維生素類藥物的分析最新

1、 第六章 維生素類藥物的分析第一節(jié) 概 述第二節(jié) 維生素A的分析 第三節(jié) 維生素C的分析 第四節(jié) 維生素E的分析維生素類藥物的分析最新維生素是維持人體正常生理機能所必需的生物活性物質(zhì)；主要用于機體的能量轉(zhuǎn)移和代謝調(diào)節(jié)；大多數(shù)維生素人體不能合成?；瘜W結構： 醇、酯、酸、胺、醛、酚如果人體缺少某種維生素，就會引起維生素缺乏癥，而影響人體的正常生理機能。 例如: VA 缺乏夜盲癥 VB1缺乏腳氣病第一節(jié) 概 述 這類藥物的分析方法很多，有生物法、微生物法、化學法和物理化學法，但目前常用的分析方法是化學法或物理化學法。維生素類藥物的分析最新公元前3500年:古埃及人發(fā)現(xiàn)能防治夜盲癥的物質(zhì)，也就是后來

2、的維A;1600年:醫(yī)生鼓勵以多吃動物肝臟來治夜盲癥;1747年:蘇格蘭醫(yī)生林德發(fā)現(xiàn)檸檬能治壞血病，也就是后來的維C。1831年:胡蘿卜素被發(fā)現(xiàn);1905年:甲狀腺腫大被碘治愈;1912年:波蘭化學家馮克為維生素命名（Vitamin);1915年:科學家認為糙皮病是由于缺乏某種維生素而造成的;1916年:維生素B被分離出來;1917年:英國醫(yī)生發(fā)現(xiàn)魚肝油可治愈佝僂病，隨后斷定這種病是 缺乏維D引起的。 維生素發(fā)展史維生素類藥物的分析最新1920年-發(fā)現(xiàn)人體可將胡蘿卜轉(zhuǎn)化為維生素A;1922年-維E被發(fā)現(xiàn);1928年-科學家發(fā)現(xiàn)維B至少有兩種類型;1933年-維E首次用于治療;1948年-大劑量

3、維C用于治療炎癥;1949年-維B3與維C用于治療精神分裂癥;1954年-自由基與人體老化的關系被揭開;1957年-Q10多酶被發(fā)現(xiàn);1969年-體內(nèi)超級抗氧化酶被發(fā)現(xiàn);1970年-維C被用于治療感冒;1993年-哈佛大學發(fā)表維生素E與心臟病關系的研究結果。 現(xiàn)被列為維生素的有60余種，對維持人體健康和促進發(fā)育至關 重要的有20余種,其中的14種及其制劑可作為藥物使用！維生素類藥物的分析最新 VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性:水溶性: VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、葉酸、煙酸、泛酸等。分類按溶解度分:維生素類藥物的分析最新第二節(jié) 維生素A的分析一結構與性質(zhì) 1.

4、化學結構R=H VA醇 VA1R= COCH3 VA醋酸酯R= COC15H31 VA棕櫚酸酯結構特點： （1）環(huán)己烯+共軛多烯側鏈； （2）天然VA側鏈為全反式； （3）天然來源主要是魚肝油，為醋酸酯，棕櫚酸酯等,目前多由人工合成。維生素類藥物的分析最新 維生素A具有多種生理功能，對視力、生長、上皮組織及骨骼的 發(fā)育、生育都是必需的。 效用 ： 防止夜盲癥和視力減退，有助于對多種眼疾的治療（維生素A可促進眼內(nèi) 感光色素的形成）； 有抗呼吸系統(tǒng)感染作用； 有助于免疫系統(tǒng)功能正常； 生病時能早日康復； 能保持組織或器官表層 的健康； 有助于祛除老年斑； 促進發(fā)育，強壯骨骼，維護皮膚、頭發(fā)、牙齒、

