噬菌體（96頁）

1、Bacteriophage2021/4/261噬菌體概述1 噬菌體展示技術(shù)23噬菌體載體4 細(xì)菌的檢測與治療5 噬菌體轉(zhuǎn)導(dǎo)2021/4/262第一章 噬菌體概述分類簡史概念結(jié)構(gòu)特性2021/4/2631.1噬菌體概念 噬菌體是感染細(xì)菌、真菌、放線菌、螺旋體等微生物的病毒，只能在活的微生物細(xì)胞中復(fù)制增殖。2021/4/2641.1噬菌體概念噬菌體分裂中的大腸桿菌大腸桿菌電鏡掃描圖 2021/4/265附在細(xì)菌上的噬菌體 噬菌體2021/4/2661.2 噬菌體發(fā)展簡史1896年，英國細(xì)菌學(xué)家Hankin發(fā)現(xiàn)了水中存在抗細(xì)菌現(xiàn)象，并認(rèn)為有種不明物質(zhì)引起了這種現(xiàn)象。1915年，英國Twort在葡萄球

2、菌中發(fā) 現(xiàn)噬菌體。1917年，加拿大人F.d，Herelle在法國巴斯德研究所又獨立發(fā)現(xiàn)痢疾桿菌噬菌體。2021/4/2671.2 噬菌體發(fā)展簡史現(xiàn)象：本來混濁的菌懸液經(jīng)一夜振蕩培養(yǎng)后反而變清。為了弄清原因，他把變清的培養(yǎng)液用細(xì)菌過濾器過濾，并把濾液滴在痢疾桿菌菌液里，奇怪的現(xiàn)象再次發(fā)生。他還建立了空斑滴定法，此法簡單，方便準(zhǔn)確。至今仍是定量測定噬菌體濃度的有效手段，而且為動物病毒定量滴定所借鑒，建立了病毒空斑滴定法。2021/4/2681.3 噬菌體的特性 123個體微小、可通過細(xì)菌濾器無細(xì)胞結(jié)構(gòu)專性細(xì)胞內(nèi)寄生分布廣泛2021/4/2691.3 噬菌體的特性 裂解或不裂解細(xì)菌 456有抗原性

3、可刺激機體產(chǎn)生抗體能夠抵抗熱、低溫、冰凍等2021/4/26109、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022/7/182022/7/18Monday, July 18, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022/7/182022/7/182022/7/187/18/2022 10:27:52 PM11、人總是珍惜為得到。2022/7/182022/7/182022/7/18Jul-2218-Jul-2212、人亂于心，不寬余請。2022/7/182022/7/182022/7/18Monday, July 18, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022/7/18

4、2022/7/182022/7/182022/7/187/18/202214、抱最大的希望，作最大的努力。18 七月 20222022/7/182022/7/182022/7/1815、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。七月 222022/7/182022/7/182022/7/187/18/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022/7/182022/7/1818 July 202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2022/7/182022/7/182022/7/182022/7/181.4 噬菌體結(jié)構(gòu)2021/4/26129、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。20

5、22/7/182022/7/18Monday, July 18, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022/7/182022/7/182022/7/187/18/2022 10:27:52 PM11、人總是珍惜為得到。2022/7/182022/7/182022/7/18Jul-2218-Jul-2212、人亂于心，不寬余請。2022/7/182022/7/182022/7/18Monday, July 18, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022/7/182022/7/182022/7/182022/7/187/18/202214、抱最大的希望，作最大的努力。18

6、 七月 20222022/7/182022/7/182022/7/1815、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。七月 222022/7/182022/7/182022/7/187/18/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022/7/182022/7/1818 July 202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2022/7/182022/7/182022/7/182022/7/181.5 噬菌體的化學(xué)組成核酸：頭部核心，DNA或RNA 作用：噬菌體的遺傳物質(zhì) 蛋白質(zhì)：頭部外殼和尾部 作用：保護(hù)核酸 構(gòu)成外殼和尾部2021/4/26141.5噬菌體的化學(xué)組成噬菌體的一些結(jié)構(gòu)蛋

