。血液抽出后立即輕輕搖動(dòng)，使血液和抗凝劑混勻，以防血液凝固。血液檢查的標(biāo)本量與抗凝劑比例要合適。血液比例過高時(shí)，血漿中容易出現(xiàn)微凝血塊，可能阻塞血細(xì)胞分析儀，同時(shí)影響一些檢驗(yàn)結(jié)果。血液比例過低，抗凝劑相對(duì)過剩，會(huì)引起血細(xì)胞形態(tài)和體積的一些改變，這些改變會(huì)使血常規(guī)檢驗(yàn)得出錯(cuò)誤結(jié)果。血液標(biāo)本的保存與運(yùn)送。血常規(guī)血液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，如不能與時(shí)送檢或分析，必須采取保存措施，應(yīng)在48低溫冰箱冷藏，但低溫保存不要超過4 h，保存條件非常重要，不適當(dāng)保存直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。標(biāo)本應(yīng)由檢驗(yàn)人員或臨床醫(yī)護(hù)人員采集，住院病人標(biāo)本應(yīng)有明確標(biāo)記，與醫(yī)師申請(qǐng)單容相符。標(biāo)本運(yùn)送要做到專人專送。血涂

19、片的制備將血標(biāo)本均勻地涂抹在清潔干燥的載玻片上，經(jīng)染色后在顯微鏡下檢查，這是血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的基本方法，臨床應(yīng)用很廣，特別是對(duì)各種血液病的形態(tài)學(xué)診斷很有價(jià)值。但是，如果血徐片制備不良，染色不佳，常使血細(xì)胞的形態(tài)學(xué)鑒別和診斷發(fā)生困難，甚至導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論。如血膜過厚，細(xì)胞重疊縮??；血膜太薄，白細(xì)胞多集中于邊緣。因此，制備厚薄適宜、分布均勻的血涂片是血液學(xué)檢驗(yàn)的基本技術(shù)之一。一、載玻片的清潔新載玻片上常有游離堿質(zhì)，必須用約lmolL HCI浸泡24h后，再用清水徹底沖洗，干燥備用。用過的載玻片可放入含適量肥皂或合成洗滌劑的清水中煮沸20min，再用熱水將肥皂和血膜洗凈，用清水反復(fù)沖洗，干燥備用。如急

20、用載玻片，可將其置0、9乙醇中浸泡lh，用蒸餾水洗凈后，擦干或烘干備用。使用載玻片時(shí)，只能手持玻片邊緣，切勿用手觸與玻片表面，以保持玻片清潔、干燥、中性、無油膩。二、制作血涂片的標(biāo)本血涂片既可由非抗凝的靜脈血和毛細(xì)血管血制備，也可由EDTA抗凝血制備。EDTA抗凝血中，鈣離子被螫合后，能阻止血小板聚集，推片時(shí)血小板均勻平鋪，顯微鏡下易于對(duì)血小板進(jìn)行觀察評(píng)價(jià)。但有時(shí)可觀察到因EDTA引起的紅細(xì)胞皺縮與白細(xì)胞叢集現(xiàn)象。但隨著血液分析儀的逐步普與，血標(biāo)本多為EDTA抗凝血，除作全血細(xì)細(xì)胞計(jì)數(shù)與多參數(shù)分析外，制備血涂片也非常方便，雖有上述弊端，但顯微鏡下易于發(fā)現(xiàn)。三、血涂片的制備血涂片的制備方法很多，

21、如手工推片法、自動(dòng)推片法、載（蓋）玻片壓拉法、旋轉(zhuǎn)涂片法、棕黃層（buffycoat）涂片法與厚血膜涂片法等，現(xiàn)介紹如下。1、手工推片法取血標(biāo)本一滴置載玻片的一端，以邊緣平滑的推片一端，從血滴前沿方向接觸血液，使血液沿推片散開，推片與載玻片保持2530o的平面夾角，平穩(wěn)地將血向前推動(dòng)，血液即在載玻片上形成一薄層血膜。將制成的血膜在空氣中揮動(dòng)，使迅速干燥，以免血細(xì)胞皺縮。一良好的涂片，要求厚薄適宜，頭體尾分明，邊緣整齊，兩側(cè)應(yīng)留有空隙。玻片的一端應(yīng)留有貼標(biāo)簽的地方。涂片的好壞與血滴大小、推片與載片之間角度、推片時(shí)的速度有關(guān)。血滴大、角度大、速度快，則血膜厚；反之則血膜薄。血膜分布不勻，主要是推片

22、邊緣不齊、用力不勻或載玻片不清潔所致。2、載玻片壓拉法取兩貼有標(biāo)簽的載玻片備用，將血液滴于一載玻片的近中央處，立即將另一載玻片于之貼合，四角對(duì)齊，標(biāo)簽一端一個(gè)，使貼合后的玻片間留下如標(biāo)簽一樣厚的間距。先將血滴沿縱向輕壓展開，再將兩玻片橫向均勻拉開，得到兩血膜。此法最適用于血細(xì)胞的活體染色，預(yù)先將染料滴加在玻片上，干燥后備用。涂制時(shí)先將血液與染料混染一段時(shí)間，再按上述方法制成血涂片，顯微鏡下檢查，如網(wǎng)織紅細(xì)胞的檢驗(yàn)。3、旋轉(zhuǎn)器涂片法旋轉(zhuǎn)涂片器的基本結(jié)構(gòu)是：在與電動(dòng)機(jī)轉(zhuǎn)軸垂直的方向裝一水平轉(zhuǎn)盤，正中夾置載玻片。徐制時(shí)將血標(biāo)本滴加在載玻片的中央，開動(dòng)旋轉(zhuǎn)涂片機(jī)，在規(guī)定的時(shí)間即可制備一良好的血涂片。對(duì)

