分光光度法的具體步驟

1、 HYPERLINK /view/168b8186bceb19e8b8f6ba5b.html /view/168b8186bceb19e8b8f6ba5b.html HYPERLINK /view/923046.htm /view/923046.htm一、開機(jī)開機(jī)前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，確認(rèn)電源是否連接。打開儀器電源開關(guān)，等待儀器自檢通過，自檢過程中禁止打 開樣品室。二、使用儀器自檢結(jié)束后（7個(gè)自檢項(xiàng)目均出現(xiàn)OK字樣），按MAIN MENU鍵（主菜單），屏幕顯示如下5個(gè)功能項(xiàng)：1. Phtometry（定量運(yùn)算）；2.Wavelength Scan （波長(zhǎng)掃描模式）；3.Time Scan（

2、時(shí)間曲線掃描）；4.System（系統(tǒng)校正）； 5.Data display（光度直接測(cè)量模式）。按相應(yīng)選項(xiàng)前的數(shù)字鍵，即可進(jìn)入該選項(xiàng)的下一級(jí)子菜單。目的規(guī)范Cary100紫外可見分光光度計(jì)的使用和維護(hù)。適用范圍本規(guī)程適用于Cary100紫外可見分光光度計(jì)的使用和維護(hù)。職責(zé)研發(fā)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)本文件的起草，實(shí)驗(yàn)室儀器管理員負(fù)責(zé)Cary100紫外可見分光光度計(jì)的日常使用和維護(hù)。系統(tǒng)組成本系統(tǒng)由Cary100紫外可見分光光度計(jì)主機(jī)、Cary Winuv軟件、Dell計(jì)算機(jī)等組成。程序5.1接通電源，打開機(jī)算計(jì)、主機(jī)電源開關(guān)，儀器進(jìn)行自檢。5.2自檢結(jié)束后，雙擊“Cary winUV”圖標(biāo)。主機(jī)同時(shí)

3、會(huì)發(fā)出吱吱的聲響（表示脈沖電源正常工作）。5.3單波長(zhǎng)掃描在 Cary winUV 文件夾下雙擊 Simple Reads” 快捷鍵，進(jìn)入“Simple ReadsOnline”狀態(tài)。在該程序下點(diǎn)擊“Setup”，對(duì)所需的波長(zhǎng)、信號(hào)平均時(shí)間（Ave time （s）、狹縫寬度（SBW（nm）、Y 一軸參數(shù)設(shè)置 等參數(shù)進(jìn)行設(shè)置，設(shè)好后，按“OK”返回。5.3.2在參比池、樣品池中放空白液，關(guān)上蓋板，單擊“Zero”圖標(biāo)，完成較零。5.3.3取出樣品池，用待測(cè)溶液沖洗數(shù)次后，倒入待測(cè)溶液，單擊“READ”讀數(shù)；繼續(xù)放入樣品按“READ”讀數(shù)， 直到全部樣品讀完。5.3.4用編輯菜單完成數(shù)據(jù)整理。5

4、.3.5按Print打印報(bào)告，完成測(cè)試。5.4全波長(zhǎng)掃描5.4.1在Cary winUV文件夾下雙擊“Scan”快捷鍵，進(jìn)入“Scan Online”狀態(tài)。在該程序下點(diǎn)擊“Setup”，進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置頁(yè)面。分別對(duì)“Cary”、“Options”、“Baseline”、“Reports”、Auto Store” 項(xiàng)下參數(shù)進(jìn)行設(shè)置。設(shè)好后，按“OK”返回。5.4.2在參比池、樣品池中放空白液，關(guān)上蓋板，單擊“Baseline”圖標(biāo)，儀器開始對(duì)設(shè)定的波長(zhǎng)范圍進(jìn)行掃描。5.4.3掃描結(jié)束后，將樣品池中空白溶液更換為待測(cè)樣品溶液，單擊START”，輸入所要保存的文件名，按“ OK 后 開始掃描；繼續(xù)放入樣

5、品按“ START ”掃描，直到全部樣品掃描結(jié)束。5.4.4如果需要可以用編輯菜單對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理。5.4.5按Print打印報(bào)告，完成測(cè)試。5.5標(biāo)準(zhǔn)曲線在 Cary winUV 文件夾下雙擊Concentration”快捷鍵，進(jìn)入“ConcentrationOnline”狀態(tài)。在該程序下點(diǎn)擊 “Setup”，進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置頁(yè)面。分別對(duì) “Cary”、“Standards”、“Samples”、“Reports”、Auto Store” 項(xiàng)下參數(shù)進(jìn)行設(shè)置。設(shè)好后，按“OK”返回。5.5.2在參比池、樣品池中放空白液，關(guān)上蓋板，單擊“Zero”圖標(biāo)，完成較零。5.5.3按所設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)樣品順序，單擊

