《藥物分析》II(藥物分析專論)課件

1、藥物分析(藥物分析專論) 藥物分析教研室 孫立新 副教授藥物結(jié)構(gòu)性質(zhì)分析方法第四章芳酸類藥物的分析The Analysis of Aromatic Acids第一節(jié)概述一、分類羧基直接與苯環(huán)相連接的藥物。根據(jù)結(jié)構(gòu)分為: 水楊酸類 苯甲酸類 其它芳酸1、水楊酸類代表藥物有阿斯匹林 水楊酸（鈉） 對氨基水楊酸（鈉） 2、苯甲酸類代表藥物苯甲酸（鈉） 氨甲苯酸 泛影酸3、其它芳酸代表藥物止血敏 布洛酚二、性質(zhì)1、性狀：大多數(shù)是結(jié)晶性固體 少數(shù)為液體（水楊酸甲酯、苯甲酸芐酯）2、溶解性：游離芳酸類藥物，幾乎不溶于水，易溶于有機溶劑芳酸堿金屬鹽易溶于水3、酸性： 芳酸類藥物分子中具有COOH，所以顯弱酸

2、性 藥用芳酸pKa在36之間。 具有酸性，可以與堿成鹽。4、紫外吸收： 具有苯環(huán)，所以具有紫外吸收。一、呈色反應(yīng)1、FeCl3反應(yīng) 紫堇色第二節(jié)鑒別反應(yīng)+ 苯甲酸的堿性或中性溶液與三氯化 鐵試液生成堿式苯甲酸鐵鹽的赭色 沉淀。2、茚三酮反應(yīng)具有類似-氨基酸結(jié)構(gòu)如氨甲苯酸，可與茚三酮反應(yīng)，產(chǎn)生藍紫色的縮合物+二、阿斯匹林水解產(chǎn)物的反應(yīng)三、重氮化-偶合反應(yīng) 對氨基水楊酸鈉具有芳伯氨基結(jié)構(gòu)，在鹽酸酸性溶液中，與亞硝酸鈉試液發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，與堿性萘酚偶合產(chǎn)生橙紅色沉淀。 四、溴代反應(yīng)酚羥基鄰位、對位的氫比較活潑，很容易被溴取代。五、紫外光譜法六、紅外光譜法第三節(jié)水楊酸類藥物的分析一、特殊雜

3、質(zhì)檢查(一)、阿斯匹林中的雜質(zhì)檢查1、 熾灼殘渣2、 重金屬3、易碳化物4、溶液的澄清度檢查： 檢查碳酸鈉試液中不溶物酚類（如苯酚）醋酸苯酯水楊酸苯酯乙酰水楊酸苯酯雜質(zhì)碳酸鈉試液中不溶，而阿斯匹林溶于碳酸鈉試液。5、水楊酸 來源：生產(chǎn)過程中乙酰化不完全或貯藏過程中水解產(chǎn)生。原理：阿斯匹林無酚羥基，不與高鐵反應(yīng)。水揚酸有酚羥基，與高鐵反應(yīng)生成紫堇色(二)、對氨基水楊酸中的雜質(zhì)檢查 雜質(zhì)來源:未反應(yīng)完全的原料間氨基酚 遇熱受潮生成間氨基酚,再 被氧化成二苯醌型化合物檢查方法: 雙相滴定法(ChP2000) HPLC(USP23)二、含量測定(一)、阿斯匹林含量測定酸堿滴定法1 直接滴定法 原理：阿

4、司匹林具有游離羧基，具有酸 性，以標(biāo)準(zhǔn)堿滴定液直接滴定。 方法: 取本品0.4g,精密稱定,加中性乙醇(對酚酞指示液顯中性) 20ml,溶解后,加酚酞指示液3滴,用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定.每1ml的氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于18.02的C9H8O4。中性乙醇：溶解供試品 防止酯水解。 目的：扣除乙醇中酸的影響。2. 水解后剩余滴定法原理:阿斯匹林酯結(jié)構(gòu)在堿性溶液中易于水解,加入定量過量的氫氧化鈉滴定液,加熱使酯水解,剩余的堿用酸回滴.需做空白試驗校正. 目的：NaOH在加熱時易吸收CO2,用酸回滴定會消耗酸，影響結(jié)果3.兩步滴定法 適用于阿斯匹林片劑片劑穩(wěn)定劑:酒

5、石酸或枸櫞酸分解產(chǎn)物:水楊酸和醋酸第一步:中和第二步:水解和測定(二)、對氨基水楊酸鈉含量測定 亞硝酸鈉滴定法 對氨基水楊酸鈉具有芳伯氨基,能在鹽酸存在下與亞硝酸鈉定量地發(fā)生重氮化,生成重氮鹽.第四節(jié) 苯甲酸類藥物的分析一、苯甲酸鈉的含量測定雙相滴定法原理： 苯鉀酸鈉溶于H2O 苯甲酸 不溶于H2O，溶于乙醚滴定前：苯甲酸鈉甲基橙指示劑，呈黃色（pH3.14.4）紅 黃滴定中： 苯甲酸鈉+鹽酸 苯甲酸滴定終點：過量HCl，使指示劑變橙紅色水相乙醚相第一章 糖類和苷類藥物的分析 一、糖類 1、醫(yī)學(xué)上的糖類 葡萄糖, 乳糖（半乳糖-葡萄糖）, 蔗糖（葡萄糖-果糖） 2、分類： 糖類就其化學(xué)結(jié)構(gòu)來看

6、，屬于多羥基醚或羥基酮以及它們的多縮聚體. 依其是否能水解及水解產(chǎn)生簡單糖分 子多少，可分為：（1） 單糖類： a、戊糖：5個C原子 b、己糖：6個C原子 c、醛糖 d、酮糖（2） 雙糖類：乳糖，蔗糖（3） 多糖類：淀粉，纖維素 3、 性質(zhì)（1） 單糖、雙糖為無色固體（無色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末）或糖漿狀液體，易溶于水、不溶于乙醚及其它有機溶劑，微溶于乙醇。（2） 多糖：一般不溶于水。 4、 鑒別（1） 灼燒試驗： 糖類直火燃燒并產(chǎn)生焦糖臭味（一般用于蔗糖的鑒別）（2） Molish試驗 糖類濃H2SO4（脫水）糠醛或糠醛衍生物+a-萘酚呈色（3） 游離醛基或酮基的還原反應(yīng)： 單糖或含半縮醛基的雙糖

7、均具有還原性。(4) . 比旋度蔗糖：不得少于+66（10%水溶液）乳糖：+52.052.6（10%水溶液，并100ml中加氨試液0.2ml）無水葡萄糖：+52.653.2葡萄糖：+52.553（10%水溶液，并100ml中加氨試液0.2ml）5、 含量測定(1) 旋光法（Polarimetry） 旋光度：直線偏振光通過光學(xué)活性化合物液體或溶液時，能引起旋光現(xiàn)象，使偏振光平面向左或右旋轉(zhuǎn)，旋轉(zhuǎn)的度數(shù)稱旋光度。 比旋度：偏振光透過1dm且1ml中含旋光物質(zhì)1g的溶液，在一定波長一定溫度下測得的旋光度稱比旋度。a=aCLa：旋光度；a：比旋度ChP2000采用鈉光譜的D線（589.3nm）測定旋光