5、牙床的健康； 外用有助于對粉刺、膿包、癤瘡，皮膚表面潰瘍等癥的治療； 有助于對肺氣腫、甲狀腺機能亢進癥的治療。 維生素類藥物的分析最新 2 .性質(zhì) a.紫外吸收 具有共軛多烯側鏈紫外吸收； 最大吸收波長在325-328nm，隨VA存在狀態(tài)以及所用的溶劑，最大吸收波長的位置有所不同。 b.溶解性： 不溶于水 溶于乙醚，氯仿，異丙醇，環(huán)己烷，脂肪和油。c.不穩(wěn)定性（易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應）共軛多烯側鏈性質(zhì)非?；顫?鯨 醇 維生素類藥物的分析最新維生素A的氧化產(chǎn)物：.環(huán)氧化物.維生素A醛.維生素A酸or維生素類藥物的分析最新O2H+重排OOVA酸VA醛呋喃型氧化物（無生物活性）維生素類藥物的分析

6、最新+H+-H+去水VA（VA3）烯丙型醇遇酸易發(fā)生脫水反應維生素類藥物的分析最新d.與SbCl3作用卡爾-普賴斯（Carr-Price）反應 應用： 鑒別 含量測定 CHCl3條件:無水無醇水可使SbCl3水解成SbOCl乙醇可與正碳離子作用，使正電荷消失維生素類藥物的分析最新二.鑒別試驗 1.三氯化銻反應 藍色 紫紅 VA與三氯化銻(SbCl3)中存在的親電試劑氯化高銻（SbCl5）作用形成不穩(wěn)定的藍色正碳離子。維生素類藥物的分析最新 2.紫外吸收光譜 VA的無水乙醇溶液在326nm有最大吸收。max為326nm 一個吸收峰max為350390nm 三個吸收峰（VitA3）維生素類藥物的分

7、析最新3.TLC 確認醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯. 例：VA和其標準品用環(huán)己烷溶解 展開劑：環(huán)己烷乙醚（80：20） 板：硅膠G 顯色：SbCl3T.S.（藍色斑點） Rf： VA 醇 0.08 VA 醋酸酯 0.41 VA 棕櫚酸酯 0.75維生素類藥物的分析最新 三.含量測定1.概述 共軛多烯的結構具有特征的紫外吸收。 相關物質(zhì)結構相似,維生素A最大吸收,波長附近 也有吸收，對測定有影響。 Morton和Stubbs等人提出了三點校正法。紫外分光光度法三點校正法2.原理（根據(jù)、假定）. 物質(zhì)對光的吸收具有加和性，即維生素A中的不相關吸收在310340nm范圍內(nèi)近似一條直線。維生素類藥物的分

8、析最新效價為維生素A1的40%，max345350nm3.相關物質(zhì)的吸收a.維生素A的衍生物.維生素A2（去氫維生素A）維生素A3（去水維生素A）效價低于維生素A1，max385390nmb.維生素A的氧化產(chǎn)物(已介紹)c.合成時的中間體d.鯨醇 維生素A醇的二聚體，沒有生物活性.維生素類藥物的分析最新 側連有4個雙鍵應有 種異構體。目前，包括維生素A在內(nèi)，共發(fā)現(xiàn)有6種異構體。它們是：e.維生素A異構體新維生素Aa新維生素Ab新維生素Ac異維生素Aa異維生素Ab維生素A維生素類藥物的分析最新名 稱順反異構 max(nm)相對效價新維生素Aa2-順式32875%新維生素Ab4-順31924%新維

9、生素Ac2,4-二順31115%異維生素Aa6-順32321%異維生素Ab2,6-二順32424%維生素A全反式325328100%維生素類藥物的分析最新 4.三個波長的選擇方法 1：維生素A的max; 2、3：分別在1兩側 .等波長差法：這兩個波長分別在1兩側12nm處，即1=328nm; 2 =314nm; 3=340nm.等吸光度法：VA在這兩個波長下的吸光度應該等于1下的吸光度的6/7 ，即: 1=325nm; 2 =310nm; 3=334nm維生素類藥物的分析最新5.方法Ch.P收載有2種方法。第一法（適用于酯式維生素A的測定）a.操作方法b.計算方法 .最大吸收波長確認 max在