6、“READ”依次對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行測(cè)定。5.5.4標(biāo)樣測(cè)試完畢后，更換待測(cè)樣品，單擊“READ”進(jìn)行待測(cè)樣品測(cè)試。5.5.5讀數(shù)完畢后，如果需要可以用編輯菜單對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理。5.5.6按Print打印報(bào)告，完成測(cè)試。5.6編輯、調(diào)用方法5.6.1新編一個(gè)方法步驟，以Concentration為例。單擊Setup功能鍵，進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置頁(yè)面。 按 Cary ControlStandardsOptionsSamplesReportsAuto store 順序，設(shè)置好每頁(yè)的參數(shù)。然后按 OK 回 到濃度主菜單。單擊View萊單，選擇好需要顯示的內(nèi)容?；具x頃 Toolber； buttons； Graphi

7、cs； Report。單擊Zero放空白到樣品室內(nèi)，按OK。提示：Load blank press ok to read （放空白按 ok 讀）。單擊Start.出現(xiàn) 標(biāo)準(zhǔn)/樣品 選擇頁(yè)。Solutions Available （溶液有效）。此左框中的標(biāo)準(zhǔn)或樣品為不需要重新測(cè)量的內(nèi)容。Selected for Analysis （選擇分析的標(biāo)準(zhǔn)和樣品）。此右框的內(nèi)容為準(zhǔn)備分析的標(biāo)準(zhǔn)和樣品。按ok進(jìn)入分析測(cè)試。Present std1 （1.0 g/l） 提示：放標(biāo)準(zhǔn)1然后按OK鍵進(jìn)行讀數(shù)。Press OK to read.放標(biāo)準(zhǔn)2按OK進(jìn)行讀數(shù)。直到全部標(biāo)準(zhǔn)讀完。 Present Sample

8、1 press OK to read.放樣品1按OK開始讀樣品，直到樣品測(cè)完。為了存標(biāo)準(zhǔn)曲線在方法中，可在測(cè)完標(biāo)準(zhǔn)后，不選擇樣品而由File文件菜單中存此編好的方法。以后調(diào)用此 方法，標(biāo)準(zhǔn)曲線一起調(diào)出。5.6.2運(yùn)行一個(gè)已存的方法（方法中包含標(biāo)準(zhǔn)曲線）。單擊Filef 單擊Open Method選調(diào)用方法名f 單擊Open.單擊Start開始運(yùn)行調(diào)用的方法。如用己存的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在右框中將全部標(biāo)準(zhǔn)移到左框。按OKf進(jìn)入樣品測(cè)試。按提示完成全部樣品的測(cè)試。按Print鍵打印報(bào)告和標(biāo)準(zhǔn)曲線。如要存數(shù)據(jù)和結(jié)果，單擊File文件。選Save Data As.在下面File name中輸入數(shù)據(jù)文件名，單擊

9、Save即可保存。其它軟件包如Scan軟件操作步驟相同，具體內(nèi)容有些差別，請(qǐng)按屏幕提示操作。5.7試驗(yàn)結(jié)束后，取出比色皿，洗凈。關(guān)上主機(jī)蓋板。關(guān)閉電腦，總電源。蓋好儀器防塵罩。5.8清理儀器、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，填寫使用記錄。 HYPERLINK /view/e405520316fc700abb68fc45.html /view/e405520316fc700abb68fc45.html722型分光光度計(jì)的使用方法操作方法（1）將靈敏度旋鈕調(diào)整1檔（放大倍率最?。?。（2）開啟電源，指示燈亮，儀器預(yù)熱20分鐘，選擇開關(guān)置于T（3）打開試樣室蓋（光門自動(dòng)關(guān)閉），調(diào)節(jié)0%T旋鈕，使數(shù)字顯示為00.0。（4）將

10、裝有溶液的比色皿放置比色架中。（5）旋動(dòng)儀器波長(zhǎng)手輪，把測(cè)試所需的波長(zhǎng)調(diào)節(jié)至刻度線處。（6）蓋上樣品室蓋，將參比溶液比色皿置于光路，調(diào)節(jié)透過率100%T旋鈕，使數(shù)字顯示為100.0T（如果顯示不到100%T，則可適當(dāng)增加靈敏度的檔數(shù)，同時(shí)應(yīng)重復(fù)3，調(diào)整儀器的00.0”）（7）將被測(cè)溶液置于光路中，數(shù)字表上直接讀出被測(cè)溶液的透過率（T）值。（8）吸光度A的測(cè)量，參照36調(diào)整儀器的00.0和100.0，將選擇開關(guān)置于A旋動(dòng)吸光度調(diào)零旋鈕，使得數(shù)字 顯示為.000，然后移入被測(cè)溶液，顯示值即為試樣的吸光度A值。（9）濃度C的測(cè)量，選擇開關(guān)由A旋至C,將已標(biāo)定濃度的溶液移入光路，調(diào)節(jié)濃度按鈕，使得數(shù)字