8、度，除另有規(guī)定外，測定溫度20，測定管長度2dm，物質(zhì)濃度以C（g/ml）表示，則：若物質(zhì)濃度用%濃度（g/100ml）表示，C以C/100代入，則：即 如果已知被測物質(zhì)的比旋度a,根據(jù)測量得到的比旋度a,由上式即可計算出被測物質(zhì)的百分濃度。(2) 折光率法（Refractometry） 折光率與溶液濃度（W/V）的關(guān)系 用下式表示： n ：折光率n0：同溫度時水的折光率（20為1.3330）F ：經(jīng)反復(fù)試驗測得的折光因數(shù)P ：溶液的百分濃度（%，W/V）n=n0+FP sini：光線入射角的正弦 sinr：光線折射角的正弦只要求得折射因數(shù)F，從溶液的折光率和水溶液的折光率即可計算出溶液的濃度

9、.本法可用于葡萄糖的快速測定，但測定結(jié)果較旋光法偏高。折光儀:阿培氏折光計測定前用棱鏡或水進行校正。 20時水的折光率為1.3330 25時水的折光率為1.3325 40時水的折光率為1.3305藥物名稱VE1.4941.499VK11.5251.528苯甲醇1.5171.522二甲硅油1.4001.410月桂氮卓酮1.4701.473Chp2000未見用于含量測定，但用于純度檢查。 二、苷類 1、含義： 糖類和有羥基的非糖有機化合物縮合成環(huán)狀縮醛結(jié)構(gòu)的化合物，其水解產(chǎn)生糖+非糖類化合物（苷元或稱配基） 2、分類：按苷元的結(jié)構(gòu)分為： （1）氰苷類（如苦杏仁苷） （2）恩苷類（如大黃酚） （3）

10、黃酮苷類（如蘆?。?（4）甾體強心苷類（如洋地黃毒苷） （5）皂苷類（如甘草皂苷） 3、 構(gòu)成天然苷類的糖 (1)葡萄糖； (2)其他的五碳糖、六碳糖； (3) 特殊的去氧糖類（洋地黃毒糖） 4、性質(zhì) （1）味苦，中性（有的呈酸性，也有呈堿性，稱生物堿苷） （2）多為白色結(jié)晶，易溶于水，不溶于甲醇、乙醇，難溶于非極性溶劑中。強心苷類難溶于水，可溶于乙醇及氯仿。 5、 鑒別（1）天然產(chǎn)的苷類:均呈左旋性,無還原性.但當(dāng)苷在堿性或酸性下水解后,生成苷元和糖類,后者多為右旋且具有還原性。 鑒別方法： 天然苷：左旋性，無還原性 已水解苷：右旋，有還原性 （2）Keller-kiliani反應(yīng)(3) K

11、edde反應(yīng) 6、 含量測定 ChP2000對洋地黃毒苷采用比色法、熒光法或色譜法測定。 （1）比色法： 地高辛原料、地高辛注射液采用堿性三硝基苯酚顯色后，于485nm處比色測定。 （2）熒光法： 地高辛片劑含量測定、含量均勻度檢查、溶出度采用熒光法測定。是利用洋地黃毒苷+VC+H2O2+HCl產(chǎn)生熒光（激發(fā)波長360nm，發(fā)射波長485nm）。第二章 醇、醚、醛和酮類藥物的分析 一、醇 1、 代表藥物及特點：CH3CH2OH 乙醇 甘油二巰丙醇三氯叔丁醇 三梨醇 結(jié)構(gòu)分析： 含-OH（醇羥基），可與酸成酯。 a-活潑H（乙醇、三氯叔丁醇）反應(yīng)（在堿性下與碘反應(yīng)生成碘仿）； 丙烯醛反應(yīng)（甘油、

12、二巰丙醇，堿性下加熱生成丙烯醛）； 三氯叔丁醇堿性下加熱回流生成氯化鈉，可加入定過量硝酸銀，過量硝酸銀用硫氫酸銨滴定，以硫酸鐵銨為指示劑，可以定量測定； 本類藥物具有還原性，可采用碘量法或高碘酸法測定。 2、 鑒別反應(yīng) (1) 碘仿反應(yīng)（a-活潑H）：乙醇在OH-下可被碘氧化生成甲酸鹽，并生成碘仿臭氣或黃色 CH3CH2OH+4I2+6NaOHCHI3+5NaI+ HCOONa+5H2O 三氯叔丁醇 同上，碘仿（a-活潑H） (2) 丙烯醛反應(yīng)： 甘油、二巰丙醇在堿性下加熱，即產(chǎn)生丙烯醛的刺激性臭氣。+2H2O (3) 沉淀反應(yīng)： +PbAC2+2HAC 3、 含量測定 (1) 碘量法：基于巰

13、基的強還原性 原理：+I2+2HI (2) 方法：同時做空白實驗。 (2)高碘酸法： 凡含有鄰位二元或多元羥基的化合物均能被高碘酸氧化生成相應(yīng)的小分子酸和醛，反應(yīng)時n個相鄰羥基，消耗n-1個高碘酸。生成的HCOOH用NaOH標(biāo)準(zhǔn)液滴定;或生成的HIO3+KI I2用Na2S2O3滴定。C6H14O6+5HIO42HCHO+4HCOOH +5HIO3+H2O(3) GC法乙醇的測定，可采用GC法 （頂空GC法） 二、醚 1、 代表藥物： C2H5-O-C2H5麻醉乙醚 2、 雜質(zhì)檢查： （1）酸度（2）醛類（3）過氧化物，（4）異臭 （5）不揮發(fā)物 三、醛 1、 代表藥物：HCHO CCl3CH

14、(OH)2 甲醛烏洛托品水合氯醛 2、 鑒別： (1) 醛基的還原反應(yīng)： 堿性酒石酸酮（Fehling） Cu2O紅色 氨制AgNO3液（Tollen) Ag 銀鏡 (2) 甲醛的反應(yīng)： 甲醛+H2SO4+變色酸 紫色（專屬反應(yīng)） (3) 水合氯醛的反應(yīng)： 水合氯醛+NaOH CHCl3+HCOONa+H2O （形成二液層） (4) 烏洛托品反應(yīng)： 烏洛托品加稀酸，加熱即分解生成甲醛和銨鹽。生成的甲醛具有特臭味，并和氨制硝酸銀反應(yīng)生成銀鏡。銨鹽加堿放出氨氣。NH4HSO4+2NaOHNH3+Na2SO4+2H2OHCHO+2Ag(NH3)OHHCOONH4 +2Ag+3NH3 +H2O6HCH

15、O +4NH4HSO4C6H12N4+4H2SO4+6H2O 3、 含量測定： (1) 碘量法： 醛+I2（定、過量）醛基在OH-下被I2氧化成相應(yīng)的酸，剩余碘在酸性下以Na2S2O3滴定。(2) 中和法（氧化后剩余滴定法）HCHO+NaOH+H2OHCOONa+H2O 2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2O(3) 剩余堿水解法水合氯醛+NaOHCHCl3+HCOONa2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2O水解生成CHCl3在堿性下會有少量分解消耗堿 CHCl3+4NaOHHCOONa+3NaCl+2H2O生成的NaCl可采用銀量法測定后折算成NaOH的體積,自酸堿滴定中扣除。(4