23、該儀器的要求應(yīng)具有低慣性高轉(zhuǎn)矩，開動(dòng)時(shí)能立即加速（5000rmin），關(guān)機(jī)時(shí)能迅速停止（O、25s）。使用這種儀器涂片，白細(xì)胞與紅細(xì)胞能均勻分布在玻片上，且形態(tài)保持完好。4、棕黃層涂片法為了獲得較多的有核細(xì)胞，使用離心的方法，將EDTA抗凝血作分層離心（RCF2260g，5min），取紅細(xì)胞層上的棕黃層（有核細(xì)胞和血小板集中層，）作標(biāo)本，用手工推制成涂片供檢查用。5、厚血膜涂片法從指尖或耳垂取血1滴（約20ul）于載玻片中央，用推片的一角將血由向外旋轉(zhuǎn)涂布，制成厚薄均勻、直徑約1、5cm的圓形血膜，自然干燥后，滴加數(shù)滴蒸餾水，使紅細(xì)胞溶解，脫去血紅蛋白。傾去水后血膜呈灰白色，干后染色鏡檢。厚血

24、膜片因取血量多，待檢成分較集中，因此特別適合于瘧原蟲、絲蟲的微絲蚴等的檢查。血細(xì)胞常用的染色方法細(xì)胞涂片，在用普通光學(xué)顯微鏡觀察之前需要固定和染色。固定是將細(xì)胞蛋白質(zhì)和多糖等成分迅速交聯(lián)凝固，以保持其原有結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化。染色的目的是使細(xì)胞的主要結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、細(xì)胞器等染上不同的顏色，便于顯微鏡下觀察。各種細(xì)胞涂片，常用的染色方法有瑞氏（Wright）、姬姆薩（Giemsa）、巴氏（PaPanicolaou）和木素一伊紅比emat0Xylin eosin，HE）染色。一、染料與染色染料（dyes）是一種具有顏色的有機(jī)化合物，最早用于織物的著色。隨著生物醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，顯微鏡技術(shù)的出現(xiàn)和逐

25、步完善，科學(xué)家們用染料將生物組織細(xì)胞和病原體著色，以利在顯微鏡下觀察各種結(jié)構(gòu)，這種染料稱為生物學(xué)染色劑（biology stains，BS），生物染色劑的發(fā)現(xiàn)和利用促進(jìn)了醫(yī)學(xué)生物學(xué)的進(jìn)一步發(fā)展。（一）細(xì)胞學(xué)的基本染料染料可分為兩大類，即天然染料和人工合成染料。生物染色劑多屬于后者。各種生物學(xué)染色劑都具有產(chǎn)生顏色和與被染組織親合兩種性質(zhì)。這兩種性質(zhì)主要由兩種特殊基團(tuán)即發(fā)色基團(tuán)（chromophoro）和助色基團(tuán)（auxochrome）所產(chǎn)生。所謂發(fā)色基團(tuán)，是染料產(chǎn)生顏色標(biāo)志的未飽和基團(tuán)。不同的有機(jī)化合物可以吸收不同波長(zhǎng)的光，如吸收可見光區(qū)以外的光，這些物質(zhì)是無色的；如吸收可見光區(qū)某些波長(zhǎng)的光，這

26、些物質(zhì)是有色的，其肉眼可見的顏色為被吸收光顏色的互補(bǔ)色。一般飽和芳香族化合物很少有可見光區(qū)的吸收帶，因而無顏色可見。相反，如苯的衍生物則具有此吸收帶而呈現(xiàn)顏色。這些化合物顯示的吸收帶與不穩(wěn)定價(jià)鍵（如鍵）有關(guān)。對(duì)苯二酚是無色的，但氧化失去兩個(gè)氫原子時(shí)變?yōu)榫唿S色的對(duì)醌式結(jié)構(gòu)，這種使有機(jī)化合物在可見光區(qū)產(chǎn)生光吸收的基團(tuán)稱為發(fā)色基團(tuán)，常見的發(fā)色基團(tuán)有烯基、炔基、羰基、偶氮基、亞硝基等。助色基團(tuán)是一種能使化合物發(fā)生電離作用的輔助原子團(tuán)，能與發(fā)色基團(tuán)構(gòu)成更完整的共軛體系，使分子激發(fā)能進(jìn)一步降低，染料的色澤加深并使其與被染組織更具親合力，染料的助色基團(tuán)是使染料成為鹽類的部分，助色基團(tuán)的性質(zhì)決定染料在水溶液中

27、的荷電性，常見的助色基團(tuán)有羥基、竣基、氨基等。根據(jù)助色基團(tuán)的性質(zhì)，將生物學(xué)染色劑分成堿性染料和酸性染料兩大類，即能接受質(zhì)子者為堿性染料，能釋放質(zhì)子者為酸性染料。1、堿性染料（basic dyes）屬苯胺類藍(lán)色染料，如噻嗪（thiazins）系列，包括亞甲藍(lán)（methylene blue）、天青A（azureA）、天青B（azure B）、天青C（azure C）和硫堇（thionine），它們的區(qū)別在于結(jié)合甲基的數(shù)量。以天青B為例，它含有兩個(gè)發(fā)色基團(tuán)，一個(gè)次氨基（N一）和一個(gè)鄰醌式基團(tuán)。助色基團(tuán)為氨基（一NH2），結(jié)合一個(gè)質(zhì)子后荷正電，亦稱陽離子染料。因此，這些染料與細(xì)胞的酸性成分，如DNA、

28、RNA、特異的中性顆?；|(zhì)、某些胞漿蛋白等結(jié)合，主要是染細(xì)胞核的染料。還有一個(gè)很重要染核染料是木（hematoxyline），屬媒染料（mordant dyes），需媒染劑（如Al3+）參與才能使細(xì)胞核著色。2、酸性染料（acid dyes）細(xì)胞學(xué)較重要的酸性染料有兩大類，即熒烷一氧雜蒽染料（horanexanthene dyes）和偶氮染料（azodyes）。前者是一類以氧雜蒽和醌式苯環(huán)作為發(fā)色基團(tuán)，以羧基（COOH）為助色基團(tuán)的染料，因?yàn)轸然芴峁┮粋€(gè)質(zhì)子，亦稱“陰離子染料”。這類染料的代表是伊紅Y（eosin Y，俗稱黃色伊紅）和伊紅B（eosin B，俗稱藍(lán)色伊紅）。這兩種染料特別適于