11、顯示為標(biāo)定 值，將被測(cè)溶液移入光路，即可讀出相應(yīng)的濃度值。（10）儀器在使用時(shí)，應(yīng)常參照本操作方法中36進(jìn)行調(diào)00.0和100.0的工作。（11）每臺(tái)儀器所配套的比色皿不能與其它儀器上的比色皿單個(gè)調(diào)換。（12）本儀器數(shù)字顯示后背部，帶有外接插座，可輸出模擬信號(hào)，插座1腳為正，2腳為負(fù)接地線。（13）如果大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)時(shí)，需等數(shù)分鐘后才能正常工作。（因波長(zhǎng)由長(zhǎng)波向短波或短波向長(zhǎng)波移動(dòng)時(shí)，光 能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)較慢，需一段光響應(yīng)平衡時(shí)間。用來(lái)測(cè)量和記錄待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見光的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器，稱為可見分光光度計(jì)。一、原理當(dāng)一束單色光照射待測(cè)物質(zhì)的溶液時(shí)，當(dāng)某一定頻率（或波長(zhǎng)）的

12、可見光所具有的能量（hf）恰好與待測(cè)物質(zhì)分子 中的價(jià)電子的能級(jí)差相適應(yīng)（即AE=E2-E1=hf）時(shí)，待測(cè)物將對(duì)該頻率（波長(zhǎng)）的可見光產(chǎn)生選擇性的吸收。用可 見分光光度計(jì)可以測(cè)量和記錄其吸收程度（吸光度）。由于在一定條件下，吸光度A與待測(cè)物質(zhì)的濃度C及吸收地 長(zhǎng)度l的乘積成正比，即A= KCL所以，在測(cè)得吸光度A后，可采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法、比較法以及標(biāo)準(zhǔn)加入法等方法進(jìn)行定量分析。二、結(jié)構(gòu)722型光柵分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)722型光柵分光光度計(jì)，采用自準(zhǔn)式色散系統(tǒng)和單光束結(jié)構(gòu)，色散元件為衍射光柵，使用波長(zhǎng)為330 800 nm數(shù) 字顯示讀數(shù)還可以直接測(cè)定溶液的濃度。其外形如圖2 39。1數(shù)字顯示器2吸光度調(diào)

13、零旋鈕3選擇開關(guān)4吸光度調(diào)斜濾按鈕5濃度旋鈕6光源室7電源開關(guān)8波長(zhǎng)手輪9波長(zhǎng)刻度板10試樣架拉手11 100%T旋鈕12干燥器圖2 39 722型分光光度計(jì)三、使用方法722型光柵分光光度計(jì)的使用方法（1）操作步驟在接通電源前，應(yīng)對(duì)儀器的安全性進(jìn)行檢查，電源線接線應(yīng)牢固，接地線通地要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置 應(yīng)該正確，然后再接通電源。將靈敏度派或調(diào)至“1”檔（放六倍率最小）。調(diào)彼長(zhǎng)調(diào)節(jié)器至所需波長(zhǎng)。開啟電源開關(guān)，指示燈亮，選擇開關(guān)置于“T”，調(diào)節(jié)透光度“100% ”旋鈕，使數(shù)字顯示“100.0”左右，預(yù)熱20 分鐘。打開吸收地暗室蓋（光門自動(dòng)關(guān)閉），調(diào)節(jié)“0”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0

14、”，蓋上吸收地蓋，將參比溶液置于光 路，使光電管受光，調(diào)節(jié)透光度“100% ”旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0”。如果顯示不到“100”，則可適當(dāng)增加電流放大器靈敏度檔數(shù)，但應(yīng)盡可能使用低檔數(shù)，這樣儀器將有更高的穩(wěn)定 性。當(dāng)改變靈敏度后必須按重新校正“0”和“ 100”。按連續(xù)幾次調(diào)整“00.0”和“ 100”后，將選擇開關(guān)置于A，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使數(shù)字顯示“.000”。然后 將待測(cè)溶液推入光路，顯示值即為待測(cè)樣品的吸光度值A(chǔ)。濃度C的測(cè)量。選擇開關(guān)由“A”旋至“C”，將標(biāo)準(zhǔn)溶液推入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕。使得數(shù)字顯示值為已知標(biāo)準(zhǔn) 溶液濃度數(shù)值。將待測(cè)樣品溶液推入光路，即可讀出待測(cè)樣品的濃度值。