16、) 酸水解后剩余滴定法烏洛托品+H2SO4（NH4）2SO4+6HCHO H2SO4（過量）用堿測定。 三、酮 1、 代表藥物富馬酸酮替酚吡喹酮撲米酮 撲米酮酸性下分解，生成甲醛，可利用甲醛的專屬反應(yīng)鑒別。 撲米酮堿性下加熱灼燒分解生成氨氣，可利用紅色石蕊試紙鑒別。 富馬酸酮替酚環(huán)上氮顯堿性，可采用非水滴定法測定含量，富馬酸不干擾； 富馬酸酮替酚環(huán)上酮可與二硝基苯肼反應(yīng)，生成紅色絮狀沉淀。第五章芳胺及芳烴胺類藥物的分析The Analysis of Aromatic amines and Aromatic alkylamines 芳胺類藥物指氨基直接與苯環(huán)相連。 芳胺類* : 酰胺類、對氨基苯

17、甲酸酯類 苯乙胺類 氨基醚衍生物芳烴胺類藥物指氨基在烴基側(cè)鏈上。1.結(jié)構(gòu)特點： 苯胺酰基衍生物，酰胺基鄰位或?qū)ξ挥腥〈?。第一?jié) 芳胺類藥物的分析一、酰胺類代表藥物有：對乙酰氨基酚鹽酸利多卡因2性質(zhì)：利多卡因，酰胺基鄰位上有兩個甲基，有很大空間位阻，水解較為困難。（利多卡因在80%的硫酸溶液中加熱才能水解） 水解后可發(fā)生重氮化反應(yīng)具有酰胺結(jié)構(gòu)共性。水解成芳伯氨基，發(fā)生重氮化偶合反應(yīng)。 堿性利多卡因側(cè)鏈中具有叔氨N原子，顯弱堿性，能與酸成鹽，且能與生物堿沉淀試劑或重金屬離子反應(yīng)。 與FeCl3反應(yīng)具有酚羥基或水解后能產(chǎn)生酚羥基（對 乙酰氨基酚），可與FeCl3作用呈色。 紫外吸收具有苯環(huán)結(jié)構(gòu)，有

18、紫外吸收。二、對氨基苯甲酸酯類具有對氨基苯甲酸酯基本結(jié)構(gòu)。具有游離的芳伯氨基。1結(jié)構(gòu)特點：代表藥物有： 鹽酸普魯卡因苯佐卡因鹽酸丁卡因2性質(zhì)： 具有芳伯氨基，發(fā)生重氮化或重氮化-偶合反應(yīng) 堿性具有脂烴胺側(cè)鏈堿性，能與生物堿沉淀試劑發(fā)生反應(yīng)。 具有酯的結(jié)構(gòu)，容易水解。 紫外吸收具有苯環(huán)結(jié)構(gòu)，有紫外吸收。三、鑒別反應(yīng)1、重氮化-偶合反應(yīng)具有芳伯氨基藥物，如鹽酸普魯卡因等，在酸性溶液中與NaNO2TS發(fā)生重氮化反應(yīng)，再與堿性-萘酚偶合產(chǎn)生紅色偶氮化合物。具有潛在芳伯氨基，如對乙酰氨基酚，水解后可得芳伯氨基，能發(fā)生類似反應(yīng)。 鹽酸丁卡因（芳香第二胺結(jié)構(gòu)）與NaNO2作用生成乳白色N-亞硝基化合物沉淀。

19、2、三氯化鐵反應(yīng)具有酚羥基（如對乙酰氨基酚），可 與FeCl3TS作用顯藍紫色。3、與生物堿沉淀試劑反應(yīng)具有烴胺側(cè)鏈，與生物堿沉淀試劑反應(yīng).根據(jù)沉淀顏色或測定沉淀熔點進行鑒別。常用生物堿沉淀試劑：氯化金試液, 碘試液,碘化汞鉀試液,苦味酸試液等。4、與重金屬離子反應(yīng)(1)與銅離子的反應(yīng)(2)與鈷鹽反應(yīng)5羥肟酸鐵的反應(yīng)具有酰胺結(jié)構(gòu)，被H2O2氧化成羥肟酸，羥肟 酸與FeCl3反應(yīng)生成紫紅色羥肟酸鐵，隨即 變?yōu)榘底厣磷睾谏?。如鹽酸普魯卡因胺。具有酰胺結(jié)構(gòu)的藥物羥肟酸羥肟酸鐵6、水解產(chǎn)物的反應(yīng)(1)苯佐卡因的鑒別試驗(2).鹽酸普魯卡因的鑒別試驗 三雜質(zhì)檢查1、對乙酰氨基酚雜質(zhì)檢查 對乙酰氨基酚中

20、除檢查酸度、氯化物、硫酸鹽、重金屬、水分、熾灼殘渣等一般雜質(zhì)外，還需要檢查：乙醇溶液的澄清度與顏色、有關(guān)物質(zhì)（對氯乙酰苯胺） 、對氨基酚等特殊雜質(zhì)。對乙酰氨基酚以對硝基氯苯為原料合成。(1)乙醇溶液的澄清度與顏色對乙酰氨基酚易溶于乙醇中，如乙醇液不澄清或有顏色，則說明有雜質(zhì)存在。生產(chǎn)工藝用鐵粉作還原劑，如帶入成品，則導(dǎo)致對乙酰氨基酚乙醇溶液產(chǎn)生渾濁。中間體對氨基酚有色氧化物在乙醇中顯橙紅色或棕色。 （2）有關(guān)物質(zhì)（對氯乙酰苯胺） 副反應(yīng)副副反應(yīng)對硝基氯苯為原料合成對乙酰氨基酚時，如發(fā)生這樣的副反應(yīng)就能夠引入對氯乙酰苯胺。副反應(yīng)TLC法 樣品液 對照液對氯乙酰苯胺乙醚溶液（50g/ml） 分離系

21、統(tǒng)硅膠GF254氯仿-丙酮-甲苯（1352） 限量: 點樣量樣品液：200l 點于硅膠GF254薄層板上對照液：40l 判斷在254nm波長紫外燈下觀察，供試品與對照品主斑點Rf值相同的斑點比較,不得超過其大小與顏色。(3)對氨基酚制備中乙酰化不完全或貯存不當(dāng)發(fā)生水解都能引入對氨基酚檢查原理：對氨基酚在堿性條件下，與亞硝基鐵氰化鈉作用，生成藍色絡(luò)合物，與對照液比較判斷對氨基酚的限量。 檢查方法：限量：0.005%四、含量測定1亞硝酸鈉滴定法 原理具有芳伯氨基藥物，在酸性條件下與NaNO2反應(yīng)生成重氮鹽，根據(jù)消耗NaNO2量，計算出含量。潛在芳伯氨基藥物，如芳酰氨基、硝基等，可先水解或還原，得芳

22、伯氨基后，再進行測定。 操作中的主要條件重氮化反應(yīng)屬于分子反應(yīng)滴定液NaNO2及反應(yīng)生成的重氮 鹽都不穩(wěn)定反應(yīng)速度受多種因素影響第一步反應(yīng)速度比較慢，而后兩步反應(yīng)速度則比較快。反應(yīng)速度與藥物結(jié)構(gòu)的關(guān)系重氮化反應(yīng)機制：a. 當(dāng)苯環(huán)上特別是氨基鄰位或?qū)ξ簧嫌形娀鶗r,如吸電基通過誘導(dǎo)效應(yīng)使氨基 上電子云密度降低，從而堿 性降低，游離芳伯胺濃度增 大，所以反應(yīng)速度就快。等可使氨基的堿性降低，重氮化反應(yīng)速度加快。b.當(dāng)在苯環(huán)上有供電基時，則使反應(yīng)速度降低。如 等。供電基能使氨基堿性增強，這樣氨 基成鹽的機會就增大，游離芳伯胺 的濃度就減小，所以反應(yīng)速度就慢。反應(yīng)速度與酸及酸度的關(guān)系a. 酸的種類重氮化