29、與噻嗪類染料（亞甲藍(lán)，天青B等）作對(duì)比染色，形成紅藍(lán)分明、色澤艷麗的結(jié)果，因?yàn)橐良t具較強(qiáng)的擴(kuò)散吸附染色特性。酸性偶氮類染料有橙黃G（orange G）、剛果紅（congo red）、亮藏花精（brilliant crocein）等。由于酸性染料是陰離子型染料，因此它們與細(xì)胞中的堿性成分結(jié)合并染色，如血紅蛋白、嗜酸性顆粒成分與胞漿中的一些蛋白質(zhì)。除上述酸性和堿性染料外，有的還將在同一條件下既具陰離子型又有陽離子型的染色劑稱復(fù)合染料，如瑞氏染色劑、姬姆薩染色劑等。（二）染色原理細(xì)胞著色的原理至今雖無滿意的解釋，但多數(shù)學(xué)者認(rèn)為是物理作用和化學(xué)作用綜合的結(jié)果。1、物理作用包括毛細(xì)管現(xiàn)象和滲透、吸收、吸

30、附作用等。通過這些因素，染料的色素粒子就能順利地進(jìn)入組織、細(xì)胞并與其牢固結(jié)合而著色。瑞氏染色法Wrfeht和Giemsa都于1902年報(bào)告了各自的新的血液學(xué)染色劑，其主要特點(diǎn)是在制備多色性亞甲藍(lán)（主要指天青B）方面做了改進(jìn)，使血細(xì)胞和瘧原蟲著色較好，操作簡(jiǎn)便。上述染色法均是含伊紅和亞甲基藍(lán)衍生物的復(fù)合染料。在臨床檢驗(yàn)工作中，瑞氏染色法常用于血液、其他體液、分泌物和排泄物涂片中各種細(xì)胞的染色，有利于在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)與對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類檢查。染色原理瑞氏染色分兩相進(jìn)行，第一相是酸性染料伊紅與細(xì)胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒等結(jié)合；堿性染料天青B與細(xì)胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)（chromati

31、n）、特異中性顆粒、血小板與富含核蛋白的胞質(zhì)結(jié)合。第二相是天青B和伊紅在適宜條件下形成紫色的天青B一伊紅復(fù)合物（azure Beosin complex），這種復(fù)合物是形成RomanowskyGiemsa效應(yīng)的基礎(chǔ)。RomanowskyGiemsa效應(yīng)包括：白細(xì)胞核染色質(zhì)染成紫色，瘧原蟲的染色質(zhì)染成紅色；中性粒細(xì)胞的顆粒與血小板顆粒區(qū)染成紫色；產(chǎn)生本效應(yīng)必須有兩種染料參與，一種是天青B，另一種是伊紅。Wittekind（1985）指出，天青B與DNA分子中的磷酸基結(jié)合，而伊紅既與DNA分子中的陽離子部位結(jié)合，又與天青B結(jié)合，與天青B的結(jié)合力來源于電子供一受體的電子轉(zhuǎn)移力，天青B的甲氨基（NHC

32、Hs）與伊紅分子中的叛基（COOH）間形成氫鍵。因此，天青B是噻嗪類染料中能與伊紅形成復(fù)合物的最佳選擇，因?yàn)閾碛兴膫€(gè)甲基側(cè)鏈的亞甲藍(lán)不能以氫鍵與伊紅結(jié)合。甲醇除作為染料的溶劑，能將瑞氏染料解離成帶正電荷的天青B和帶負(fù)電荷伊紅外，因其具有脫水力，還可將細(xì)胞固定為一定形態(tài)，并使蛋白沉淀為顆粒狀、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，增加細(xì)胞與染料的接觸表面，增強(qiáng)染色效果。細(xì)胞中的各種有機(jī)物質(zhì)（特別是蛋白質(zhì)）、染料等對(duì)環(huán)境的州值非常敏感。如環(huán)境偏酸，氫離子增多，降低對(duì)堿性染料的親和力；增強(qiáng)伊紅著色，出現(xiàn)異常紅染；相反，則可出現(xiàn)異常藍(lán)染。最佳環(huán)境應(yīng)維持在PH值6 46、8。因此，必須使用緩沖溶液。試劑1、Wright染液瑞氏染粉

33、0.1g；甲醇60.0ml。將瑞氏染料放入清潔干燥乳缽里，加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，將已溶解的染料倒入棕色試劑瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料溶完，甲醇全部用完為止?；?qū)⑷鹗先痉酆图状贾苯又糜谧厣恐?，加碎玻璃適量，立即用力振蕩smin，置室溫中，連續(xù)3天，每天振搖23次，促其溶解。配好后放室溫，一周后即可使用。新配染液效果差，放置時(shí)間越長(zhǎng)天青B越多，染色效果越好。久置應(yīng)密封，以免甲醇揮發(fā)或氧化成甲酸，甲醇需用AR級(jí)。上述量染液中也可加中性甘油3ml，除可防止染色中甲醇過早揮發(fā)外，并可使細(xì)胞著色清晰。1、磷酸鹽緩沖液（PBS，pH6.46.8）磷酸二氫鉀（無水）0.3g；磷酸氫二

34、鈉（無水）0.2g；蒸餾水加至1000ml。配好后用磷酸鹽溶液校正pH，塞緊瓶口備用。染色方法（1）用蠟筆在血膜兩頭劃線，然后將血片平放在染色架上；（2）加瑞氏染液數(shù)滴，覆蓋整個(gè)血膜，固定細(xì)胞約lmin；（3）滴加等量或稍多的緩沖液，與染液充分混勻，染色510min；（4）用清水沖去染液，待干后鏡檢。染色結(jié)果在正常情況下，血膜外觀染成淡紫紅色。顯微鏡下，紅細(xì)胞呈粉紅色，在厚薄均勻處，略有碟狀感；白細(xì)胞漿中顆粒清楚，并顯示出各種細(xì)胞特有的色彩。細(xì)胞核染紫紅色，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚。染色偏酸，則紅細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞顆粒偏紅，白細(xì)胞核呈淡藍(lán)色或不著色。染色偏堿，則所有細(xì)胞呈灰藍(lán)色，顆粒深暗。嗜酸性顆?？?/p>