7、白2021/4/26151.6 噬菌體的分類按照基本形態(tài)可劃分為三類： 蝌蚪狀（T4）、微球狀（ x174） 和絲狀（M13）。2021/4/2616根據(jù)噬菌體結(jié)構(gòu)的不同可將其分為：123無尾部結(jié)構(gòu)的二十 面體有尾部結(jié)構(gòu)的二十 面體線狀體2021/4/26171.6 噬菌體的分類 迄今已知的噬菌體大多 數(shù)是有尾部結(jié)構(gòu)的二十面體，到目前為止，研究者至少對5568種噬菌體進(jìn)行了電鏡觀察，絕大多數(shù)(占96.2% )為有尾噬菌體。2021/4/26181.6 噬菌體分類按遺傳物質(zhì)類型進(jìn)行劃分： 線狀雙鏈DNA（多數(shù)）1.DNA噬菌體： 環(huán)狀單鏈DNA（少數(shù)） 線狀單鏈RNA（多數(shù)）2.RNA噬菌體：

8、線狀雙鏈RNA（少數(shù)）2021/4/26192021/4/26201.6 噬菌體分類2021/4/26211.6 噬菌體分類根據(jù)噬菌體與宿主的關(guān)系：（1） 烈性噬菌體：指感染宿主細(xì)胞后，能夠使宿主細(xì)胞裂解的噬菌體。（2）溫和噬菌體：噬菌體感染細(xì)胞后，將其核酸整合到宿主的核DNA上，并且可以隨宿主DNA的復(fù)制而進(jìn)行同步復(fù)制，在一般情況下，不引起寄主細(xì)胞裂解的噬菌體。2021/4/26221.7 噬菌體侵染細(xì)菌實驗烈性噬菌體侵染細(xì)菌的過程 （1）吸附 （2）注入 （3）增殖 （4）裝配 （5）裂解2021/4/26231.7 噬菌體侵染細(xì)菌實驗2021/4/26241.7 噬菌體侵染細(xì)菌實驗噬菌體

9、的侵染實驗的結(jié)果 證明了DNA是遺傳物質(zhì)2021/4/26251.7 溫和噬菌體與菌細(xì)胞的作用溶菌周期 溶原周期2021/4/2626第二章 噬菌體展示技術(shù) 1985年,Smith第一次成功地將EcoRI核酸內(nèi)切酶基因插入絲狀噬菌體基因p中,并在噬菌體表面表達(dá)出了融合的蛋白。2021/4/26272.噬菌體展示技術(shù)噬菌體？噬菌體展示技術(shù)2021/4/2628Company Logo2.1 噬菌體展示技術(shù)的發(fā)展1988 噬菌質(zhì)粒系統(tǒng)1990 抗體片段的展示1993 展示cDNA文庫1994 研發(fā)了phage two-hybrid技術(shù)1996 首次體內(nèi)in vivo 淘選試驗1998 噬菌體展示載

10、體作為基因?qū)胼d體1999 Combination of phage display with high-density arrays2001 Automated phage display selection2021/4/26292.2 噬菌體展示技術(shù)的原理 以噬菌體或噬菌粒為載體，將目標(biāo)蛋白的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，使外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面，通過篩選表達(dá)有特異肽或蛋白質(zhì)的噬菌體，并得到大量富集，從而獲得目的多肽或蛋白質(zhì)。2021/4/2630LeadHvLinkLvEPIIIPIII基因型表達(dá)型融合蛋白2021/4/2631Company L

11、ogo2.3 噬菌體展示技術(shù)流程2021/4/26322021/4/26332.4 常用的噬菌體展示系統(tǒng)常用的噬菌體展示系統(tǒng)M13絲狀噬菌體T7噬菌體T7噬菌體噬菌體T4噬菌體T4噬菌體2021/4/2634Company Logo2.5 噬菌體展示技術(shù)的優(yōu)點 非展示系統(tǒng) 展示系統(tǒng)2021/4/26352.5 噬菌體展示技術(shù)的優(yōu)點特定分子的基因型和其表型統(tǒng)一在同一個病毒顆粒內(nèi)，將重組蛋白質(zhì)篩選與基因篩選合二為一。被展示的多肽或蛋白可以保持相對獨立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，以利于靶分子的識別和結(jié)合。由于絲狀噬菌體易于在大腸桿菌系統(tǒng)中分離擴增，因此此技術(shù)又合并了選擇能力和擴增能力的優(yōu)勢，使得噬菌體展示

