潔凈室的設(shè)計說明書

1、. .PAGE18 / NUMPAGES18萬級微生物潔凈室設(shè)計說明一、萬級微生物潔凈室設(shè)計說明設(shè)計技術(shù)指標(biāo)：A、微生物潔凈室設(shè)計說明技術(shù)指標(biāo)說明：微生物潔凈室設(shè)計說明 實驗區(qū)空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)由制冷量KW的組合式空調(diào)機(jī)組。微生物潔凈室設(shè)計說明 潔凈度（萬級）0.5um350000粒/m3微生物潔凈室設(shè)計說明 微生物浮游菌萬級100/m3微生物潔凈室設(shè)計說明 沉降菌萬級3個/皿微生物潔凈室設(shè)計說明 照明：實驗臺300LX，其它生產(chǎn)區(qū)域為150LX。微生物潔凈室設(shè)計說明 室相鄰房間相對靜壓差5pa，相對室外靜壓10pa。微生物潔凈室設(shè)計說明 室溫度18-26C，室相對濕度為45-60%。微生物潔凈室設(shè)

2、計說明 室噪音60db(A)。微生物潔凈室設(shè)計說明 電源：AC220V/380V-50HZB、微生物潔凈室設(shè)計說明排風(fēng)口裝有高效過濾器，送風(fēng)口裝有高效過濾靜壓箱，以實現(xiàn)進(jìn)氣潔凈，另外更換高效過濾器比較方便。C、一般室送排風(fēng)采用上送下排方式，室排風(fēng)口應(yīng)設(shè)在室被污染風(fēng)險最高的區(qū)域，單側(cè)布置，不得有障礙。D、回風(fēng)口以余壓閥自動調(diào)節(jié)室壓力，保持正壓潔凈狀態(tài)。二、微生物潔凈室設(shè)計說明設(shè)計說明：實驗室設(shè)計基本思路為經(jīng)濟(jì)、實用。凈化要求級別為萬級。實驗室設(shè)計有一更、二更、風(fēng)淋和緩沖等實驗前的準(zhǔn)備工作。采用人流、物流分開原則，以減少實驗污染，保證安全。A、本布置緊湊、合理，滿足了實驗室操作和空氣潔凈度等級要求

3、，同時力求科學(xué)性與經(jīng)濟(jì)性的原則，考慮實驗室要求和發(fā)展與運行費用最優(yōu)。B、潔凈室入口處設(shè)置風(fēng)淋室，能有效清除人體所帶灰塵，減少潔凈室的灰塵量，同時風(fēng)淋室也起到了氣閘的作用，防止不潔凈空氣由門進(jìn)入潔凈區(qū)。C、潔凈室需向室供給一定比例的新鮮空氣，凈化過濾后進(jìn)入各實驗室以補(bǔ)償排風(fēng)，保證正壓與工作人員需要。D、風(fēng)量回風(fēng)次數(shù)采用風(fēng)量調(diào)節(jié)閥對不同要求潔凈級別的區(qū)域進(jìn)行控制，以與壓強(qiáng)梯度的調(diào)節(jié)，保證氣流同“清潔”區(qū)域流向“污染”區(qū)域，潔凈室不同級別之間壓差為5pa，潔凈室與室外壓差為10pa。E、潔凈室設(shè)紫處燈殺菌裝置。F、傳遞窗為全不銹鋼材質(zhì)，機(jī)械聯(lián)鎖控制，帶滅菌裝置。G、觀察窗為密閉潔凈窗，門為氣密潔凈門

4、。三、生物潔凈室設(shè)計和施工中的問題摘要： 本文介紹了幾種不同類型生物潔凈室的不同特點和設(shè)計方法，并針對在生物潔凈室設(shè)計施工中出現(xiàn)的幾個問題提出自己的看法和意見。生物潔凈室的應(yīng)用越來越廣泛，目前集中在醫(yī)院手術(shù)室和病房、制藥廠、生物安全實驗室、動物房等。同樣級別的潔凈室，由于應(yīng)用領(lǐng)域不同，要求也有很大區(qū)別，筆者檢測的若干生物潔凈室中，出現(xiàn)了各種不同問題，很多是由于對各種生物潔凈室的特點和要求缺乏了解造成的。首先，不同類型的生物潔凈室必須遵循相應(yīng)的規(guī)要求，不了解這些規(guī)，是無法進(jìn)行設(shè)計施工的。目前針對不同類型生物潔凈室的一些規(guī)如表1所列。只有熟悉各行業(yè)的特點，充分掌握各規(guī)的要求，才能切實做好生物潔凈室