35、染成暗褐色，甚至紫黑或藍(lán)色。中性顆粒偏粗、偏堿，染成紫黑色，血膜厚的部位呈綠色。注意事項(xiàng)1、未干透血膜的不能立即染色，否則染色時(shí)易脫落。2、染色時(shí)間，與染液濃度、室溫與細(xì)胞多少有關(guān)。梁液淡、室溫低、細(xì)胞多，則染色時(shí)間長(zhǎng)；反之則可減少染色時(shí)間。染液濃淡與染色時(shí)間長(zhǎng)短要摸索，特別是更換染液時(shí)更應(yīng)如此。3、染液不能過少，以防蒸發(fā)沉淀，一旦染液沉淀在血膜上，則不易沖掉。4、沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖去，以防染料沉著在血膜上。沖洗染料時(shí)間不能過長(zhǎng)，以防脫色。沖洗完的血片應(yīng)立放于架上，防止剩余水分浸泡脫色。5、如血膜上有染料顆粒沉積，可用甲醇溶解，但需立即用水沖掉甲醇，以免脫色。6、染色過談，可以復(fù)

36、染，復(fù)架時(shí)應(yīng)先加緩沖液，創(chuàng)造良好染色環(huán)境，而后加染液，或加染液與緩沖液的混合液，不可先加染液。7、染色過深可用水沖洗或浸泡一定時(shí)間，也可用甲醇脫色。8、染色偏酸或偏堿時(shí)，均應(yīng)更換緩沖液再重染。白細(xì)胞計(jì)數(shù)的誤差因素分析技術(shù)誤差：器材、標(biāo)本要求、加蓋玻片影響、沖池影響、計(jì)數(shù)原則（記上不計(jì)下，記左不記右）、計(jì)數(shù)室細(xì)胞分布要均勻、有核紅細(xì)胞影響。固有誤差：主要指記數(shù)域誤差。還包括計(jì)數(shù)池誤差和吸管誤差。生理狀態(tài)影響：運(yùn)動(dòng)、勞動(dòng)、冷水浴、酷熱、嚴(yán)寒等出現(xiàn)一過性白細(xì)胞增高。1.技術(shù)誤差,可通過規(guī)、熟練的操作,儀器的校正、試劑的標(biāo)準(zhǔn)化和操作人員責(zé)任心的增強(qiáng)而減小或消除(器材,標(biāo)本要求,加蓋玻片影響,充池影響,

37、計(jì)數(shù)原則,細(xì)胞分布要均勻,有核紅細(xì)胞影響);2.固有誤差,主要指計(jì)數(shù)域誤差,即由于每次充池后血細(xì)胞在計(jì)數(shù)室分布不可能完全一樣所造成的誤差,屬于偶然誤差.3.生理狀態(tài)影響:運(yùn)動(dòng),勞動(dòng)冷熱水浴,酷熱,嚴(yán)寒等常出現(xiàn)一過性白細(xì)胞增高;一日之白細(xì)胞數(shù)最高與最低可差1倍;吸煙者比非吸煙者高30%.血細(xì)胞分析儀的最新發(fā)展血細(xì)胞分析儀的發(fā)展已有50年歷史了，國(guó)醫(yī)院應(yīng)用血細(xì)胞分析儀的情況也越來越普與。近年來由于綜合性高科技的飛速發(fā)展，血細(xì)胞分析儀上也不斷采用了最新的電子、光學(xué)、化學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)，從而不斷滿足臨床工作對(duì)血液細(xì)胞分析的要求。提供更加方便適用、更多功能和參數(shù)、更加準(zhǔn)確、更快速度的血細(xì)胞分析儀，已經(jīng)是各

38、血細(xì)胞分析儀生產(chǎn)廠商的目標(biāo)。一血細(xì)胞分析儀近年來的發(fā)展變化1.血常規(guī)檢驗(yàn)多參數(shù)化近年來許多血細(xì)胞分析儀器都在增加新的參數(shù)以滿足臨床在診斷和鑒別診斷方面的需求。最初的血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(Cell Counter)僅僅能夠計(jì)數(shù)紅細(xì)胞(RBC)和白細(xì)胞(WBC)，后來又有了血紅蛋白(HBG)、血小板(PLT)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)等幾個(gè)參數(shù)。而發(fā)展成為血細(xì)胞分析儀(Hematology Analyzer)后，又增加了許多分析和計(jì)算參數(shù)。最早加入到并得到公認(rèn)的參數(shù)是紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)，目前該參數(shù)已經(jīng)成為許多型號(hào)血細(xì)胞分析儀的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)，在各種貧血的診斷和治療中起著重要作用，

39、而該參數(shù)是很難應(yīng)用人工方法測(cè)定的。隨后有關(guān)平均血小板體積(MPV)、血小板體積分布寬度(PDW)、血小板壓積(PCT)、大血小板比率、白細(xì)胞三分群、白細(xì)胞五分類、血紅蛋白濃度分布寬度、異常淋巴細(xì)胞提示、幼稚細(xì)胞提示等各種參數(shù)和功能也不斷的添加到一些品牌的儀器上，目前有的儀器甚至可以提供4050種測(cè)量或計(jì)算參數(shù)。但很多的新參數(shù)目前仍不能應(yīng)用于臨床，僅限定在實(shí)驗(yàn)室中供研究使用。在美國(guó)凡進(jìn)入臨床應(yīng)用的新的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，需要經(jīng)過FDA(美國(guó)食品和藥品管理局)的批準(zhǔn)認(rèn)可，其批準(zhǔn)原則是經(jīng)過多年實(shí)驗(yàn)認(rèn)證，該參數(shù)應(yīng)該是對(duì)臨床診斷有用的、安全的和高效率的。這個(gè)認(rèn)證是非常嚴(yán)格的，而在我國(guó)目前還缺乏這樣嚴(yán)格的認(rèn)證和批準(zhǔn)