12、技術(shù)成為高效的篩選體系。2021/4/2636操作簡單易行，該技術(shù)采用經(jīng)典的PCR分子克隆等技術(shù)即可操作，在幾周內(nèi)即可篩選106108克隆，篩選獲得抗體庫可以用于原核系統(tǒng)表達(dá)，無需組織培養(yǎng)，極大地降低了成本。篩選獲得噬菌體隨機肽庫具有容量大、體積小、篩選簡便、制備成本低、可多次擴增等突出優(yōu)點。2021/4/26372.6 噬菌體展示技術(shù)的局限性所建庫的容量和分子多樣性受到限制；不是所有的序列都能在噬菌體中獲得很好的表達(dá)；噬菌體展示文庫一旦建成，很難再進(jìn)行有效的體外突變和重組，進(jìn)而限制了文庫中分子遺傳的多樣性。由于噬菌體展示系統(tǒng)依賴于細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)，所以，一些對細(xì)胞有毒性的分子如生物毒素分子，

13、很難得到有效表達(dá)和展示。 2021/4/26382.7 噬菌體抗體庫技術(shù) 它是在PCR技術(shù)和Phage Display的基礎(chǔ)上實現(xiàn)的。把用PCR法得到的抗體基因插入絲狀噬菌體的DNA，在輔助噬菌體的幫助下，噬菌粒包裝成絲狀噬菌體，抗體分子通過與P或P相連，在噬菌體表面的一端或分散分布，然后可直接對噬菌體表面的抗體分子進(jìn)行篩選。2021/4/26392.7 噬菌體抗體庫的分類 (1)根據(jù) 免疫抗體庫 插入基 因片段 非免疫抗體庫 天然抗體庫 的來源 半合成抗體庫 全合成抗體庫 第一個合成的噬菌體抗體庫是Barbas等1992年報道將合成的一小段CDR3片段。 2021/4/2640Company

14、 Logo2.7噬菌體抗體庫的分類（2）按抗體基因的動物來源分類鼠源性抗體庫人源性抗體庫駝源性抗體庫2021/4/2641Company Logo從抗體庫中可篩選多種重要的抗體，如膜蛋白抗原、自身抗原、病毒抗原的抗體。這些顯示出抗體庫技術(shù)的應(yīng)用潛力。2021/4/2642實例Burmester等構(gòu)建了青霉素免疫單鏈抗體庫；Yuan等從7個不同的人種,共47個健康人類的血液中提取基因,構(gòu)建了人源天然單克隆抗體噬菌體抗體庫2021/4/2643第三章 細(xì)菌的檢測與治療 噬菌體感染相應(yīng)細(xì)菌后，迅速繁殖并產(chǎn)生子代噬菌體。 利用該特性可將已知噬菌體加入被檢材料中，如果噬菌體效價增強，就證明被檢樣品中有相

15、應(yīng)細(xì)菌存在。應(yīng)用此原理可以對細(xì)菌進(jìn)行檢測。2021/4/26443.1生物擴增法 原理： 當(dāng)樣品中的待檢細(xì)菌數(shù)目較少時，將不利于噬菌斑的形成，影響檢測結(jié)果。如果加入能夠被噬菌體裂解的輔助菌，被侵染的待檢細(xì)菌裂解釋放出來的子代噬菌體會立刻繼續(xù)吸附裂解輔助菌，從而形成清晰的噬菌斑。因此根據(jù)噬菌斑的數(shù)目檢測樣品中病原菌的含量。2021/4/2645將待檢細(xì)菌的噬菌體與樣品混合，37度培養(yǎng)1h，僅待檢細(xì)菌被噬菌體吸附侵染加入滅病毒劑滅活5min，滅活所有未侵染宿主細(xì)胞的噬菌體；將輔助菌加入到樣品中，中和滅病毒劑，并立刻混合后倒入瓊脂平板進(jìn)行培養(yǎng)釋放出來的子代噬菌體裂解輔助菌；平板中形成清晰可見的噬菌斑

