miRNAqRT電子版本

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。miRNAqRT-miRNAqRT-PCR引物Bulge-LoopmiRNAqRT-PCR是銳博生物開發(fā)的成熟miRNA檢測方法，不需熒光探針，只要SYBRGreen即可，具有高靈敏度和特異性的優(yōu)點。檢測包括兩個步驟：(1)基于莖凸環(huán)結(jié)構(gòu)引物的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和(2)實時熒光定量PCR。莖凸環(huán)結(jié)構(gòu)的逆轉(zhuǎn)錄引物能與miRNA3端部分結(jié)合，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，然后特異的正反向引物和SYBRGreen熒光染料共同參與的定量PCR反應(yīng)體系，實現(xiàn)對逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行定量檢測。產(chǎn)品目錄Bulge-LoopmiR

2、NAqRT-PCRPrimer產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載miRNA是一類內(nèi)源性非編碼小RNA分子，長約20-23個核苷酸，預(yù)測有1/3的人類基因被miRNA調(diào)控，并且在物種間有非常高的同源性。研究表明，miRNA參與了幾乎所有生命活動，包括細(xì)胞增殖和凋亡、器官生成、個體發(fā)育、造血、脂肪代謝等。目前，miRNA檢測方法包括Biochip，qPCR，NorthernBlots和micro-array。雖然qPCR是高靈敏性的方法之一，但是基于熒光探針的qPCR檢測價格昂貴。Bulge-LoopTMmiRNAqRT-PCR是銳博生物開發(fā)的成熟miRNA檢測方法，不需熒光探針，只要SYBRGreen即可，

3、具有高靈敏度和特異性的優(yōu)點。檢測包括兩個步驟：(1)基于莖凸環(huán)結(jié)構(gòu)引物的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和(2)實時熒光定量PCR。莖凸環(huán)結(jié)構(gòu)的逆轉(zhuǎn)錄引物能與miRNA3端部分結(jié)合，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，然后特異的正反向引物和SYBRGreen熒光染料共同參與的定量PCR反應(yīng)體系，實現(xiàn)對逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行定量檢測。特異性hsa-let-7家族成員同源性極高（表1），彼此之間僅有單個或數(shù)個堿基的差異。傳統(tǒng)檢測方法對此無能為力，無法區(qū)分各個家族成員。但Bulge-LoopTMmiRNA定量PCR方法采用了具有莖凸環(huán)結(jié)構(gòu)的逆轉(zhuǎn)錄引物以及高特異的miRNA引物套裝，保證了該方法的高度特異性，即使是高度同源的miRN

4、A也能被準(zhǔn)確檢測。表1：hsa-let-7家族：紅色標(biāo)示的是與hsa-let-7a不同的堿基圖1Bulge-LoopTMmiRNA定量檢測has-let-7家族成員的融解曲線針對hsa-let-7家族7個miRNA成員的Bulge-LoopTMmiRNA定量PCR結(jié)果分析表明，hsa-let-7家族各成員的特異性引物對其他成員的干擾極小，絕大部分均可以區(qū)分開來（下表：以7個化學(xué)合成的miRNA為模板，歸一化處理后的定量檢測結(jié)果）。與一般的miRNA檢測方法不同，Bulge-LoopTM莖凸環(huán)結(jié)構(gòu)引物可以在同一個試管進(jìn)行1-45個逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，而不影響檢測效果。Bulge-LoopTMmiRNA實

5、時定量PCR具有檢測范圍廣、更快速，更靈敏，更省錢的優(yōu)點；既能夠準(zhǔn)確定量低至0.1pg總RNA中5個拷貝數(shù)的miRNA，也能夠?qū)崿F(xiàn)從1g總RNA中精確定量檢測高拷貝數(shù)的miRNA，即miRNA的拷貝數(shù)在7個數(shù)量級的動態(tài)變化范圍內(nèi)，均可實現(xiàn)準(zhǔn)確定量的目的。高靈敏度能夠準(zhǔn)確定量0.1pg總RNA中，最低量至5個拷貝的目標(biāo)miRNA，具有一個7個數(shù)量級的動態(tài)變化范圍。比傳統(tǒng)的miRNA定量檢測方法（如Northernblot和micro-array）具有更寬廣的動態(tài)變化范圍，無需擔(dān)心因樣品量少或者miRNA表達(dá)量低而無法精確檢測。圖3高靈敏度：低至5個拷貝的目標(biāo)miRNA都能被檢測出來準(zhǔn)確性Bulg

