第7章檢疫性植物病毒

1、第7章檢疫性植物病毒檢疫性植物病毒的檢驗(yàn)方法番茄環(huán)斑病毒馬鈴薯帚頂病毒*其他檢疫性植物病毒 南方菜豆花葉病毒、可可枝腫病毒、香石竹環(huán) 斑病毒了解檢疫性植物病毒的種類、分布及重要性，掌握植物檢疫性病毒的檢驗(yàn)方法，掌握番茄環(huán)斑病毒、馬鈴薯帚頂病毒引起病害的癥狀、病原特性、寄主范圍、病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律以及檢驗(yàn)措施。檢疫性植物病毒的檢驗(yàn)方法生物學(xué)檢測技術(shù)血清學(xué)檢測技術(shù)電子顯微鏡技術(shù) 分子生物學(xué)檢測技術(shù)1.生物學(xué)檢測技術(shù)原理： 植物病毒對鑒別寄主或指示植物的特異反應(yīng)。鑒別寄主譜： 對一種病毒有特殊反應(yīng)的一組寄主，一般包括35種不同反應(yīng)類型的寄主植物。一般包括：系統(tǒng)侵染的寄主局部侵染的寄主不受侵染的寄主例

2、1，TMV和CMV在田間煙草植株上都呈花葉癥，為了確定是否有TMV，或是將兩者區(qū)分開，便可通過下列三種植物的接種來確定。2.血清學(xué)檢測技術(shù)原理： 抗原與抗體的特異結(jié)合 方法： 免疫電泳和免疫電鏡、瓊脂雙擴(kuò)散、ELISA等。兩種抗原相同，都與已知的抗血清反應(yīng)瓊脂雙擴(kuò)散反應(yīng)沉淀線判斷圖抗原1抗血清抗原2抗血清不?；袃煞N以上的抗體抗原2抗原1抗原2抗原1抗血清抗血清兩種抗原有一定的親緣關(guān)系但不完全相同3.電子顯微鏡技術(shù) 原理： 以電磁波為光源，利用短波電子流，分辨率達(dá)到0.99，比光學(xué)鏡要高1000倍以上 主要方法： 超薄切片、負(fù)染技術(shù)、免疫電鏡技術(shù)4.分子生物學(xué)檢測方法分子雜交檢測PCR技術(shù)檢

3、測分子雜交在DNA和RNA之間進(jìn)行，依據(jù)是RNA與互補(bǔ)的DNA之間存在著堿基的互補(bǔ)關(guān)系。在一定的條件下，RNA-DNA形成異質(zhì)雙鏈的過程稱為雜交。其中預(yù)先分離純化或合成的已知核酸序列片段叫做雜交探針(probe)，由于大多數(shù)植物病毒的核酸是RNA，其探針為互補(bǔ)cDNA也稱為cDNA探針。植物病毒分子探針具專一性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確快速等優(yōu)點(diǎn) 分子探針的長度一般在5001500核苷酸堿基對（bp） 常用廣譜分子探針，即包括多個(gè)不同?；曰虻暮塑账崞瑪唷CR技術(shù)檢測PCR （Polymerase chain reaction）聚合酶聯(lián)反應(yīng)：將極微量的靶DNA片斷，在4h左右特異性擴(kuò)增上百萬倍。

4、植物病毒主要是RNA病毒，進(jìn)行PCR檢測時(shí)，需要將RNA逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA（cDNA)，再進(jìn)行PCR，即RTPCR技術(shù)。 檢疫性植物病毒的檢驗(yàn)方法番茄環(huán)斑病毒馬鈴薯帚頂病毒*其他檢疫性植物病毒 南方菜豆花葉病毒、可可枝腫病毒、香石竹環(huán)斑病毒了解檢疫性植物病毒病害的種類、分布及重要性，掌握植物檢疫性病原病毒的檢驗(yàn)方法，掌握番茄環(huán)斑病、馬鈴薯帚頂病的癥狀、病原特性、寄主范圍、病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律以及這兩種病害的檢驗(yàn)措施。番茄環(huán)斑病毒Tomato ring spot virus分布： 1936年，美國東部新澤西發(fā)生ToRSV至今已有30多個(gè)國家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)有該病毒，主要集中在北美溫帶地區(qū)，即美國和加拿大

5、。寄主： ToRSV寄主范圍廣，包括雙子葉和單子葉植物的35個(gè)科，自然界，ToRSV主要侵染木本植物，草本及觀賞植物。危害情況： 1975年，ToRSV侵染加拿大安大略的地區(qū)葡萄，產(chǎn)量損失7695，甚至造成絕產(chǎn)。同年，ToRSV 侵染后，紐約葡萄嚴(yán)重減產(chǎn)，奧爾良懸鉤子果實(shí)減產(chǎn)2150。癥狀：番茄癥狀（番茄環(huán)斑病） 枝條卷曲和壞死，嫩葉、葉柄生褐色壞死環(huán)和波紋，果實(shí)受侵染，外表產(chǎn)生環(huán)斑，灰色到褐色栓皮葡萄上的癥狀（葡萄黃脈?。?葉黃脈、斑駁、環(huán)斑，節(jié)間縮短呈蓮蓙狀叢生，植株嚴(yán)重矮化，果實(shí)敗育變小，至絕產(chǎn)，幾年內(nèi)植株漸漸壞死。植株剝皮后，可見增厚的海綿狀韌皮組織及壞死凹陷蘋果上的癥狀（apple