16、。2021/4/26463.1生物擴增法 該方法的關(guān)鍵是選擇合適的滅病毒劑，其中化學(xué)試劑硫酸亞鐵銨最為常用。利用該法已成功的檢測出結(jié)核桿菌、沙門氏菌、李斯特菌、大腸桿菌、綠膿假單胞菌和彎曲桿菌等。2021/4/26473.2熒光標(biāo)記法原理： 熒光標(biāo)記檢測技術(shù)是指利用熒光染料制備熒光噬菌體，利用這種噬菌體的熒光特性來檢測病原菌的方法。以食源性沙門氏菌的檢測為例 雞蛋中檢測到的沙門氏菌 2021/4/2648方法熒光標(biāo)記O-I噬菌體的制備與收集熒光標(biāo)記的O-I噬菌體侵染宿主菌熒光顯微鏡觀察結(jié)果O-I噬菌體液與1SYBRR染料，按101的比例混合,搖勻, 在暗處作用10 min 0.2m過濾收集熒光

17、標(biāo)記的噬體,1PBS緩沖液沖洗23次除去標(biāo)記噬菌體后多余的染料,最后去離子水洗滌濾膜回收噬菌體將待檢樣品于37靜止培養(yǎng)6 h預(yù)增菌后，加入熒光標(biāo)記的O-I噬菌體暗處侵染20min， 加入 4%多聚甲醛終止反應(yīng)，0.2m濾膜過濾收集沙門氏菌陽性者均出現(xiàn)明顯的桿狀熒光，即帶有熒光標(biāo)記的沙門氏菌。2021/4/2649檢測結(jié)果熒光標(biāo)記噬菌體O-I對食品樣品檢測結(jié)果沙門氏菌O-I 噬菌體2021/4/26503.3與生物傳感器聯(lián)用檢測方法原理： 根據(jù)具有專一裂解特點的烈性噬菌體能夠?qū)⑻禺愋缘募?xì)菌裂解釋放出胞內(nèi)物質(zhì)（如酶），通過生物傳感器監(jiān)控細(xì)菌胞內(nèi)某種物質(zhì)的信號變化，即可檢測出致病菌。2021/4/2

18、651 利用這種方法可以在68h內(nèi)檢測出1CFU/100mL的大腸桿菌。與生物傳感器聯(lián)用的噬菌體檢測技術(shù)操作簡單、分析速度快，但由于生物傳感器抗干擾能力差、可靠性低，生物傳感器在病原體檢測中的應(yīng)用受到一定的限制。2021/4/26523.4應(yīng)用報告噬菌體法檢測致病菌原理： 應(yīng)用DNA重組技術(shù)將報告基因首先插入到噬菌體DNA上，將帶有報告基因的噬菌體與待檢樣品作用，隨著報告基因在宿主菌中的表達(dá)，目標(biāo)菌體便可快速得到檢測。2021/4/2653含有報告基因的噬菌體宿主菌2021/4/2654常用的報告基因有： 綠色熒光蛋白基因(gfp)2 細(xì)菌熒光素酶基因(lux)1 -半乳糖苷酶基因(lacZ)