6、e-LoopTMmiRNA實時定量PCR可以驗證微陣列表達(dá)譜數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。盡管只有少量的樣品，該方法也能有效地檢測出miRNA的表達(dá)量，而且重復(fù)性高。圖2以化學(xué)合成的has-let-7a為模板，進(jìn)行梯度稀釋后的定量檢測Bulge-LoopTMmiRNAqPCRPrimerSet是一個包含了miRNA特異的逆轉(zhuǎn)錄引物，以及PCR正反向引物的套裝。具有莖凸環(huán)結(jié)構(gòu)狀的miRNA特異逆轉(zhuǎn)錄引物以及高度特異的正反向引物使得Bulge-LoopTMmiRNAqPCR反應(yīng)避免了miRNA前體的干擾，而反應(yīng)的模板可以是總RNA或已純化的miRNA分離物。通常U6snRNA或5SrRNA作為miRNA檢測的內(nèi)參

7、，適用于單個或多個樣品不同miRNA的相對定量，而當(dāng)您想知道一個細(xì)胞中miRNA的絕對數(shù)量時，可以使用化學(xué)合成的miRNA您現(xiàn)在的位置：產(chǎn)品服務(wù)產(chǎn)品列表miRNAinhibitormiRNAinhibitor是化學(xué)修飾的miRNA抑制物，通過特異地靶向抑制某個miRNA分子，可以削弱內(nèi)源miRNA的基因沉默效應(yīng)，提高蛋白表達(dá)量，進(jìn)行功能缺失性（loss-of-function）研究，可以用來篩選miRNA靶位點，篩選調(diào)控某一基因表達(dá)的miRNA，篩選影響細(xì)胞發(fā)育過程的miRNA。產(chǎn)品目錄miR-RibomiRNAinhibitor產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載miRNAinhibitor是化學(xué)修飾的m

8、iRNA抑制物，通過特異性抑制某個miRNA分子，可以削弱細(xì)胞中miRNA的基因沉默效應(yīng)，進(jìn)行功能缺失性（loss-of-function）研究。它們可以用來篩選miRNA靶位點，篩選調(diào)控某一基因表達(dá)的miRNA，篩選影響細(xì)胞發(fā)育過程的miRNA。圖1運用EdU方法檢測miRNAinhibitor對細(xì)胞周期的影響miR-RibomiRNAinhibitorNegativeControl產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載miR-RibomiRNAinhibitorNegativeControl選用的是C.elegans的miRNA，經(jīng)過BLAST分析表明其與人、小鼠、大鼠的基因組，以及miRBase14.0

9、中所有miRNA具有最小的同源性，適用于人、小鼠、大鼠的miRNA實驗陰性對照。CustomdesignedmiRNAinhibitor產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載客戶設(shè)計的miRNAinhibitor，可以加上各種修飾miRNAPrecusormiRNAPrecusor是化學(xué)方法制備的miRNA前體分子，可以進(jìn)行熒光標(biāo)記。產(chǎn)品目錄CustomdesignedmiRNAPrecusor產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載miRNA一般由發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70-90個堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過酶加工后形成具有功能的miRNA成熟分子，銳博生物能夠為您化學(xué)合成70nt以下的miRNAPrecusor。miRNAagomi

10、rAgomir是經(jīng)過甲基化、硫代、膽固醇修飾的miRNA激動劑，在動物體內(nèi)具有更高的穩(wěn)定性。產(chǎn)品目錄miR-RibomiRNAagomir產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載Agomir是經(jīng)過甲基化、膽固醇等特殊化學(xué)修飾的特殊的miRNAmimics，在動物體內(nèi)具有更高的穩(wěn)定性和抑制效果。miR-RibomiRNAagomirNegativeControl產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載miR-RibomiRNAagomirNegativeControl選用的是C.elegans的miRNA，經(jīng)過BLAST分析表明其與人、小鼠、大鼠的基因組，以及miRBase14.0中所有miRNA具有最小的同源性，適用于人、小鼠、

11、大鼠的miRNA實驗陰性對照。CustomdesignedmiRNAagomir產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載客戶設(shè)計的miRNAagomir，可以加上各種修飾miRNAantagomirAntagomir是經(jīng)過甲基化、硫代、膽固醇修飾的miRNA拮抗劑，在動物體內(nèi)具有更高的穩(wěn)定性和抑制效果。產(chǎn)品目錄miR-RibomiRNAantagomir產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載Antagomir是經(jīng)過甲基化、硫代、膽固醇修飾的miRNA拮抗劑，適用于動物實驗。miR-RibomiRNAantagomirNegativeControl產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載miR-RibomiRNAantagomirNegative