23、反應(yīng)在HBr、HCl、H2SO4中反應(yīng)速度是 HBrHClH2SO4 K1比K2大300倍 用HBr時，生成NOBr量大，反應(yīng)速度快。但HBr價格貴，用鹽酸代替，為加快反應(yīng)速度，需加入KBr（催化劑）。產(chǎn)生HBr與HNO2反應(yīng)，可生成大 量NOBr，加快反應(yīng)速度。b. 鹽酸的用量理論上: 芳胺鹽酸11mol 實際上: 芳胺鹽酸12.56mol原因：強酸性可加速反應(yīng)重氮鹽在酸性下穩(wěn)定酸性下避免副反應(yīng)發(fā)生。 如鹽酸量增加，則反應(yīng)向左進行。如鹽酸濃度太大，反到會使游離芳伯氨的量減?。ǔ甥}），而影響重氮化反應(yīng)速度，使反應(yīng)速度減慢。如酸度不足則沒反應(yīng)的芳胺與生成的重氮鹽產(chǎn)生偶氮氨基化合物，而影響測定結(jié)果

24、。反應(yīng)速度與滴定時溫度的關(guān)系一般，溫度升高反應(yīng)速度加快。但重氮化反應(yīng)所生成的重氮鹽不穩(wěn)定，溫度升高重氮鹽分解速度也加快。另外，溫度高時，滴定液亞硝酸鈉也容易分解逸失，而影響測定結(jié)果。所以，重氮化反應(yīng)應(yīng)在低溫條件下進行。中國藥典規(guī)定：在30C以下，把滴定管尖端插入液面下 處進行滴定。在滴定時一邊攪拌一邊加入大部分標(biāo)準(zhǔn)溶液。到近終點時把滴定管提出液面，用水沖洗后再繼續(xù)滴定至終點。標(biāo)準(zhǔn)溶液在液面下加入，可避免NaNO2揮發(fā)。反應(yīng)速度與滴定速度的關(guān)系重氮化反應(yīng)屬分子反應(yīng)，反應(yīng)速度比較慢，滴定速度不能過快。尤其是近終點時，更要慢慢地滴定。近終點時，游離芳伯胺濃度非常低，反應(yīng)速度就更慢了。所以，每加一滴標(biāo)

25、準(zhǔn)液后，要攪拌15分鐘后再判斷終點。 指示終點的方法重氮化滴定法指示終點的方法有: 永停法 電位法 外指示劑法 內(nèi)指示劑法我國藥典主要采用永停滴定法指示終點 永停法原理：在被測溶液中插入兩個相同鉑電極，在兩個電極間加10200mV電壓，并且在回路中串聯(lián)一個靈敏的檢流計（10A9/格）。當(dāng)用NaNO2滴定時，在終點前回路中沒有電流，電流計指針指零。當(dāng)?shù)竭_滴定終點時，由于溶液中有微過量的NaNO2，使得在兩個電極上發(fā)生氧化還原反應(yīng) 陽 極：導(dǎo)致在兩電極間有電子流動，從而回 路中有電流產(chǎn)生，使得電流計指針發(fā) 生偏轉(zhuǎn)并且不再返回零點。陰 極：電位法在被測溶液中插入甘汞-鉑電極，到達滴定終點時，溶液中稍

26、過量的NaNO2使電位產(chǎn)生突躍，從而指示終點。USP采用這個方法指示終點。外指示劑法淀粉-KI糊劑或試紙原理： 當(dāng)達到滴定終點時，溶液中稍過量 的NaNO2在酸性條件下氧化KI析出I2， I2遇淀粉顯藍色。使用方法：滴定時，把淀粉-KI試液滴在白磁板上，用玻璃棒蘸取少量被滴定的溶液，在白磁板上劃，如果立即出現(xiàn)藍色即已到滴定終點。外指示劑法的缺點：由于滴定的溶液是強酸性，KI遇光能被空氣氧化析出碘，所以，在沒有達到終點時，就有可能呈現(xiàn)藍色，而造成誤判。由于經(jīng)常蘸取溶液進行試驗，可造成滴定液的損失而帶來誤差。方法難掌握。內(nèi)指示劑法內(nèi)指示劑法指示終點，操作簡便，但生成重氮鹽一般都帶有顏色，干擾指示劑

27、顏色變化的觀察，尤其是顏色很深時，更是這樣。在重氮化滴定法中，內(nèi)指示劑法應(yīng)用不是很廣泛。第二節(jié) 苯乙胺類藥物分析一結(jié)構(gòu)特點具有烴胺側(cè)鏈，屬于芳烴胺類藥物。多數(shù)在苯環(huán)上有12個羥基取代基。如在苯環(huán)3、4位上有羥基取代，則為兒茶 酚胺類藥物。代表藥物 腎上腺素去甲腎上腺素二性質(zhì)：1. 易被氧化鄰苯二酚或苯酚結(jié)構(gòu)，易被氧化呈色。3. 具有旋光性 具有手性碳原子，具有光學(xué)活性。2. 顯堿性 具有烴胺側(cè)鏈，顯弱堿性。能與酸成鹽。 三鑒別試驗 1.氧化反應(yīng)區(qū)別腎上腺素和去甲腎上腺素。2. 三氯化鐵反應(yīng)： 在0.1mol/L鹽酸中與Fe3+顯翠綠色，加氨試液后，顯紫色或紫紅色四、腎上腺素中腎上腺酮的檢查（講

28、過）五、含量測定（一） 非水溶液滴定法（二） 溴量法第三節(jié) 氨基醚衍生物類藥物的分析 鹽酸苯海拉明一. 代表藥物1.結(jié)構(gòu)2. 性質(zhì)白色結(jié)晶性粉末水中極易溶解,醇或氯仿中易溶,乙醚或苯中極微溶.見光分解酸性溶液中易分解.紫外吸收二、鑒別1、與硫酸反應(yīng)：顯色2、水解反應(yīng)：3、與硝酸銀反應(yīng)形成白色凝乳狀沉淀4、紫外、紅外特征吸收三、含量測定 （一） 非水溶液滴定法 （原料） （二） 酸性染料比色法 （片劑，見生物堿章） （三）陰離子表面活性劑滴定法 （其注射液） （四）HPLC （片劑）第六章雜環(huán)類藥物的分析The Analysis of Hetero drugs第一節(jié)概述雜環(huán): 環(huán)狀有機化合物的碳

29、環(huán)中夾雜有其他非碳原子的環(huán)狀結(jié)構(gòu)叫做雜環(huán). 非碳原子,又稱雜原子,如N,S,O.共性: (1)雜環(huán)類藥物是合成藥物中所占比例最多 的 一大類藥物. (2)多為五元環(huán)或六元環(huán),單環(huán)或并合環(huán). (3)雜環(huán)結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定,不易開環(huán),其性質(zhì)受雜 原子種類、數(shù)目、位置影響. (4)雜環(huán)上取代基性質(zhì)較活潑,常用于分析. (5)含氮雜環(huán),其堿性的強弱往往用于分析.本章重點介紹吡啶類吩噻嗪類苯并二氮雜卓類. 第二節(jié) 吡啶類藥物分析一、結(jié)構(gòu)分析1.結(jié)構(gòu)：本類藥物均有吡啶環(huán)吡啶 異煙肼 尼可剎米 2.性質(zhì)：（1）母核能與金屬鹽反應(yīng)生成有色沉淀（2）堿性:吡啶環(huán)上氮原子具有叔胺性質(zhì)， pKb=8.8（水中），非水滴定；