19、3帶有熒光素酶基因(lux)的噬菌體在體外不發(fā)光，但當(dāng)該噬菌體吸附侵染宿主細(xì)菌后，發(fā)光基因得以表達(dá)，因此，噬菌體在宿主細(xì)胞體內(nèi)可以發(fā)光。含有g(shù)fp基因的噬菌體侵染特定的宿主菌后，該基因在宿主菌中表達(dá)并產(chǎn)生綠色熒光蛋白，再用熒光顯微鏡觀察即可檢測待檢樣品中有待檢菌。2021/4/2655檢測實例 E.coli用以上三種基因均可進(jìn)行檢測2021/4/2656噬菌體治療 噬菌體對一些細(xì)菌具有高度的專一性,當(dāng)噬菌體侵染細(xì)菌時,可在細(xì)菌中繁殖并殺死細(xì)菌;而它對動植物沒有毒性。根據(jù)噬菌體的這一特性可對細(xì)菌性疾病進(jìn)行治療。2021/4/2657早期噬菌體治療1917年加拿大微生物學(xué)家Herelle在田野中進(jìn)

20、行了噬菌體治療雞沙門菌感染的研究，并獲得了成功。1919年1921年Herelle在巴黎醫(yī)院給一個患有痢疾的男孩實施抗痢疾噬菌體治療,治療后病人的癥狀消失并康復(fù)。Bruynoghe和Maisin將噬菌體注射到外科手術(shù)傷口部位,治療了葡萄球菌的感染。2021/4/2658噬菌體治療感染的近期研究 3例確診為結(jié)核性口腔潰瘍患者采用分枝桿菌噬菌體軟膏涂抹，均在1周內(nèi)開始愈合，24周全部愈合。劉曉彬等應(yīng)用噬菌體治療腸源性銅綠假單胞菌感染的動物模型，有明顯的治療作用。Matsuzaki等采用噬菌體 MR11治療金黃色葡萄 球菌的感染。2021/4/2659噬菌體治療范圍 噬菌體治療敏感性致病菌的范圍相當(dāng)

21、廣泛，如葡萄球菌屬細(xì)菌、埃希菌屬細(xì)菌、克雷伯菌屬細(xì)菌、變形桿菌屬細(xì)菌、假單胞菌屬細(xì)菌、弧菌屬細(xì)菌、放線菌屬細(xì)菌、分枝桿菌屬細(xì)菌等。 治療的疾病包括化膿性傷口感染、胃腸炎、膿毒癥、骨髓炎、皮炎、膿胸、肺炎、腦炎、細(xì)菌性腹水、痢疾和霍亂等。2021/4/2660噬菌體制劑 活噬菌體制劑1 噬菌體尾部樣細(xì)菌素1 裂解酶制劑2是雙鏈DNA噬菌體在自身復(fù)制晚期合成的一類細(xì)胞壁水解酶，能作用于細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖,破壞細(xì)菌保護(hù)層,所以可作為起殺菌作用的治療藥物。是由噬菌體的碎片組成的高分子質(zhì)量顆粒, 它能消除目標(biāo)菌，從而達(dá)到治療的目的，可由許多來自腸桿菌科和其他革蘭氏陰性細(xì)菌的噬菌體產(chǎn)生。2021/4/26

22、61噬菌體治療較抗生素治療的優(yōu)勢噬菌體呈指數(shù)增殖，自我復(fù)制能力大，每一個裂解周期均能產(chǎn)生大量子代噬菌體細(xì)菌很難對噬菌體產(chǎn)生耐藥性噬菌體藥效持續(xù)時間長準(zhǔn)確選擇相應(yīng)的噬菌體也可作為預(yù)防用制劑噬菌體獲取比較方便，價格比較低廉, 研制開發(fā)的周期短，成本低2021/4/2662噬菌體治療的不足噬菌體的宿主范圍有限2021/4/2663噬菌體治療的不足免疫源性： 噬菌體作為動物體的異源物質(zhì)，會刺激機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生的抗體可能抑制噬菌體使其失去侵染敏感細(xì)菌的能力，限制其抗菌作用。2021/4/2664噬菌體治療的不足噬菌體可釋放一些毒素 編碼大腸桿菌O157的毒力基因stx1和 stx2可以導(dǎo)致發(fā)炎反應(yīng)