5、的設(shè)計、施工、調(diào)試等工作。表2中將各參數(shù)作了詳細(xì)的比較。應(yīng)當(dāng)指出，表2中的參數(shù)要求并不詳盡，應(yīng)以原規(guī)為準(zhǔn)1 應(yīng)用于各種生物潔凈室的規(guī)編號名稱簡稱適用圍GB 50073-2001潔凈廠房設(shè)計規(guī)設(shè)計規(guī)一切潔凈室，尤其是電子廠房Code for design of clean roomGB 50333-2002醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)手術(shù)部規(guī)醫(yī)院潔凈手術(shù)部Architectural technical code for hospital clean operating departmentYFB 004-1997軍隊醫(yī)院潔凈護(hù)理單元建筑技術(shù)規(guī)護(hù)理病房規(guī)醫(yī)院血液病房等Architectural Sta

6、ndard on Bioclean Nursing Unit For MilitaryHospital1998藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)人藥GMP人用藥品的生產(chǎn)Good manufacture practice for drug2002獸藥生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)獸藥GMP獸用藥品的生產(chǎn)Good manufacture practice for veterinary drugYY 0033-2000無菌醫(yī)療器具生產(chǎn)管理規(guī)醫(yī)療器具GMP無菌醫(yī)療器具的生產(chǎn)Good manufacture practice for sterile medical devicesGB xxxx-200 x生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)生物安

7、全實驗室規(guī)生物安全實驗室的建設(shè)Architectural and Technical Code for Biosafety LaboratoriesGB 14925-2001實驗動物 環(huán)境與設(shè)施動物房規(guī)各種實驗動物繁育、實驗設(shè)施的建設(shè)Laboratory animalRequirements of environment and housing facilities表2 各參數(shù)在不同規(guī)中的不同要求參數(shù)級別設(shè)計規(guī)手術(shù)部規(guī)護(hù)理病房規(guī)生物實驗室規(guī)截面風(fēng)速(m/s)5（百）0.20.50.250.300.180.256（千）50607（萬）152530362512158（10萬）1015182215（

8、30萬）1215靜壓差(Pa)不同級別之間5305潔凈區(qū)對非潔凈區(qū)510潔凈區(qū)對室外101515相對負(fù)壓-10-15噪聲dB(A)非單向流潔凈室60525060單向流潔凈室65504550照度(lx)主要工作區(qū)7502500350200一般區(qū)100500150200150溫度()工作區(qū)冬季2022222522241827夏季24262426輔助區(qū)冬季1620212720262026夏季26302529相對濕度(%)工作區(qū)冬季305035(40)6045603070夏季5070輔助區(qū)6065表2（完）參數(shù)級別藥監(jiān)局GMP獸藥GMP醫(yī)療器具GMP動物房規(guī)截面風(fēng)速(m/s)5（百）0.250.30換

9、氣次數(shù)(h-1)5（百）20506（千）7（萬）202010208（10萬）1515（30萬）1012靜壓差(Pa)不同級別之間5552050潔凈區(qū)對非潔凈區(qū)105潔凈區(qū)對室外101210噪聲dB(A)非單向流潔凈室6060單向流潔凈室65局百房間63照度(lx)主要工作區(qū)300150150300一般區(qū)100溫度()1826182618282026相對濕度(%)4565306545654070了解了不同生物潔凈室的不同要求，下面談?wù)勗谏餄崈羰以O(shè)計施工中遇到的幾個問題。首先是平面布置方面的問題。這個問題在藥廠潔凈廠房和生物安全實驗室的平面設(shè)計中尤為突出，主要的問題就是平面過于復(fù)雜。的確，在藥廠