30、（3）異煙肼:酰肼基有強還原性,且能與 羰基縮合,氧化還原滴定或比色測定；（4）尼可剎米:酰胺基堿性下可水解,放 出NH(C2H5)2,用于鑒別或凱氏定N 直接蒸餾測定。二、鑒別： 1.母核反應(yīng)： （1）與金屬離子反應(yīng)生成有色沉淀 a.異煙肼,尼可剎米+HgCl2 白色沉淀 b.異煙肼+CuSO4 紅棕色（Cu2O） 尼可剎米+CuSO4+硫氰酸鉀 淡綠色絮 狀沉淀（2）開環(huán)反應(yīng)：適用于a,a未取代，b, 為烷基或羧基取代的。a.戊烯二醛反應(yīng)（knig反應(yīng)） b. 2，4-二硝基氯苯反應(yīng) （Vongerichten反應(yīng)） 2. 酰肼基團的反應(yīng) 常用的氧化劑：I2、Br2、KBrO3、AgNO3

31、（1）還原反應(yīng)： （2）縮合反應(yīng)：與芳醛縮合形成腙， 如香草醛、水楊醛、二甲氨基苯甲醛黃色max=380nm3.與酸堿共熱，以降解產(chǎn)物鑒別用紅色石蕊試紙檢查 1.氧化還原滴定法：常用氧化劑有：碘、溴、溴酸鉀、高錳酸鉀、重鉻酸鉀、NaNO2、硫酸鈰等。其中碘量法，溴量法，溴酸鉀法最常用。（1）剩余碘量法：三、含量測定：以異煙肼為例。操作： 原理： CONHNH2N+ 2I2 +5NaHCO330min38-40度 COONaN+N2+4NaI+5CO2+4H2OI2（過） +2Na2S2O32NaI+Na2S4O6討論：a.本法簡便,但因碘氧化力較弱,反應(yīng)不 易完全。常因反應(yīng)時間、溫度不同有 所

32、差異；b.用于制劑分析時,含有還原性賦形劑時 有干擾；c.化學(xué)計量關(guān)系：(1:4) 0.1mol/L I23.429mg C6H7N3(2) 剩余溴量法： 原理： 0.1mol/LBr2 （溴酸鉀3g+溴化鉀15g水1000ml）在稀HCl反應(yīng)條件下：KBrO3+5KBr+6HCl Br2+6KCl+3H2O操作： Br2（過）+KI I2+2KBrI2+Na2S2O3 2NaI+Na2S4O6討論：ChP63版曾用本法測定異煙肼 a.酸度0.700.86mol/L，所測結(jié)果一致， 高、低都會使結(jié)果偏低； b.放置時間1530min； c.滴定溫度30； d.測定應(yīng)在25min內(nèi)完成(3)溴酸

33、鉀法： 操作： 原理： 等當(dāng)點:稍過量的Br2討論： a.緩緩滴定并充分振搖,防止局部濃度過高終點提前； b.到終點后,補加一滴指示劑,如顏色褪去即可,否則未到終點；c.ChP77、85、90、95、2000均采用本法測定異煙肼（片）；d.化學(xué)計量關(guān)系：3/2T=0.016673/2137.14=3.4292.比色測定： 利用開環(huán)反應(yīng)或酰肼基團與試 劑呈色測定3.非水滴定法： 利用吡啶環(huán)的堿性，進行非水 滴定第三節(jié) 吩噻嗪類藥物分析一、結(jié)構(gòu)分析共同點：（1）硫氮雜蒽母核；（2）含兩個雜原子多環(huán)共軛體系，有UV吸收；（3）S被氧化生成砜或亞砜；（4）與金屬離子絡(luò)合，生成有色物，可比色測定不同點：

34、R，R取代基不同RR鹽類藥名-(CH2)3N(CH3)2-HHCl鹽酸丙嗪-(CH2)3N(CH3)2-ClHCl鹽酸氯丙嗪-CH2CH(CH3)N(CH3)2-HHCl鹽酸異丙嗪二、鑒別 1、特征的紫外吸收： 具有三個峰值205nm、254nm和300nm附近，兩個谷220nm和280nm附近；若被氧化則有四個吸收峰，可用于判斷樣品中有無氧化物。2. 顯色反應(yīng)： (1)氧化劑：H2SO4、溴水、FeCl3、H2O2 (2)（可用于比色測定）三、含量測定 1、非水堿量法：吩噻嗪類藥物母核上氮原子堿性極弱,不能進行滴定,10位取代基上N原子為堿性,可在非水介質(zhì)中以高氯酸標(biāo)準(zhǔn)液，以CV為指示劑。

35、2、鈰量法： 原理:適當(dāng)pH下,用硫酸鈰氧化吩噻嗪進 行測定開始時,吩噻嗪失去一個電子 游離基 （紅色）等電點吩噻嗪失去2個電子 無色， 終點：紅色無色條件：在硫酸性下 優(yōu)點：（1）賦形劑不干擾,復(fù)方制劑中咖啡因、苯丙胺、可待因、巴比妥類藥物等不干擾；（2）反應(yīng)為一價還原（Ce4+Ce3+）,對環(huán)上取代基無作用；（3）用于原料藥，也可用于制劑分析。3、鈀離子比色法： 原理： 吩噻嗪類藥物可與一些金屬離子（如Pd2+）在適當(dāng)pH值的溶液中形成有色的絡(luò)合物，借以進行比色測定。討論：（1）鈀離子試劑： PdCl2和十二烷基硫酸酯鈀鹽. 用PdCl2時，形成的有色絡(luò)合物水中溶 解度小,樣品量大時,產(chǎn)生

36、沉淀.十二烷基硫酸酯鈀鹽,其絡(luò)合物溶解度 大,吸收強度增大（約2倍）.（2）本法優(yōu)點：氧化產(chǎn)物不干擾。4、UV法：(1) 直接分光光度法：(2) 萃取后分光光度法：(3) 二階導(dǎo)數(shù)分光光度法：(4) 萃取-雙波長分光光度法：直接分光光度法：操作： 取10片，除去糖衣后，精稱，研細稱取粉末適量加水、鹽酸溶解過濾，取濾液于249nm處測定。已知：鹽酸異丙嗪=910，即可計算優(yōu)點：不需標(biāo)準(zhǔn)品缺點：儀器精密度要求高測定中注意問題：避光、防止氧化。萃取-雙波長分光光度法： -用于校正樣品中氧化產(chǎn)物對測定影響氯丙嗪的最大吸收波長為254nm,其氧化產(chǎn)物在此波長也有吸收,同時在277nm處氧化產(chǎn)物也有吸收,