6、union necrosis and decline） 砧木和接穗接合部腫脹，裂開，剝開樹皮，樹皮內(nèi)側(cè)變厚，多孔，愈合斑連接處有不明顯的線，在這條線相對方向的形成層表面也有一類似的線，沿著這條線有一小的深溝或一條光滑的細(xì)縫，壞死的樹皮覆蓋在溝或縫上。 葉變少，變小，黃化，嫩枝呈束狀叢生，果實(shí)較小，果皮顏色加深。樹皮顏色淡紅桃樹和李屬其它樹種上的癥狀（桃樹黃芽花葉）：沿中脈產(chǎn)生扁橢圓形羽緣狀病斑，由灰綠色變?yōu)闇\綠色，芽發(fā)育成為小而變形的叢生葉，成淺黃色而死亡。（桃樹莖痘?。簶淦ぷ兒瘢l(fā)軟，海綿狀，剝開樹皮，樹干上出現(xiàn)凹陷的痘斑和溝槽。葉片褪綠，葉芽發(fā)育推遲，落葉提前，果實(shí)畸形，果味變異，提前成

7、熟和脫落。復(fù)盆子上的癥狀：侵染當(dāng)季不表現(xiàn)癥狀，第二年葉片表現(xiàn)黃色斑駁，條紋或脈褪綠，葉片生長推遲，病株表現(xiàn)不結(jié)果或形成易碎果懸鉤子上的癥狀：植株矮化，小果并減產(chǎn)，幼齡植株葉片出現(xiàn)褪綠環(huán)斑。第二年，葉片癥狀不明顯，但新葉出現(xiàn)偏上性，早落。第三年有1080的果枝死亡。病原： 番茄環(huán)斑病毒 學(xué)名 Tomato ring sopt virus （ToRSV） 異名 煙草環(huán)斑病毒2號 Tomato ring spot virus No.2 煙病毒13號 Nicotiana virus 13 桃黃芽花葉病毒 Peach yellow bud mosaic virus 葡萄黃脈病毒 Grape yellow

8、 vein virus 分類地位 線蟲傳多面體病毒組 R/1:2.8/44+2.4/41:S/S:S/C,Ve/Ne Nepovirus病毒特性： 等軸對稱球形，直徑28nm，在煙草汁液中，58 下10min、20 下2d、4 下21d、20 下幾個(gè)月以后失去侵染力。接種的煙葉和黃瓜子葉汁液，稀釋限點(diǎn)為103，而系統(tǒng)侵染的煙草汁液，稀釋限點(diǎn)低于101。 生物學(xué)特性： 穩(wěn)定性差，難純化，純化的病毒制劑中有兩類粒體：無RNA的蛋白外殼的T粒體和侵染性核蛋白的B粒體，B粒體具侵染性，二者血清學(xué)性質(zhì)有差異。T粒體分子量3.2106，沉降系數(shù)53S，B粒體分子量5.5106，沉降系數(shù)126128S。B粒

9、體RNA分子量2.3106 ，占粒體重量的40生理分化：煙草株系：以煙草環(huán)斑病毒2號為代表，是典型株系。自然發(fā)生在溫室的煙草幼苗，主要分布在美國東部。 桃黃芽花葉株系：自然發(fā)生在杏、扁桃、桃上，分布在美國西部。此株系與Price 的煙草株系較難區(qū)分。因?yàn)閮芍晗翟诓荼炯闹魃系陌Y狀相似，血清學(xué)上無區(qū)別，而且大多數(shù)分離物在桃樹上都產(chǎn)生黃芽花葉癥狀 葡萄黃脈株系：自然發(fā)生在葡萄上，在草本寄主上引起的癥狀與上述兩個(gè)株系類似，但可在豇豆上引起頂枯，血清學(xué)上也與上述兩個(gè)株系不同，主要分布在美國西部 其他株系：李屬植物上不同分離物 （李褐線分離物 Prune brown line，李莖環(huán)孔分離物Prunus

10、stem pitting和櫻桃葉斑駁分離物Cherry leaf mottle）存在血清學(xué)差異，但差異不明顯。櫻桃葉斑駁分離物不能由Xiphinema californicum傳播 傳播： 田間傳播介體是劍線蟲屬，其中Xiphinema americanum優(yōu)勢種群。成蟲和三齡幼蟲都能傳毒，在病根部飼毒1h可獲得病毒，而后在1h內(nèi)又能將病毒傳給接種植物。 由繁縷、千日紅、懸鉤子、大豆、弗吉尼亞草莓、煙草、番茄和紅三葉草等植物的種子傳播。 雜草是重要的田間毒源。 遠(yuǎn)距離傳播依靠植物的種子和苗木調(diào)運(yùn)進(jìn)行檢驗(yàn)方法：生物學(xué)檢測：黃瓜：局部褪綠斑，而后產(chǎn)生系統(tǒng)褪綠和斑駁莧色藜和昆諾阿藜：小局部褪綠斑，后