40、體系。2.多功能合成擴(kuò)展血細(xì)胞分析儀已經(jīng)不僅僅局限在進(jìn)行常規(guī)血細(xì)胞分析，近年來它增加了許多擴(kuò)展的功能。例如將網(wǎng)織紅細(xì)胞(RET)的計(jì)數(shù)和分析功能加入其中，例如Bayer ADVIA 120型;Sysmex SE-9000/SE-9500/XE-2100型;Coulter MAXM/STKS/HmX/GEN.S型;Abbott CELL-DYN3200/3500R/4000型等。一些儀器另外增加了幼稚細(xì)胞分析和有核紅細(xì)胞分析功能，甚至對(duì)血液細(xì)胞中的某些寄生蟲進(jìn)行提示，例如Sysmex SF-3000/SE-9000/SE-9500/XE-2100;Bayer ADVIA 120;Abbott C

41、ELL-DYN3500/4000;Coulter HmX/LH750/GEN.S System 2型等。更有一些儀器把流式細(xì)胞分析儀的某些功能合并到血細(xì)胞分析儀上，這樣在進(jìn)行常規(guī)血細(xì)胞分析時(shí)就可以得到某些淋巴細(xì)胞亞群的分析結(jié)果，例如在Coulter STKS上可以同時(shí)測(cè)定CD4和CD8，在Abbott CELL-DYN 4000上可以測(cè)定CD3、CD4、CD8和CD61，使得一機(jī)兩用。3.檢測(cè)速度的提高許多儀器由于增加了自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)，測(cè)定速度加快，一般可以達(dá)到每小時(shí)80100個(gè)樣品，在不包含網(wǎng)織細(xì)胞檢測(cè)的情況下，Coulter GEN.S System 2型每小時(shí)測(cè)定105個(gè)標(biāo)本;Bayer

42、ADVIA 120每小時(shí)120個(gè)標(biāo)本;而Sysmex KX-2100可以達(dá)到每小時(shí)150個(gè)標(biāo)本。這些儀器都可以在自動(dòng)成批進(jìn)樣的同時(shí)，隨時(shí)插入急診檢驗(yàn)的標(biāo)本。4.方法的改進(jìn)和進(jìn)展為了做到更加準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)和分析、更多的測(cè)定和分析參數(shù)，血細(xì)胞測(cè)定和分析的方法已經(jīng)不局限于某一種單一的方法，如傳統(tǒng)的電阻抗法或后來應(yīng)用的激光散射法，還加了多項(xiàng)技術(shù)的相互聯(lián)合應(yīng)用。例如在白細(xì)胞分類上，各廠家分別采用了不同的方法，Coutler采用了VCS技術(shù)，即體積測(cè)量、射頻高頻傳導(dǎo)性和激光散射技術(shù);Sysmex則采用了直流電阻抗(DC)與射頻(RF)和特殊細(xì)胞染色技術(shù);Bayer公司的ADVIA120則采用激光散射和細(xì)胞化學(xué)

43、(過氧化酶和嗜堿細(xì)胞染色)技術(shù);而Abbott是采用多角度偏振光散射(MAPSS)技術(shù)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分析。除了在白細(xì)胞分類上采用多種處理方法外，在紅細(xì)胞和血小板分析上也采用了光學(xué)和電阻法結(jié)合的處理方法，以期得到更正確的結(jié)果;對(duì)紅細(xì)胞體積進(jìn)行三維空間分析(3D)，體積大小和色素含量的分析;對(duì)血紅蛋白測(cè)定不僅使用比色法，同時(shí)還使用激光散射法進(jìn)行單個(gè)紅細(xì)胞血紅蛋白量的分析，以盡量減少高WBC、乳糜血、高膽紅素等對(duì)HBG比色的影響。由于方法的改進(jìn)，這些儀器已經(jīng)不僅僅采用23種試劑來完成測(cè)定工作，常常是6種以上的試劑聯(lián)合使用，才能夠適應(yīng)方法的要求，例如Bayer ADVIA120型需要多達(dá)11種試劑，而這

44、些試劑由于技術(shù)含量較高，專用性強(qiáng)，各廠家產(chǎn)品之間不能混用，生產(chǎn)技術(shù)要求高，因此國(guó)還沒有替代產(chǎn)品出現(xiàn)。5.應(yīng)用的方便性對(duì)于操作者來說，儀器最大的優(yōu)越性還應(yīng)該體現(xiàn)在操作的方便性和靈活性上。許多廠家都考慮到了這一點(diǎn)。例如可以使用靜脈或末稍血液;可以在標(biāo)本量很大的情況下選擇全自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)，也可使用單獨(dú)閉蓋或開蓋取樣系統(tǒng)(閉蓋全自動(dòng)進(jìn)樣或單獨(dú)進(jìn)樣對(duì)操作者是非常安全的操作方式);對(duì)項(xiàng)目可作適當(dāng)?shù)慕M合，以適應(yīng)臨床與患者的需求，例如操作者可以選擇CBC方式(僅含細(xì)胞計(jì)數(shù)、不分類)、CBC+DIFF方式(計(jì)數(shù)加分類)、RET方式，可將它們?nèi)我鈫芜x或組合;條碼的應(yīng)用給標(biāo)本編號(hào)提供了方便，儀器通過自動(dòng)掃描條碼，來鑒

45、別標(biāo)本的來源、需要檢測(cè)的項(xiàng)目和區(qū)分患者，最后根據(jù)條碼提供的信息將結(jié)果返回到臨床或病人檔案中，為檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的電子化提供了極大方便，也減少了編號(hào)帶來的差錯(cuò)。上述的許多功能已經(jīng)在許多新型的高級(jí)五分類式血細(xì)胞分析儀中得到實(shí)現(xiàn)。二血細(xì)胞分析儀產(chǎn)品的系列化和流水線化1.產(chǎn)品的系列化各有實(shí)力的公司不斷開發(fā)系列化產(chǎn)品以滿足不同類型用戶的需要。例如Coulter公司的ACT系列儀器，有最簡(jiǎn)單的ACT 8型只有8個(gè)參數(shù)到12參數(shù)，到也有18參數(shù)三分類的ACT DIFF，亦有5分類的ACT 5-DIFF，甚至還有可增加動(dòng)物血液分析的型號(hào)。Sysmex的多種系列化儀器如SE系列、K系列、F系列等在我國(guó)也很常見。此外Ab