37、且其吸收度與在254nm處吸收度相等,而氯丙嗪在此波長處無吸收. A=A254-A277第四章 苯駢二氮雜卓類藥物的分析 一. 結(jié)構(gòu)分析 氯氮卓（1955年合成） 地西泮（1959年合成） 共同點：（1）二氮雜卓環(huán)為七元環(huán)，環(huán)上氮原子具有強堿性，苯基的取代使堿性降低，可進行非水滴定法測定；（2）UV吸收，用于含量測定；（3）環(huán)比較穩(wěn)定，在強酸性下水解，形成相應(yīng)的二苯甲酮衍生物，可用于鑒別和比色測定。（氯氮卓水解生成芳伯胺基；地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸）；（4）本品多為游離堿，不溶于水，而溶于甲醇、乙醇和氯仿中。二、鑒別 1、芳伯胺基反應(yīng)： 氯氮卓水解生成芳伯胺基(重氮化偶合反應(yīng)) 2、茚三

38、酮反應(yīng)： 地西泮水解生成甘氨酸（茚三酮反應(yīng)） 3 、硫酸熒光反應(yīng)： 本類藥物加硫酸，在紫外燈下，呈熒光。 第七章生物堿類藥物的分析The Analysis of Alkaloid第一節(jié)概述一、特點1含氮堿性化合物2沒有共同母核3多數(shù)具有含氮雜環(huán)結(jié)構(gòu)，少數(shù)氮在側(cè)鏈上（如麻黃堿）4. 絕大部分存在于植物體內(nèi)；少數(shù)存在于動物體內(nèi)（如蟾蜍堿）二、堿性與結(jié)構(gòu)的關(guān)系堿性氮原子結(jié)合狀態(tài)和所處化學(xué)環(huán)境電子效應(yīng):誘導(dǎo)效應(yīng)和共軛效應(yīng)立體效應(yīng)與質(zhì)子結(jié)合能力大，堿性強與質(zhì)子結(jié)合能力小，堿性弱N連接供電基團，如-OR、-R時，堿性就強。N連接吸電基團，如-NO2、-COOH 等時，堿性就弱。電子效應(yīng):1季銨類生物堿以季

39、銨形式存在，可以離子化，有類似金屬的性質(zhì)，堿性最強。如：小蘗堿（pKa=11.53）2. 脂肪胺堿性： 仲胺伯胺叔胺 脂肪胺堿性比NH3強3芳胺類N與芳環(huán)相連，N未共享電子對與苯環(huán)的電子形成p-共軛，使N原子上的電子云向苯環(huán)方向移動，這樣就使N原子周圍的電子云密度降低，接受質(zhì)子的能力減小，所以堿性就弱。芳胺類藥物堿性比NH3堿性弱。堿性強弱取決于芳環(huán)上取代基的性質(zhì)。 供電子取代基（如-CH3等）堿性強 吸電子取代基（如-NO2等）堿性弱芳胺類堿性： 伯胺仲胺 叔胺4酰胺類呈酰胺結(jié)構(gòu)，堿性非常弱如：咖啡因Kb=0.710-14（19C）立體效應(yīng)如：苦參堿 兩個N原子N16為酰胺結(jié)構(gòu)，幾乎沒有堿性

40、N1為叔胺結(jié)構(gòu)，它的立體結(jié)構(gòu)便于接 受質(zhì)子，消弱了立體效應(yīng)的影響，堿 性較強。再如：東莨菪堿和莨菪堿 三元氧環(huán)的存在，N上孤電子產(chǎn)生顯著立體效應(yīng)（增強了空間位阻），使N原子不易給出電子，堿性較弱（與莨菪堿比）。（東莨菪堿）（莨菪堿）生物堿堿性強弱一般規(guī)律是：季銨堿類脂肪胺類NH3芳胺、N-芳雜環(huán)酰胺類例外：含-COOH、酚-OH的生物堿，屬于兩 性生物堿。如：嗎啡三、生物堿類藥物的溶解性一般情況下 游離生物堿不溶或難溶于水，易溶于 有機溶劑 生物堿鹽易溶于水，不溶于有機溶劑 游離生物堿，可在稀酸水溶液中成 鹽而溶解。例外：有的生物堿能溶于水，如麻黃堿、 煙堿等具有酸堿兩性的生物堿，可在堿的 水

41、溶液中成鹽而溶解，如嗎啡、茶 堿等堿性較弱的生物堿不能與酸形成穩(wěn) 定的鹽，如咖啡因、利血平等四、生物堿類藥物的分類： 1、苯烴胺類： 氮原子不在環(huán)狀結(jié)構(gòu)內(nèi) 麻黃堿、偽麻黃堿、秋水仙堿2、托烷類（莨菪烷類） 莨菪烷衍生的氨基醇和不同有機酸縮合成酯類的生物堿 硫酸阿托品、氫溴酸山莨菪堿3、喹啉類 硫酸奎寧、硫酸奎尼丁4、異喹啉類 鹽酸嗎啡、磷酸可待因5、吲哚類 硝酸士的寧、利血平6、黃嘌呤類 咖啡因、茶堿第二節(jié)鑒別反應(yīng)一 測定理化常數(shù) 1熔點和衍生物熔點 2比旋度二、光譜法1UV吸收光譜 a. 比較最大（?。┪詹ㄩL和相應(yīng)的吸收度 b. 與對照品的吸收光譜比較一致性 c. 比較吸收系數(shù) 2IR吸收

42、光譜 IR光譜信息豐富三、化學(xué)反應(yīng)1沉淀反應(yīng)： 酸性水溶液中，與重金屬鹽類和大分子酸類等沉淀試劑發(fā)生沉淀反應(yīng)。常用試劑：I2KI 鞣酸 碘化鉍鉀 硅鎢酸 碘化汞鉀2顯色反應(yīng) 生物堿固體 + 顯色試劑顏色 常用：CH2SO4、CHNO3、鉬硫酸3官能團反應(yīng)四、色譜方法 TLC法： 生物堿鹽：拖尾，吸附牢固 改進方法： 1、在展開劑中加入少量的堿性試劑 如：氨、二乙胺 2、硅膠板用堿處理 如：硅膠+NaOH（0.1mol/L） 630mg 60ml 第三節(jié) 含量測定 一、非水堿量法在水中堿性較弱，不能順利地進行中和滴定（滴定突躍不明顯，難以判斷滴定終點）。在酸性非水介質(zhì)中（如gHAc中），則能顯示

43、出較強的堿性，滴定突躍增大，可以順利地進行中和滴定。 1測定方法 供試品：以消耗標(biāo)準(zhǔn)液8ml計算。 溶劑：gHAc，一般用量1030ml， 滴定劑：0.1mol/L HClO4/無水gHAc 溶液 指示劑：結(jié)晶紫 做空白試驗2討論 適用范圍Kb10-8的有機堿鹽。 Kb為10-810-10 選冰醋酸作溶劑Kb為10-1010-12 選冰醋酸和醋酐作溶劑Kb 10-12 選醋酐作溶劑 HA不同，對滴定反應(yīng)的影響也不同。 鹽的滴定置換滴定，即用強酸（HClO4）置換出與生物堿結(jié)合的較弱的酸（HA）.HClO4、HBr、HCl、H2SO4、HNO3 水中酸強度相等。 gHAc中酸強度不相同.HClO