10、平面設(shè)計中，應(yīng)盡量保證潔凈區(qū)不受污染，做到合理分區(qū)，潔污分開，人流、物流明顯，但一定要避免矯枉過正。由于一些行業(yè)主管部門在制訂驗收標(biāo)準(zhǔn)時，缺乏專業(yè)知識，對潔凈室的原理和特點了解不夠，往往將潔凈室過于神秘化，復(fù)雜化，因此對潔凈室平面布局過于苛刻，造成很多不必要的麻煩。這個問題在緩沖室的設(shè)置上尤為突出。例如某藥廠人員進(jìn)入潔凈廠房的過程是這樣的：換鞋 一更 緩沖 二更 洗手消毒 緩沖潔凈走廊三更緩沖或手消毒高級別潔凈室，由此，工作人員在進(jìn)入高級別潔凈室工作前，需要進(jìn)出9個房間，開啟關(guān)閉18扇門，其復(fù)雜程度可想而知。另外，很多藥廠由于規(guī)模小投資少，廠房十分緊湊，以至于每間輔助間的面積只有幾平方米，甚至

11、只有2平方米，于是工作人員在幾乎不能同時容下2人的房間里，不停的開門、轉(zhuǎn)身、關(guān)門，以至于近乎暈頭轉(zhuǎn)向。要求嚴(yán)格是好事，但如果矯枉過正就會適得其反，很多工人為了進(jìn)出方便，往往很多門都不關(guān)，很多房間形同虛設(shè)。將可以合并的房間合并，將沒有必要設(shè)置的房間取消，是解決這一問題的辦法。例如洗手消毒完全可以當(dāng)作緩沖間，另外對于低級別潔凈室之間，如萬級和10萬級潔凈室之間，不一定非要設(shè)置緩沖室，有些場合，三更的設(shè)置也是可以考慮的。緩沖間的設(shè)置主要是通過進(jìn)出兩門的不同時開啟起到氣閘的隔離作用，如果嚴(yán)格管理，一些輔助房間如二更等，完全可以起到緩沖作用。另外，在10萬級和萬級房間也沒有一定設(shè)置緩沖的必要。10萬級房

12、間和萬級房間的空氣含塵濃度不象一些非專業(yè)人士想象的那樣相差10倍，門一開啟就會污染。事實上，兩者相差不多，例如獸藥GMP(2002)中規(guī)定，10萬級房間最低換氣次數(shù)是15次/h，萬級房間最低換氣次數(shù)是20次/h，相差不多，另外由于房間體積普遍較小，例如對于4m2的房間，5次/h的換氣次數(shù)僅有50m3/h左右的送風(fēng)量，而這50m3/h的送風(fēng)量是較難調(diào)整的，另外，無論設(shè)計施工都要適當(dāng)留有一定余量，所以，從筆者檢測的若干藥廠來看，在人員進(jìn)出路線上的一些小房間，除了名義上的潔凈度級別不同外，其換氣次數(shù)和空氣含塵濃度沒有什么區(qū)別。有時所謂的10萬級房間的含塵濃度比萬級房間還要低。以上的觀點是想證明不能以

13、主觀意識制訂驗收標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)該充分以實際出發(fā)考慮問題。精簡平面并不影響實際功能，而且可以使人員進(jìn)出方便簡單，節(jié)省工程造價，擴(kuò)大有效使用面積，何樂而不為。同樣的問題還出現(xiàn)在三級生物安全實驗室的建設(shè)中，行業(yè)主管部門除了要求加設(shè)很多緩沖外，還要求做到人流、物流、潔物、污物各走不同路線，完全分開，但事實上是不可能做到的，也沒有必要。一些政策制訂人為強(qiáng)調(diào)重視程度或迎合一些需要，提出的“生物安全怎么強(qiáng)調(diào)都不過份”的說法是不負(fù)責(zé)任的，對于工程技術(shù)人員來講必須一切從實際出發(fā)，凡事都要有度。只要能完全滿足安全需要即可，層層加碼是專業(yè)知識不足，缺乏自信心的表現(xiàn)。筆者認(rèn)為，自SARS以來提出的P3實驗室設(shè)“三區(qū)兩緩”（

14、即實驗室分為清潔區(qū)，半污染區(qū)和污染區(qū)，不同區(qū)域之間必須設(shè)緩沖）的要求有待商榷，從國外的一些資料也可以看到，一些發(fā)達(dá)國家的生物安全實驗室平面比我們簡單的多，一些危險度不高的實驗室設(shè)置“兩區(qū)一緩”就足夠了。制訂“三區(qū)兩緩”的人可能設(shè)計工作接觸不多，事實上，由于生物安全實驗室對壓差要求極為嚴(yán)格，“三區(qū)兩緩”往往要6、7層房間，層層負(fù)壓，而且要嚴(yán)格保證，無論從設(shè)計、施工以與自控上，都是極難保證的。所以還是要從實際出發(fā)，讓生物安全實驗室真正做到安全、實用、經(jīng)濟(jì)、可行。在生物潔凈室施工中有一個突出的問題就是圓弧角的使用。生物潔凈室主要以控制細(xì)菌等微生物為根本目的，而微生物極易在一些角落里滋生，因此生物潔凈