46、bott、ABX、日本光電、Swelab等公司都有各種系列化儀器不斷推出，以滿足各種需求。2.流水線化在全自動(dòng)血液分析儀器的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)流水線化，是血液分析的又一大飛躍，但這需要雄厚的資金支持。所謂流水線化即是將血液常規(guī)分析中的所有步驟和項(xiàng)目進(jìn)行系統(tǒng)性聯(lián)合，將血液常規(guī)分析、網(wǎng)織紅細(xì)胞分析、血片的制備(選擇、涂片、編號(hào)、染色、干燥)等系列步驟通過儀器自動(dòng)完成。這種流水線可以將具有不同功能的單個(gè)設(shè)備用自動(dòng)傳送系統(tǒng)連接在一起，例如Sysmex的HST型小型流水線血液分析儀(圖1)將電腦控制終端、SE-9000血細(xì)胞分析儀、R-3000網(wǎng)織細(xì)胞分析儀、SP-100血片涂片機(jī)連結(jié)在一起，使血液標(biāo)本從

47、計(jì)數(shù)開始自動(dòng)按程序運(yùn)行到推片和染色結(jié)束，全部自動(dòng)進(jìn)行。而現(xiàn)在許多儀器已經(jīng)合并了網(wǎng)織紅細(xì)胞分析功能，因此只有電腦控制臺(tái)、血液分析儀主機(jī)、涂片染片機(jī)，如Coulter LH700系列(圖2)。近年來Abbott、ABX都有類似小型血細(xì)胞分析流水線系統(tǒng)推出(圖3)。流水線系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)在于極減少了人工勞動(dòng)的強(qiáng)度，加快了標(biāo)本的處理速度，同時(shí)使得許多操作更加標(biāo)準(zhǔn)化和減少了操作者之間的個(gè)體差異。例如制作血涂片的過程可以根據(jù)儀器測(cè)定的紅細(xì)胞參數(shù)和設(shè)定條件來智能化地決定該患者血涂片的制作要求，如果細(xì)胞數(shù)量少，涂片機(jī)會(huì)調(diào)整制片的角度，制作較厚的血涂片，細(xì)胞數(shù)量較多則選擇制作比較薄的血涂片，這樣可以更方便閱片醫(yī)師的顯

48、微鏡檢查工作。染色條件由于設(shè)定非常精確，因此染色效果非常一致，顏色和效果可以滿足臨床閱片的要求。流水線系統(tǒng)最為重要的部分是計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)，因?yàn)檎麄€(gè)流程是在它的控制下運(yùn)行的，而系統(tǒng)中的“規(guī)則”是非常重要的一個(gè)軟件環(huán)節(jié)。所謂規(guī)則就是來自儀器和專家經(jīng)驗(yàn)的綜合，這些“規(guī)則”將被存儲(chǔ)在計(jì)算機(jī)，凡不符合規(guī)則的標(biāo)本將被篩選出來。例如白細(xì)胞計(jì)數(shù)高于或低于多少，直方圖或散點(diǎn)圖那個(gè)區(qū)域出現(xiàn)異常信號(hào)，則該標(biāo)本應(yīng)該被制作涂片，需要進(jìn)行顯微鏡檢查;那個(gè)標(biāo)本的紅細(xì)胞或血紅蛋白低于多少、直方圖或散點(diǎn)圖有何改變，該標(biāo)本需要自動(dòng)進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞分析和涂片檢查等。這些規(guī)則需要來自很多經(jīng)驗(yàn)的積累和各方面專家的意見。筆者最近了解到Co

49、ulter LH系列的規(guī)則(Rule Systems)可達(dá)到85項(xiàng)，凡通過規(guī)則的標(biāo)本可以不需要顯微鏡檢查，這樣的標(biāo)本占70%以上，而未通過規(guī)則的標(biāo)本占24%30%，經(jīng)過人工顯微鏡檢查，基本上無假陰性問題。筆者曾經(jīng)在日本一所著名的大學(xué)醫(yī)院參觀，該實(shí)驗(yàn)室的自動(dòng)化流水線大得驚人，從病人抽血取樣開始，所有病人標(biāo)本都粘貼上條碼，通過條碼與醫(yī)院信息系統(tǒng)中的信息進(jìn)行連接，由此可以知道該患者的基本情況和需要進(jìn)行何種實(shí)驗(yàn)。標(biāo)本首先進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前處理設(shè)備，該設(shè)備可自動(dòng)對(duì)血標(biāo)本進(jìn)行分檢，自動(dòng)離心，然后在充滿整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的連接軌道上進(jìn)行傳送，血標(biāo)本根據(jù)條碼上的各種信息走到相應(yīng)的設(shè)備上自動(dòng)取樣和測(cè)定。實(shí)驗(yàn)需要血清標(biāo)本的，系

50、統(tǒng)可將標(biāo)本進(jìn)行離心，然后自動(dòng)分配血清標(biāo)本到專用試管并加上條碼標(biāo)簽。例如抗凝血標(biāo)本進(jìn)入血液分析子流水線進(jìn)行常規(guī)血液學(xué)實(shí)驗(yàn);血清標(biāo)本則進(jìn)入血液化學(xué)分析設(shè)備進(jìn)行血糖、肝腎功能實(shí)驗(yàn);進(jìn)入免疫分析儀器或激素測(cè)定儀器進(jìn)行相關(guān)的實(shí)驗(yàn)。在這里基本上沒有各種專業(yè)的分工，所有設(shè)備都集中在一個(gè)很大的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，標(biāo)本從總流水線進(jìn)入各個(gè)子流水線系統(tǒng)再具體進(jìn)入每個(gè)測(cè)定單元，都是在計(jì)算機(jī)系統(tǒng)控制下精確運(yùn)行的。測(cè)定后的標(biāo)本(包括血液、凝血、生化、免疫各種實(shí)驗(yàn))自動(dòng)蓋好蓋子和貼上標(biāo)簽，自動(dòng)進(jìn)入大型冰箱儲(chǔ)存，如果需要復(fù)檢，只需要在計(jì)算機(jī)上敲入該標(biāo)本編碼，則該標(biāo)本會(huì)自動(dòng)傳輸出來。各種儀器測(cè)定的結(jié)果經(jīng)過網(wǎng)絡(luò)傳入終端設(shè)備，由實(shí)驗(yàn)室醫(yī)生