23、和提高致病性。2021/4/2665噬菌體治療的發(fā)展趨勢擴大噬菌體譜 改造宿主菌的裂解方式開發(fā)噬菌體抗感染藥物發(fā)展趨勢 大多數(shù)噬菌體都是專一性的對某種細(xì)菌起作用，治療范圍受限，我們可以通過基因工程技術(shù)將多種噬菌體吸附宿主菌的關(guān)鍵基因轉(zhuǎn)化入同一噬菌體中并使之表達(dá)，從而產(chǎn)生一種可以對多種細(xì)菌同時具有裂解作用的新噬菌體。噬菌體通過holin蛋白和細(xì)胞內(nèi)溶素兩種物質(zhì)造成細(xì)菌裂解。通過對產(chǎn)生這兩種物質(zhì)的基因進(jìn)行改造，改造后的噬菌體具有高效殺死細(xì)菌的能力。目前美國4家公司正試圖研制針對一些重要的病原菌,如耐萬古霉素腸球菌(VRE)、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)和食物傳播的病原菌(沙門菌)的噬菌體。

24、Phage Ther-apeutics公司抗葡萄球菌制品已配制完成,其制造工藝已獲FDA批準(zhǔn)。2021/4/2666有的噬菌體基因組較大，可將外來目的DNA替代或插入到噬菌體基因組的某些序列中，使目的DNA隨噬菌體的繁殖而大量復(fù)制和表達(dá)。 第四章 噬菌體載體2021/4/2667噬菌體載體分類1 噬菌體 載體噬菌體載體P1噬菌體載體M13噬體 cos載體和噬菌粒2021/4/2668噬菌體顆粒中 的DNA是一線性 雙鏈DNA分子，長 48 502bp，兩端 各有12個堿基的 5凸出黏性末端 是互補的。進(jìn)入 細(xì)胞的DNA通過 兩端的黏性末端環(huán)化。 噬菌體22021/4/2669 噬菌體性質(zhì)與用途

25、在DNA分子上有多種限制性核酸內(nèi)切酶識別位點，便于多種外源DNA酶切片段的克隆能承載比較大的外源DNA片段，約23kb左右用途:主要用于cDNA文庫構(gòu)建和外源目的基因的克隆。22021/4/2670噬菌體基因圖譜32021/4/2671噬菌體載體的構(gòu)建切去DNA上部分非必需的區(qū)域和多余的限制性核酸內(nèi)切酶切割位點插入可供選擇的標(biāo)記基因21建立噬菌體體外包裝系統(tǒng) 3基本策略42021/4/2672DNA載體的構(gòu)建縮短長度 插入型載體插入位點體外包裝載體長度 37 kb插入片段大小：0 - 14 kb（51 37）插入片段體外包裝2021/4/2673噬菌體克隆載體的主要類型插入型載體2021/4/

26、2674DNA載體的構(gòu)建載體長度 26 kb插入片段最小裝載長度 10 kb（36 26）體外包裝體外包裝插入片段最大裝載長度 25 kb（51 26）2021/4/2675噬菌體克隆載體的主要類型替換型載體2021/4/2676噬菌體標(biāo)記基因 重組體：正常生長非重組體：不生長 重組體：白色的噬菌斑 非重組體:藍(lán)色的噬菌斑 重組體：清晰型透明斑非重組體:渾濁型噬菌斑cI基因lac Z基因red gam基因 重組體：清晰型透明斑非重組體:渾濁型噬菌斑cI基因2021/4/2677噬菌體載體克隆DNA片段步驟2021/4/2678構(gòu)建噬菌體基因組文庫的步驟構(gòu)建噬菌體基因組文庫的步驟包括:獲得含基因