10、326-329nm，第一法測定; max不在326-329nm，第二法測定。計算吸收度比（如300，316，328，340，360nm處)及比值差首先要計算吸收度比值 ;然后計算吸收度的比值差 max在326-329nm間； 差值不超過正負0.02時；則直接帶入式子計算！維生素類藥物的分析最新最大吸收波長是否在326-329之間是否計算吸收度比值之差是否超過0.02第二法（皂化）是否計算A328（校正）A328維生素類藥物的分析最新 計算校正吸收度（最大吸收峰在326-329nm間，差值有些超過正負0.02時）吸收度校正公式：.換算因數(shù) 定義：每一個 數(shù)值所相當?shù)男r（維生素A含量）。(1IU

11、=0.344g全反式維生素A醋酸酯)維生素A醋酸酯換算因數(shù)：標示量為作品標簽上注明的每膠丸含有的VA醋酸酯的國際單位數(shù)。判斷選用吸光度：維生素類藥物的分析最新 例：維生素AD膠丸中維生素A的含量測定。已知：平均膠丸重為0.0815g；維生素A的標示量為10000IU/丸；取樣： ；測定數(shù)據(jù)如下表：波長吸收度比值規(guī)定值比值差3000.3740.5740.5550.0193160.5840.8960.907-0.013280.6521103400.5340.8190.8110.0083600.2110.3390.2990.04求：維生素A的標示百分含量。維生素類藥物的分析最新首先要求樣品的 ： 根

12、據(jù)比爾定律：A為測得吸收度or校正吸收度。所以： 這樣所以，維生素A的標示含量維生素類藥物的分析最新第二法（皂化法）： 消除植物油干擾：適合VA醇。維生素類藥物的分析最新 練習：已知某藥物結構式為：1.簡述該藥物結構和性質(zhì)之間的關系。2.根據(jù)其結構特點，設計合理的鑒別方法。3.試設計一條從簡單化合物合成該藥物的路線，并分析可能 引入的雜質(zhì)及其定量分析方法。維生素類藥物的分析最新第三節(jié) 維生素C的分析一.化學結構結構特點： 維生素C分子中具有2個手性C原子，具有4種光學異構體。其中生理活性最強的是L（+）-抗壞血酸.L(+)-抗壞血酸D(-)-抗壞血酸D(-)-異抗壞血酸L(+)-異抗壞血酸 具

13、有內(nèi)酯結構。 堿性下可水解。具有烯二醇基。還原性，能夠被氧化成去氫抗 壞血酸。酸性,能與堿成鹽。維生素類藥物的分析最新二.性質(zhì)與鑒別試驗 1.酸性 烯二醇結構酸性。 C3-OH， pKa=4.17(共軛效應) C2-OH，pKa=11.57(鄰位羰基) 一元酸:能與NaHCO3作用生成鈉鹽。 2.還原性 烯二醇基還原性。如：（無色）維生素類藥物的分析最新3.水解反應 L-二酮古羅糖酸 ( 無生物活性)4.熒光反應5.糖的性質(zhì) VC的結構很象糖結構，具有糖的性質(zhì)。50維生素類藥物的分析最新這個反應的摩爾比是12。三.含量測定 1.碘量法 a.原理b.操作 終點顏色：無色藍色 1ml 0.1mol