51、核定簽發(fā)后，經(jīng)過醫(yī)院網(wǎng)絡(luò)進(jìn)入醫(yī)生診室和電子病歷。整個(gè)實(shí)驗(yàn)室只有20余個(gè)工作人員，而在前臺(tái)抽血或接收標(biāo)本一般工作人員與在后臺(tái)簽發(fā)報(bào)告和進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢查的專業(yè)檢驗(yàn)醫(yī)師，專家占很大比例，而真正在操作機(jī)器的技師則很少。實(shí)驗(yàn)室前處理設(shè)備和連接軌道以與電腦控制系統(tǒng)是實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室全自動(dòng)化的關(guān)鍵，目前我國(guó)還沒有那家醫(yī)院有能力或資金支持建立這樣的全自動(dòng)流水線實(shí)驗(yàn)室操作系統(tǒng)。三國(guó)產(chǎn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀發(fā)展情況我國(guó)早在20世紀(jì)60年代就開始進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的研制工作，1965年生產(chǎn)了我國(guó)的第一代血球計(jì)數(shù)儀，70年代也有簡(jiǎn)單的血球計(jì)數(shù)儀生產(chǎn)，筆者保存的就有XF503型、生化儀器廠的ZF型、XF-1型、DXJ-1型等一些廠家早期生

52、產(chǎn)的血球計(jì)數(shù)儀資料，從介紹和照片看都屬于僅能計(jì)數(shù)RBC和WBC的儀器。隨著改革開放的開始，國(guó)一些廠家與國(guó)外合作生產(chǎn)了第二代的血液細(xì)胞分析儀，其中最著名的也是應(yīng)用最為廣泛的當(dāng)屬ERMA PC-603和PC-604型，前者主要參數(shù)有RBC、WBC和HBG三個(gè)參數(shù)，后者增加了一個(gè)計(jì)算器，還可以得到MCV、HCT、MCH、MCHC和打印功能。以后，由于國(guó)外各種帶白細(xì)胞兩分類和三分類，帶自動(dòng)稀釋的儀器大量進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)，大大沖擊了國(guó)產(chǎn)細(xì)胞分析儀的地位，同時(shí)也由于技術(shù)和資金的缺乏，國(guó)生產(chǎn)的細(xì)胞分析儀沒有得到進(jìn)一步的發(fā)展，開發(fā)、研制。設(shè)計(jì)和生產(chǎn)血液分析儀的能力逐漸下降、人員流失，處于停滯狀態(tài)。近兩三年來，國(guó)的

53、某些高新技術(shù)行業(yè)投資生產(chǎn)第三代，也就是具有18項(xiàng)參數(shù)含白細(xì)胞三分類功能的血細(xì)胞分析儀。目前見到的有TECOM公司生產(chǎn)的TEK-2000型(圖4)，它采用自動(dòng)稀釋技術(shù)，可使用靜脈血或末梢血、檢測(cè)速度為每小時(shí)60個(gè)標(biāo)本、全中文化WINDOWS操作界面，大型液晶顯示屏，具有質(zhì)控程序和系統(tǒng)故障診斷程序，可儲(chǔ)存200萬個(gè)測(cè)定數(shù)據(jù)(含直方圖)，提供多種打印格式，使用方便，為國(guó)產(chǎn)化血液分析儀開了一個(gè)好頭。其他廠家也在設(shè)計(jì)和開發(fā)類似的儀器甚至五分類的儀器。期望我國(guó)的科技人員和實(shí)驗(yàn)室工作人員能有更好的配合，能向家電業(yè)和電腦業(yè)一樣，與國(guó)際水準(zhǔn)接近，生產(chǎn)出具有先進(jìn)水平的、現(xiàn)代化的血液細(xì)胞分析儀器。四結(jié)束語本文介紹了

54、最新的血細(xì)胞分析儀的進(jìn)展，供參考。雖然血細(xì)胞分析儀越來越普遍的應(yīng)用于各級(jí)醫(yī)院的常規(guī)檢驗(yàn)中，但是并不是說所有的結(jié)果都是準(zhǔn)確無誤的，目前在血細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面，無論是五分類還是更多的分類，仍然不能根本解決血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)的問題，不能完全以儀器分類結(jié)果徹底取代人工分類。此外儀器一些固有的產(chǎn)生誤差的因素還存在，影響儀器計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性的少數(shù)因素還存在，某些儀器具有的缺陷和局限性還存在，因此仍然會(huì)有問題發(fā)生。不要完全相信儀器，要認(rèn)真對(duì)待每個(gè)實(shí)驗(yàn)樣品和結(jié)果，這一切都有待于我們?cè)谑炀氄莆樟私鈨x器的性能和不斷提高自己的知識(shí)水平上，通過扎實(shí)的的臨床檢驗(yàn)學(xué)基本功來解決。尿液顏色與疾病正常尿液為淺黃色，可因飲水、出汗與活動(dòng)量不

55、同而深淺變化不等。當(dāng)人體代異?；蚧寄撤N疾病時(shí)，尿液的顏色會(huì)出現(xiàn)特殊改變。因此，尿色變化具有很重要的診斷價(jià)值。1.無色尿-可能是糖尿病、慢性間質(zhì)性腎炎、尿崩癥的信號(hào)，如果不是飲水太多的緣故，應(yīng)注意鑒別。2.白色尿-白色尿常見于膿性尿、乳糜尿和鹽類尿。膿性尿是由嚴(yán)重泌尿道化膿感染引起的，尿液呈乳白色。膿性尿常見于腎盂腎炎、膀胱炎、腎膿腫、尿道炎，或嚴(yán)重的腎結(jié)核。乳糜尿是絲蟲病的主要癥狀之一，尿色白如牛奶。由于腸道吸收的乳糜液(脂肪皂化后的液體)，不能從正常的淋巴管引流到血循環(huán)中去，只能逆流至泌尿系統(tǒng)的淋巴管中，造成泌尿系統(tǒng)中淋巴管壓增高，曲而破裂使乳糜液溢入尿液中，而出現(xiàn)乳糜尿。乳糜尿一般是陣發(fā)性