11、系統(tǒng)侵染頂端枯死菜豆：局部褪綠斑或壞死斑，系統(tǒng)癥狀為皺縮和頂葉壞死煙草：局部壞死或環(huán)斑，幼葉系統(tǒng)褪綠環(huán)紋和斑紋，后隱癥矮天牛：局部壞死斑，幼葉壞死和枯萎番茄：局部壞死斑，幼葉產(chǎn)生系統(tǒng)斑駁和壞死豇豆：局部褪綠斑或壞死斑，引起系統(tǒng)侵染，植株頂端壞死形態(tài)學(xué)檢測：浸漬法制樣，電鏡觀察病毒粒體形態(tài)，測量粒體大小。 血清學(xué)和PCR檢測：瓊脂雙擴(kuò)散、免疫電鏡、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)等。檢疫和防治：禁止從病區(qū)引進(jìn)大豆種子、煙草種子、唐菖蒲球莖及桃、杏、櫻桃、葡萄和草莓等植物的無性材料。病區(qū)應(yīng)采用無毒種子和苗木，施用藥劑消滅介體線蟲，清除雜草減少毒源。馬鈴薯帚頂病毒Potato moptop virus分布： 196

12、5年首先在英國發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)已傳入歐美多個(gè)國家。日本（1981）、美國（2002）報(bào)道。中國未見報(bào)道。寄主：馬鈴薯是唯一的自然寄主。人工接種可侵染多種寄主植物。危害性： 在英格蘭，北愛爾蘭和蘇格蘭受侵薯塊的產(chǎn)量損失可達(dá)26。此外該病為害后，病斑常影響到薯塊的外表，是商品價(jià)值降低。馬鈴薯在儲藏期間，若儲藏不當(dāng)，病斑在薯塊上擴(kuò)展，進(jìn)一步影響馬鈴薯的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。1966年和1967年P(guān)MTV在秘魯曾引起產(chǎn)量損失3040和75。癥狀： 植株：-帚頂、奧古巴花葉和褪綠V型紋 帚頂癥狀：節(jié)間縮短，葉片簇生，植株矮化，束生奧古巴花葉：不規(guī)則黃色斑，環(huán)紋和線狀紋褪綠V型紋：褪綠V型紋癥狀 薯塊上的癥狀 初生癥狀（Pr

13、imary Symptom）當(dāng)年受侵薯塊所表現(xiàn)出的癥狀。薯表輕微隆起，產(chǎn)生壞死或部分壞死，直徑為15厘米的同心環(huán)紋，這種環(huán)紋并不局限于某一部分，?；ゾ墼谝黄鸹蚍珠_。將薯塊切開，內(nèi)部表現(xiàn)為壞死弧紋或條紋，它們向薯塊內(nèi)部延伸，但這種延伸并不一定來自薯表的環(huán)紋，其延伸程度似乎與薯表的癥狀嚴(yán)重程度有關(guān)。 次生癥狀：由病的母薯長成的植株所結(jié)的薯塊的癥狀?；?、大的龜裂，網(wǎng)絡(luò)狀小龜裂，橫切面上，表面的壞死環(huán)紋環(huán)繞薯塊，內(nèi)部的壞死和這些效相連接，髓部的壞死斑常延伸至薯塊端部的生殖根上。 病原：馬鈴薯帚頂病毒 學(xué)名 Potato mop-top virus異名 Chlorogenus solani, Pota

14、to virus 11, Solanum virus 15 potato witches broom agent分類地位 小麥土傳花葉病毒組(Furovirus)成員病毒特性：直桿狀，100300nm1620nm，沉降系數(shù)為126S、171S和236S。外殼蛋白亞基呈螺旋狀排列，螺距2.42.5nm，單鏈RNA，病毒的致死溫度為7580，稀釋限點(diǎn)為103104，體外存活期10周以上（20）。 核酸：可能為單鏈RNA發(fā)病規(guī)律：可汁液傳染，50的病塊莖可將病毒傳給下一代。田間主要通過馬鈴薯粉痂病菌（Spongospora subterrance）傳播，病毒在休眠孢子囊中，至少存活1年，孢子囊萌發(fā)產(chǎn)生的游動孢子侵入寄主時(shí)，將病毒粒體帶入馬鈴薯根部。病害在多雨年份發(fā)生較重。遠(yuǎn)距離通過帶病或帶菌的種薯調(diào)運(yùn)而傳播。檢驗(yàn)方法：隔離試種，觀察系統(tǒng)癥狀。用病葉汁液接種鑒別寄主。 莧色藜：產(chǎn)生局部壞死壞斑或細(xì)環(huán)紋，可擴(kuò)大到全葉。 普通煙：在20以下時(shí)，接種葉上產(chǎn)生局部壞死或褪綠環(huán)斑。檢疫和防治：（1）實(shí)施