14、/L碘液1ml8.806mg C6H8O6.維生素類藥物的分析最新c.討論 .反應條件 酸性:使VC在空氣中氧化速度減慢。 .溶劑 新沸放冷的水。減少水中溶解氧的影響。 還原性物質(zhì)的影響及排除 VC注射液中常加有亞硫酸鹽如NaHSO3作為抗氧劑. 排除：加入丙酮或甲醛。+維生素類藥物的分析最新 2.2,6-二氯吲哚酚滴定法 原理： 在酸性下,氧化型是紅色的;還原型是無色的;酸性下直接用2,6-二氯吲哚酚滴定，用滴定劑自身的顏色變化指示終點，不需要另外的指示劑。氧化型（紅色）還原型(無色)+所以，終點的顏色是溶液由無色變?yōu)榧t色。維生素類藥物的分析最新3.快速酶電極法原理： VC溶液與酶作用時用氧

15、電極測定氧的消耗量，就可求出溶液中VC的含量。特點： 準確度高、所需時間短、操作簡便、試劑消耗低，并具有良好的線性關系，是工業(yè)測試的一種新手段。維生素類藥物的分析最新4. 快速比色法原理： 維生素C與Fe(III)一鄰菲羅啉復合物反應生成Fe()一鄰菲羅啉復合物，后者在510nm波長處有最大吸收。用比色法直接測定維生索C注射液的含量。特點： 與碘量法比較，本法操作簡便、快速、靈敏，可作為醫(yī)院、藥廠對維生素C注射液及其中間品質(zhì)量監(jiān)測的參考。維生素類藥物的分析最新第四節(jié) 維生素E的分析一化學結構與性質(zhì)名稱：消旋-生育酚醋酸酯母核：苯駢二氫吡喃衍生物 苯環(huán)上有一乙?；姆恿u基側鏈：脂肪烷烴維生素類藥

16、物的分析最新 1、硝酸反應： 本品，無水乙醇溶解，加硝酸，75加熱約15分鐘，顯橙紅色。 2、水解后氧化反應： 本品，在堿性條件下水解，得-生育酚，在聯(lián)吡啶和三氯化鐵試液的作用下，反應產(chǎn)生血紅色配離子。3、UV吸收： VE的0.01%無水乙醇液：max=284nm,min=254nm.二. 鑒別試驗 維生素類藥物的分析最新 三、雜質(zhì)檢查 檢查游離生育酚: Ch.P 取0.1g樣品，按鈰量法用Ce(SO4)2 (0.01mol /L)滴定，以二苯胺為指示劑，消耗Ce(SO4)2液不得超過1.0ml。維生素類藥物的分析最新 （一）鈰量法 1、原理： VE用硫酸加熱回流，水解成生育酚，用硫酸鈰定量地

17、 氧化為對一生育醌，過量的硫酸鈰氧化二苯胺指示劑而指示滴定終點。 終點：亮黃灰紫;空白試驗. 2、反應條件 （1）VE在H2SO4酸性條件下水解為宜。 堿性溶液中游離生育酚易被氧化。Ce(SO4)2液滴定在酸性溶液中進行,如在堿性中會生成堿式鹽而影響測定。（2）Ce(SO4)2溶于酸水溶液，不溶于醇,-生育酚溶于酸而不溶于水, 滴定過程中應有一定濃度的乙醇。（3）本法適用于純度高的VE供試品。四. 含量測定 維生素類藥物的分析最新（二）氣相色譜法 1、色譜條件及系統(tǒng)適應性試驗 色譜柱：2m4mmI.D.硼硅玻璃柱， 內(nèi)裝硅藻土（80-100目） 固定相：硅酮（OV-17） 涂布濃度 2% 載氣：N2， 流速:含2%固定相：以18-20分鐘為宜；含5%固定相：以30- 32分鐘為宜柱溫：265內(nèi)標：正三十二烷檢測器：FID（氫火焰離子化檢測器）性能要求：理論塔板數(shù)按VE峰計算應不低于500，VE峰與內(nèi)標物質(zhì)峰的分離度應大于2。維生素類藥物的分析最新2、溶液配制： 內(nèi)標溶液：正三十