56、的。乳糜尿中有紅細(xì)胞時(shí)，叫做乳糜血尿。在患乳糜血尿病人的血和尿，有時(shí)可找到微絲幼(即幼絲蟲)。3.鹽類尿-多發(fā)生子兒童冬季常見，小便呈米湯樣，多為原中含有大量的磷酸鹽或尿鹽酸，放置后易沉淀，如把小便放在瓶加熱后會(huì)馬上變清。鹽類尿?qū)僬Ｉ憩F(xiàn)象?？刹挥盟幎?，關(guān)鍵是要多飲白開水。4.黃色尿-指尿呈黃色或深黃色。其原因有：食胡蘿卜，服核黃素、痢特靈、滅水滴靈、大黃等中西藥過程中，可出現(xiàn)尿液變黃的情況，一旦停止服用，隨即消失，無需多慮。常見的發(fā)熱或有吐瀉癥狀的病人因水分隨汗液或糞便排出，尿就會(huì)濃縮減少，而尿色素沒有改變，這樣小便的顏色就顯得很黃。另一種小便黃的像濃茶，則不是由于上述原因，而是肝臟或胭

57、囊有了病變。原來，膽汁向外排的道路通常有兩條：一條從尿里出來，一條從腸道里出來。當(dāng)肝臟或膽囊有病，膽汁到腸道的路被切斷，就只能從尿里排出來，尿液里也因膽汁的含量增加而呈深黃色了。肝炎的早期，還沒有出現(xiàn)黃疸，我們常常可以看到小便的顏色像濃茶似的，這往往是肝炎的一個(gè)信號(hào)。此外，黃色混濁的膿尿則是泌尿器官化膿的表現(xiàn)。5.藍(lán)色尿-可見于霍亂、斑疹傷寒，以與原發(fā)性高血鈣癥、維生素d中毒者。但這種顏色的尿多與服藥有關(guān)，非疾病所致。如服用利尿劑氨苯喋啶，注射亞甲藍(lán)針劑或服用美藍(lán)、靛卡紅、木餾油、水酸之后均可出現(xiàn)。停藥即可消失。這種因服藥而引起的藍(lán)色尿?qū)儆谡Ｓ^象，無需多慮。6.綠色尿-見于尿有綠膿桿菌滋生時(shí)

58、，或膽紅素尿放置過久，氧化成膽綠素時(shí)。淡綠色尿：見于大量服用消炎藥后。暗綠色尿：原因同藍(lán)色尿。黑色尿：黑色尿比較少見，常常發(fā)生于急性血管溶血的病人，如惡性瘧疾病人，醫(yī)學(xué)上稱黑尿熱，是惡性瘧疾最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一。這種病人的血漿中有大量的游離氧、血紅蛋白與定氧血紅蛋白，隨尿排出而造成尿呈暗紅或黑色。另有少數(shù)病人服用左旋多巴、甲酚、苯肼等后，也會(huì)引起排黑尿，停藥后即會(huì)消失。國(guó)外有資料報(bào)告，患陣發(fā)性肌紅蛋白尿的病人，在運(yùn)動(dòng)后也會(huì)排出棕黑色尿，同時(shí)伴有肌肉無力，可逐漸發(fā)展為癱疾。此外，黑尿還可見于酚中毒、黑色毒瘤、尿黑酸病。棕褐色尿(如同醬油顏色)：可見于急性腎炎、急性黃疸型肝炎、腎臟擠壓傷、大面積燒傷

59、、溶血性貧血、錯(cuò)型輸血，甚至劇烈的運(yùn)動(dòng)后，尿液也可似醬油色。有時(shí)睡眠起床后尿呈棕褐色，那是陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿病的特征。如果這種小便出現(xiàn)在吃青蠶豆以后，就要警惕蠶豆病。這種病人的紅血球缺乏一種叫6磷酸葡萄糖脫氫酶的物質(zhì)，有一定的遺傳性。所以當(dāng)食蠶豆后即發(fā)生棕褐色尿，并有疲乏、頭暈、惡心、皮膚、眼睛發(fā)黃，應(yīng)與時(shí)送醫(yī)院搶救，以防不測(cè)。7.紅色尿-尿色變紅，多半是尿中有紅細(xì)胞，醫(yī)學(xué)上稱血尿。血尿的原因非常復(fù)雜，有上百種疾病可以引起血尿，要正確診斷并不那么容易。如果血尿伴有鼻出血、牙齦出血、皮膚出血，這可能是全身性出血疾病在作崇，如血小板減少、過敏性紫癜、血友病，甚至白血病等，尿血不過是全身出血的一

60、種表現(xiàn)。如果血尿伴有發(fā)燒、關(guān)節(jié)腫痛、皮膚損害、多臟器的損傷時(shí)，可能為結(jié)締組織性疾病(如全身性紅斑狼瘡、結(jié)節(jié)性動(dòng)脈炎等)。如果血尿伴有高血壓、浮腫、蛋白尿時(shí)多為腎小球腎炎。如果血尿伴有腰腹部隱痛不適，尿急、尿頻、尿痛者多為泌尿系統(tǒng)感染或結(jié)核。如果血尿伴有腰部脹痛或一側(cè)腹部絞痛，以腎、輸尿管結(jié)石的可能性最大，特別是痛得在床上輾轉(zhuǎn)不安，多為輸尿管結(jié)石。如果血尿伴有排尿不暢、費(fèi)力、小便滴瀝排出，在老年男性，多為前列腺肥大，在中年男性，則要考慮尿道狹窄、尿道結(jié)石或膀胱腫瘤。50歲以上的人發(fā)生肉眼能見或顯著的顯微鏡血尿，無論是男是女，都暗示泌尿系統(tǒng)存在著病變。尤其是突然發(fā)生的無痛性血尿，多數(shù)是腫瘤漫蝕尿液