44、4HBrHClH2SO4HNO3其它弱酸a.氫鹵酸鹽的測定氫鹵酸gHAc中酸性較強，對滴定有影響。排除方法：加入過量的HgAc2/gHAc溶液b.硫酸鹽的測定 （以硫酸奎寧的測定為例）直接滴定法 注意硫酸鹽的結(jié)構(gòu)，正確判斷反應(yīng)的摩爾比。兩個N原子喹啉N，屬于芳環(huán)族N，堿性較弱喹核N，屬于脂環(huán)族N，堿性較強在水中硫酸是二元酸，能夠解離出兩個氫離子，即 在冰醋酸中硫酸是一元酸，能夠解離出 一個氫離子，即奎寧與硫酸結(jié)合時，一分子的硫酸能與兩分子的奎寧結(jié)合，即：滴定反應(yīng)如下：+3HClO4+用HClO4直接滴定硫酸喹寧時，摩爾比是13用HClO4直接滴定硫酸阿托品硫酸阿托品（莨菪堿）的結(jié)構(gòu)如下：反應(yīng)的

45、摩爾比是11加入高氯酸鋇消除H2SO4的影響加入高氯酸鋇，摩爾比是12練習(xí)題：硫酸奎寧的測定稱取樣品適量，加gHAc7ml，醋酐3ml與結(jié)晶紫指示液1滴，用0.1mol/L HClO4液滴定至終點，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。已知：1ml 0.1mol/L HClO4液相當(dāng)于24.90mg的硫酸奎寧。求：硫酸奎寧的分子量。（747.00）c. 硝酸鹽的測定 HNO3在gHAc中為弱酸，不影響滴定突躍。 HNO3具有氧化性，應(yīng)采用電位法指示終點或?qū)NO3破壞分解后再進行測定。d.磷酸鹽及有機酸鹽的測定磷酸、有機酸為弱酸，不干擾滴定。 終點指示方法最常用的指示劑是 結(jié)晶紫 Crystal Vio

46、let（CV）紫藍藍綠黃綠黃（堿性區(qū)）（酸性區(qū)）終點的顏色應(yīng)用電位法校準(zhǔn)。 注意事項a. 水分的影響及排除gHAc和HClO4中都含有一定量的水分排除法：配制時，根據(jù)gHAc和HClO4含水量，加入計算量的醋酐。費休氏（Fischer）水分測定法準(zhǔn)確測出gHAc和HClO4中含水量，準(zhǔn)確加入醋酐。b.標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性 水的膨脹系數(shù)是0.2110-3/C gHAc膨脹系數(shù)是1.110-3/C，較大，體積隨溫度變化較大，且還具有揮發(fā)性。 測定樣品與標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液時溫度不同，應(yīng)對濃度進行校正。其中： 0.0011：gHAc的膨脹系數(shù) t0和t1：標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液和測定樣品時的溫度 F0和F1：t0和t1所

47、對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的F值說明：t1-t010C或貯存時間超過30天則在臨用前必須重新標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。校正公式：二、提取中和法1基本原理利用生物堿鹽類可溶于水,游離生物堿不溶于水而溶于有機溶劑的性質(zhì)進行提取，然后進行滴定的方法。即2討論(1)堿化試劑 常用的堿化試劑 NaOH、NH3、Na2CO3、NaHCO3、 Ca(OH)2、MgO等。 對堿化試劑的要求 堿化試劑堿性大于生物堿的堿性，即 堿化試劑的pKb生物堿的pKb 選用堿化試劑時應(yīng)考慮的因素生物堿的化學(xué)性質(zhì)易水解或具兩性，不能用強堿性堿化試劑。阿托品具有酯結(jié)構(gòu)，與強堿接觸時分解；嗎啡具有酚羥基，和NaOH形成酚鹽溶于水，難以用有機溶劑提

48、取。脂肪性物質(zhì)的共存有脂肪性物質(zhì)共存時，不能用強堿性的堿化試劑，以免形成乳化而難以用有機溶劑提取。 NH3優(yōu)點氨水是最常用的堿化試劑。 氨Kb值：1.7510-5 一般生物堿Kb：10-610-9 氨堿性適當(dāng)，能使大部分生物堿游離，又不能使具酯結(jié)構(gòu)或兩性生物堿水解或成鹽。(2) 提取溶劑 提取溶劑要求 不與水相混溶 沸點低，容易揮散除去 對所提取生物堿有極大的溶解度， 而對其它共存物質(zhì)不溶或極少溶解 與堿化試劑或生物堿不起任何化學(xué) 反應(yīng) 常用的提取溶劑氯仿、乙醚，有時也使用混合溶劑氯仿：比重大，易于分離對大部分生物堿都有較大的溶解度不燃燒，使用安全氯仿在堿性下受熱很容易分解，尤其是堿性較強時更

49、容易分解。乙醚：沸點太低，極易揮發(fā)容易被氧化，著火在水中的溶解度較大在乙醚中溶解的生物堿不多乙醚的應(yīng)用不如氯仿廣泛。三、酸性染料比色法1原理:在適當(dāng)pH溶液中,有機堿（B）可以與氫離子成鹽,酸性染料（HIn）可解離成陰離子,陰離子可與有機堿鹽陽離子定量地結(jié)合成有色離子對，而進入到有機相。通過測定有機溶劑提取液的吸收度;或?qū)⒂袡C溶劑提取液酸化或堿化，使與有機堿結(jié)合的酸性染料釋放出來，測定染料的吸收度來測得有機堿的含量。溴麝香草酚藍(BTB)brom thymol bluepH 6.07.6（黃藍）2常用酸性染料磺酞類指示劑溴甲酚綠(BCG)brom cresol greenpH 3.65.2（黃

50、藍）溴酚藍(BPB)bromophenol bluepH 3.84.6（黃紫）3主要條件最主要條件是水相的pH。 要求： 能使有機堿全部以鹽的形式存在，酸性染料能夠解離成離子，以便它們定量地結(jié)合成離子對而轉(zhuǎn)溶于有機相，且又能將剩余的染料完全保留在水相。 pH（酸性）BH+，InBH+In-，有機溶劑提取的是HIn pH（堿性） In-，BH+BH+In-，有機溶劑提取的是B 水相pH的選擇方法：理論計算。實驗求得。用待測的有機堿加入一定的酸性染料，配制成一系列不同pH值的溶液，分別用有機溶劑提取后測定有機溶劑提取液的吸收度，吸收度值最大的溶液所對應(yīng)的pH值就是水相的最佳pH值。四、凱氏定氮法凱

51、氏定氮法藥物分析杜馬氏法元素定量分析范斯萊克法生化分析（氨基氮測定）1、原理 含氮供試品與濃硫酸共熱，供試品中所含氮轉(zhuǎn)變成氨，并與硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸銨，用氫氧化鈉堿化后，釋出氨，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸吸收后，用標(biāo)準(zhǔn)酸液或標(biāo)準(zhǔn)堿液滴定，用空白試驗校正。凱氏定氮法分為3個步驟。(1)消解在凱氏燒瓶中進行。將樣品、Con.H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凱氏燒瓶中一起加熱，有機含N化合物中的N全部轉(zhuǎn)變成NH3并以銨鹽的形式固定(NH4)2SO4、NH4HSO4。H2SO4：氧化劑和炭化劑。 SO2和SO3 消解一般在通風(fēng)櫥中進行。K2SO4：提高H2SO4的沸點，使消解時間

52、縮短。CuSO4：催化劑，使消解速度加快。消解產(chǎn)物：(NH4)2SO4、NH4HSO4(2)蒸餾與吸收用40%的NaOH溶液水蒸氣蒸餾(NH4)2SO4+2NaOHNa2SO4+2NH3+2H2ONH4HSO4+NaOHNaHSO4+NH3+H2O(3)測定 直接滴定法吸收液：用2%硼酸溶液滴定液：0.005mol/L H2SO4液每1ml的0.005mol/L H2SO4液0.1401mg的N指示劑：甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑終點顏色：灰紫色NH3+H3BO3NH3.H3BO32NH3.H3BO3+H2SO4(NH4)2SO4+2H3BO3 剩余滴定法用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或硫酸作吸收液。將蒸餾出來的N