12、Control選用的是C.elegans的miRNA，經(jīng)過BLAST分析表明其與人、小鼠、大鼠的基因組，以及miRBase14.0中所有miRNA具有最小的同源性，適用于人、小鼠、大鼠的miRNA實驗陰性對照。CustomdesignedmiRNAantagomir產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載客戶設(shè)計的miRNAantagomir，可以加上各種修飾miRNALibrary公司提供miRbase14.0中人的所有miRNAmimics和miRNAinhibitors，經(jīng)濟實惠，使用方便。產(chǎn)品目錄miR-RibomiRNAmimicsLibrary(Rat)產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載miR-RibomiRN

13、AmimicsLibrary(Rat)包含miRBase14.0中Rat的388個miRNAmimics，于96孔板儲存。miR-RibomiRNAmimics和inhibitor文庫可加速生物通路中miRNA的功能研究，這些生物通路包括：代謝途徑(MetabolicPathways)生物發(fā)育(DevelopmentalPathways)細(xì)胞生長(CellGrowth)組織發(fā)育(TissueDevelopment)癌細(xì)胞分化和增殖(CancerCellDifferentiationandDevelopment)干細(xì)胞分化(StemCellDifferentiation)miR-RibomiRN

14、AinhibitorLibrary(Rat)產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載miR-RibomiRNAmimicsLibrary(Rat)包含miRBase14.0中Rat的388個miRNAinhibitor，于96孔板儲存。miR-RibomiRNAmimics和inhibitor文庫可加速生物通路中miRNA的功能研究，這些生物通路包括：代謝途徑(MetabolicPathways)生物發(fā)育(DevelopmentalPathways)細(xì)胞生長(CellGrowth)組織發(fā)育(TissueDevelopment)癌細(xì)胞分化和增殖(CancerCellDifferentiationandDevelo

15、pment)干細(xì)胞分化(StemCellDifferentiation)miR-RiboSelectionmiRNASet-20miRNAinhibitor產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載銳博生物可以根據(jù)您的需要定制miRNA組合文庫（包含miRBase12.0中人、小鼠、大鼠的所有miRNA，需20個以上miRNA起訂）miR-RibomiRNAinhibitorLibrary(Mouse)產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載miR-RibomiRNAmimicsLibrary(Mouse)包含miRBase14.0中Mouse的710個miRNAinhibitor，于96孔板儲存。miR-RibomiRNAmim

16、ics和inhibitor文庫可加速生物通路中miRNA的功能研究，這些生物通路包括：代謝途徑(MetabolicPathways)生物發(fā)育(DevelopmentalPathways)細(xì)胞生長(CellGrowth)組織發(fā)育(TissueDevelopment)癌細(xì)胞分化和增殖(CancerCellDifferentiationandDevelopment)干細(xì)胞分化(StemCellDifferentiation)miR-RibomiRNAmimicsLibrary(Mouse)產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載miR-RibomiRNAmimicsLibrary(Mouse)包含miRBase14.

17、0中Mouse的710個miRNAmimics，于96孔板儲存。miR-RibomiRNAmimics和inhibitor文庫可加速生物通路中miRNA的功能研究，這些生物通路包括：代謝途徑(MetabolicPathways)生物發(fā)育(DevelopmentalPathways)細(xì)胞生長(CellGrowth)組織發(fā)育(TissueDevelopment)癌細(xì)胞分化和增殖(CancerCellDifferentiationandDevelopment)干細(xì)胞分化(StemCellDifferentiation)miR-RibomiRNAinhibitorLibrary(Human)產(chǎn)品說明訂

18、購訂購卡下載miR-RibomiRNAmimicsLibrary(Human)包含miRBase14.0中Human的904個miRNAmimics，于96孔板儲存。miR-RibomiRNAmimics和inhibitor文庫可加速生物通路中miRNA的功能研究，這些生物通路包括：代謝途徑(MetabolicPathways)生物發(fā)育(DevelopmentalPathways)細(xì)胞生長(CellGrowth)組織發(fā)育(TissueDevelopment)癌細(xì)胞分化和增殖(CancerCellDifferentiationandDevelopment)干細(xì)胞分化(StemCellDifferentiation)miR-RibomiRNAmimicsLibrary(Human)產(chǎn)品說明訂購訂購卡下載miR-RibomiRNAmimicsLibrary(Human)包含miRBase14.0中Human的904個miRNAmimics，于96孔板儲存。miR-RibomiRNAmimics和inhibitor文庫可加速生物