27、的DNA片段與噬菌體克隆載體重組轉(zhuǎn)化受體菌和篩選克隆子2021/4/26792021/4/2680噬菌體載體的應(yīng)用實例1 吉林大學(xué)的韓俊友博士應(yīng)用噬菌體載體TripIEx2構(gòu)建了牛蛙皮膚cDNA文庫,為進(jìn)一步研究牛蛙皮膚組織抗菌肽奠定基礎(chǔ)。2021/4/2681噬菌體載體的應(yīng)用實例2 中山大學(xué)的李艷雯教授應(yīng)用噬菌體載體TripIEx2構(gòu)建了大腸癌細(xì)胞cDNA表達(dá)文庫 該文庫包含了大腸癌HRT18細(xì)胞株所有的腫瘤抗原cDNA，使得獲得大腸癌腫瘤抗原基因更加容易。2021/4/2682噬菌體載體的應(yīng)用實例3 劉運洪等人利用噬菌體載體pC0mb3XS通過噬菌體展示技術(shù)構(gòu)建抗人VEGFRZ（血管內(nèi)皮生

28、長因子受體）噬菌體抗體庫。為抗腫瘤治療研究奠定了基礎(chǔ)。2021/4/2683Section 5 Transduction Application transduction is a common tool of bacterial genetics reseach. It can be used to transfer genes between bacteria, complementary tests,and gene mapping, in particular analysis gene structure through gene transduction 應(yīng)用轉(zhuǎn)導(dǎo)是細(xì)菌的遺傳學(xué)研究

29、中的一種常用研究手段。它可以用來在細(xì)菌間轉(zhuǎn)移基因，進(jìn)行互補測驗，進(jìn)行基因定位，特別是通過共轉(zhuǎn)導(dǎo)方法進(jìn)行基因的精細(xì)結(jié)構(gòu)分析。2021/4/2684Section 5 TransductionTransduction： In the process, The bacteriophage as a media, the bacterial gene is transducted into other bacteria.轉(zhuǎn)導(dǎo)：以噬菌體為媒介，將細(xì)菌基因?qū)肓硪患?xì)菌的過程。2021/4/2685Generalized transductionBacteriophages infect bacterium

30、Bacteriophages replicate in the bacteriumhost DNA breakbacteriophage assemble protein shell which host DNA fragmentation is in itBacteriophage with host gene infects the recepient bacteriaum2021/4/2686Generalized transductionThe original host DNA fragments occur exchange reorganization with recepien

31、t bacteriumAssemble protein shell 2021/4/2687 3Generalized transductionThe use of generalized transduction It can transduct anypart of the bacterial genome2021/4/2688Bactriophage infect donor bactiumBactriophage repication BactriophageassembleBactriophageinfectHomologous recombination2021/4/2689Spec

32、ialized transductionSpecialized transduction Lysogenic prophage loses its dormant state and excised from the host DNA. Rarely the excision process is inaccurate, the phages carry and transfer host genes between bacteria 結(jié)合態(tài)噬菌體切離宿主DNA，攜帶部分宿主基因，再次侵染時與受體菌DNA同源互補及交換重組 。 2021/4/2690Specialized transducti

33、on2021/4/2691Specialized transduction2021/4/2692 In genetic engineering ,we can put the cloned gene into the phage DNA by recombinant DNA technology ,and then wrap it in the phage coat protein ,go to infected host cells in order to prepare genomic library. 在遺傳工程中可以把所要克隆的基因通過重組DNA技術(shù)插入到噬菌體的DNA中，然后通過離體

34、包裝方法把它用噬菌體外殼蛋白包裝起來，再去感染寄主細(xì)胞以制備基因文庫。2021/4/2693The example of transductionVictor Ravin complished the effective plasmid pX3 transduction in Lactobacillus delbrueckii (德氏乳桿菌)by bacteriophage LL-H2021/4/2694The method Preparation of plasmid transformants of L. delbrueckii LKTPurication of phages and th

35、eir DNAsThe restriction endonuclease digestions and agarose gel electrophoresis of DNA samples, blottings, and hybridizations were carried outTransduction2021/4/2695ResultsThe bacterial cells of ATCC 15808 were infected with purified phages propagated in the plasmid transformant strains LKT(pX3) or LKT(pJK650)Negative controls convinced that no viable LKT(pX3) transformant cells were present in LL-H(pX3) or LL-H(pJK650) phage preparations used for transduction.2021/4/2696Phage LL-H transduced plasmid pX3 from strain LKT(pX3) to each of all five tested L. delbrueckii stra