53、H3吸收于定過量的標(biāo)準(zhǔn)酸溶液中，過量的酸用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液滴定。五高效液相色譜法： 1特點： 8090%反相色譜分離，最常用十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）。 硅膠表面僅有2550%硅醇基可與硅烷化試劑作用，在分離極性化合物特別是堿性藥物和生物堿時，裸露的硅醇基和堿性藥物發(fā)生吸附或離子交換作用，而使色譜峰拖尾，保留時間過長，甚至長期保留在色譜柱上。 2三種主要方法：（1）加掃尾劑法：以十八烷基硅烷（ODS）鍵合的硅膠為固定相，在流動相中加入掃尾劑，以抑制或掩蔽固定相表面的游離硅醇基的活性。最常用的掃尾劑是三乙胺（TEA）。（2）用硅膠作固定相法：在不改性的普通硅膠柱上，利用堿性成分與硅醇基相互作用，以

54、高濃度極性有機溶劑，堿性水相緩沖液為流動相分離堿性藥物。（3）用金剛烷基硅烷化硅膠作固定相法：這種固定相表面被一根根短的烴鏈（乙基）連著的烴球（金剛烷）將硅膠表面上未反應(yīng)的硅醇基全部覆蓋，使其不能與極性物質(zhì)作用。六陰離子表面活性劑滴定法 原理：陰離子表面活性劑: 十二烷基磺酸鈉、磺基丁二酸鈉二辛酯在水和有機溶劑所組成的二相中用十二烷基磺酸鈉（或磺基丁二酸鈉二辛酯）的標(biāo)準(zhǔn)溶液為滴定劑，滴定堿性藥物的鹽類。當(dāng)?shù)味ㄖ恋犬?dāng)點時，滴定劑與堿性藥物完全反應(yīng)，生成可溶于有機溶劑的有色配位化合物，溶解進入有機相，使有機相突然變色而指示終點。本法簡便易行，而且藥物制劑中的附加劑對測定無干擾。七、四苯硼鈉雙相滴定

55、法 滴定前： R4N+ + In- R4N+ In (藍色) 滴定中： R4N+ + TPB- R4N+ TPB-（無色） 等當(dāng)點(淺紫色) TPB- + R4N+ In- R4N+ TPB- （無色）原理：水相有機相In-酸性染料如溴酚藍或溴麝香草酚藍TPB-四苯硼鈉的陰離子本法適用于季銨類生物堿第八章維生素類藥物的分析The Analysis of Vitamines概 述維生素是維持人體正常生理機能所必需的生物活性物質(zhì)。如果人體缺少某種維生素，就會引起維生素缺乏癥，而影響人體的正常生理機能。 例如: VA 缺乏夜盲癥 VB1缺乏腳氣病 脂溶性： 水溶性：按溶解性分類VA、VD、VE、VK

56、等B族（VB1、VB2等）、VC 、煙酸、葉酸、泛酸等第一節(jié) 維生素A的分析一結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1 化學(xué)結(jié)構(gòu)R=H VA醇 VA1R= COCH3 VA醋酸酯R= COC15H31 VA棕櫚酸酯結(jié)構(gòu)特點：（1）環(huán)己烯+共軛多烯側(cè)鏈；（2）天然VA側(cè)鏈為全反式；（3）天然來源主要是魚肝油，為醋酸酯，棕櫚酸酯等,目前多由人工合成。 2 .性質(zhì)a.紫外吸收具有共軛多烯側(cè)鏈紫外吸收。最大吸收波長在325328nm，隨VA存在狀態(tài)以及所用的溶劑，最大吸收波長的位置有所不同b.溶解性： 不溶于水 溶于乙醚，氯仿，異丙醇，環(huán)己烷，脂肪和油。共軛多烯側(cè)鏈性質(zhì)非?；顫?c.不穩(wěn)定性維生素A的氧化產(chǎn)物：環(huán)氧化物 維生素A

57、醛 維生素A酸ord.與SbCl3作用 Carr-Price反應(yīng) 鑒別 含量測定二. 鑒別試驗1.三氯化銻反應(yīng) 無水2. 紫外吸收光譜VA的無水乙醇溶液在326nm有最大吸收。3、TLC：確認(rèn)醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，例：VA和其標(biāo)準(zhǔn)品用環(huán)己烷溶解 展開劑：環(huán)己烷乙醚（80：20） 板：硅膠G 顯色：SbCl3T.S. Rf： VA 醇 0.08 VA 醋酸酯 0.41 VA棕櫚酸酯 0.75三含量測定紫外分光光度法三點校正法 1.概述共軛多烯的結(jié)構(gòu)具有特征的紫外吸收。相關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)相似,維生素A最大吸收 波長附近也有吸收，對測定有影響。 Morton和Stubbs等人提出了三點校正法。2.原

58、理（根據(jù)、假定）物質(zhì)對光的吸收具有加和性，即維生素A中的不相關(guān)吸收在310340nm范圍內(nèi)近似一條直線。效價為維生素A1的40%，max345350nm3. 相關(guān)物質(zhì)的吸收a.維生素A的衍生物維生素A2去氫維生素A效價低于維生素A1，max385390nm b.維生素A的氧化產(chǎn)物已介紹。維生素A3去水維生素A c.合成時的中間體側(cè)連有4個雙鍵應(yīng)有 種異構(gòu)體。 目前，包括維生素A在內(nèi)，共發(fā)現(xiàn)有 6種異構(gòu)體。它們是： e.維生素A異構(gòu)體 d.鯨醇 維生素A醇的二聚體，沒有生物活性名 稱順反異構(gòu)max(nm)相對效價新維生素Aa2-順式32875%新維生素Ab4-順31924%新維生素Ac2,4-二

59、順31115%異維生素Aa6-順32321%異維生素Ab2,6-二順32424%維生素A全反式325328100%新維生素Aa新維生素Ab新維生素Ac異維生素Aa異維生素Ab維生素A4. 三個波長的選擇方法 1：維生素A的max 2、3：分別在1兩側(cè) 等波長差法：這兩個波長分別在1兩側(cè)12nm處，即1=328nm; 2 =314nm; 3=340nm等吸光度法：VA在這兩個波長下的吸光度應(yīng)該等于1下的吸光度的 ，即 1=325nm; 2 =310nm; 3=334nm5. 方法Chp收載有2種方法。第一法（適用于酯式維生素A的測定）a.操作方法最大吸收波長確認(rèn) max 在326329nm，第一

60、法測定。 max不在326329nm，第二法測定。b.計算方法測定波長吸光度吸光度比值吸光度比值差計算值規(guī)定值3000.5553160.907(326)3281.000(329)3400.8113600.299計算吸收度比及比值差首先要計算吸收度比值 。然后計算吸收度的比值差。測定波長吸光度吸光度比值吸光度比值差計算值規(guī)定值3000.5553160.907(326)3281.000(329)3400.8113600.299計算校正吸收度吸收度校正公式： 換算因數(shù)定義：每一個 數(shù)值所相當(dāng)?shù)男r。1IU=0.344g全反式維生素A醋酸酯，1g的維生素A醋酸酯就相當(dāng)于 維生素A醋酸酯練習(xí)題：維生素A