15、室應(yīng)易于清掃，盡量減少死角，因此在JGJ 71-90潔凈室施工與驗收規(guī)中的第 2.3.8條規(guī)定：踢腳板部分施工時應(yīng)與墻面齊平或略縮進(jìn)23mm。當(dāng)踢腳板與地面材料一樣時可做成小圓角，其圓角半徑R應(yīng)大于等于50mm；當(dāng)踢腳板與地面材料不同時，應(yīng)用彈性材料嵌固。除地面與墻面的交角要求可設(shè)圓角外，對其他部位并未做規(guī)定?，F(xiàn)在普遍的做法是將所有交角均加裝鋁合金圓角，由于制作粗糙，使得很多工程的圓角流于形式，甚至作用適得其反。對于墻壁之間，墻壁與頂棚之間的圓角，本來作用不是很大，現(xiàn)在成了施工單位掩蓋粗糙接角的“遮羞布”。對于墻面與地面的交角，其實是十分關(guān)鍵的，但往往成為藏污納垢，滋生細(xì)菌的場所。原因在于：由

16、于圓弧角有厚度，在圓角與板壁和地面的兩個交角處，便會形成兩個細(xì)小的接縫，由于地面、板壁不平，在接縫處往往有很多縫隙，很多施工單位偷工減料，沒有打膠密封，有的即使打膠了，也會有開裂的現(xiàn)象。因此本來的目的是為了消除衛(wèi)生死角，而實際情況卻增加了很多隱患。這種情況在平時不明顯，在潔凈室進(jìn)行衛(wèi)生清掃時就會暴露無遺，地面上一旦有水，水會通過縫隙滲到隔壁房間，圓角下經(jīng)常滿是水漬，成為細(xì)菌滋生的絕好場地。造成這種情況的根本原因是對規(guī)的規(guī)定沒有真正領(lǐng)會，只是流于形式。筆者認(rèn)為對于我國的生物潔凈室建設(shè)，我們已不能僅僅滿足于那種解決“有與沒有”的層面，必須提高層次，做到真正實用，而不是應(yīng)付認(rèn)證工作，不僅要建，而且一

17、定要建好。有幾種做法值得推薦：1.安裝圓角之后，鋪設(shè)一定厚度的自流坪地面，徹底消除地面接縫；2.安裝圓角之后，鋪裝整體卷材地面，然后將卷材沿圓角上鋪至壁板，使圓角和地面成為一體。3.采用建筑材料（如膠砂）砌筑圓弧狀的壁板基座，基座與地面做同樣的處理，如刷涂料等，使地面和基座成為一體，而且基座作為踢腳部分與墻面齊平或低于墻面。作為潔凈室地面，現(xiàn)澆水磨石具有耐磨、完整、耐腐蝕、耐刷洗、造價低廉的特點，在低級別潔凈室中是完全可以采用的。但一些采用水磨石地面的工程卻出現(xiàn)了問題：空氣中的含塵濃度居高不下，尤其是5m的大顆粒嚴(yán)重超標(biāo)，排除過濾器泄露的可能外，發(fā)現(xiàn)根本原因在與水磨石地面。很多地方掉灰，甚至可

18、以用指甲劃出粉末。出現(xiàn)這種問題的原因是因為水泥標(biāo)號不夠。在JGJ 71-90潔凈室施工與驗收規(guī)的第2.2.2條中對潔凈室的地面做法有這樣的規(guī)定：潔凈室涂料地面水泥砂漿基底的水泥標(biāo)號不得低于425號；水磨石地面應(yīng)現(xiàn)澆，所用小石子直徑為615mm，水磨石磨細(xì)后，宜用不揮發(fā)的護(hù)面材料打涂。一些認(rèn)證人員認(rèn)為水磨石地面不可行的觀點是片面的，只要遵守規(guī)規(guī)定，現(xiàn)澆水磨石完全可以是一種物美價廉的地面材料。一些施工單位偷工減料，采用低標(biāo)號水泥，玻璃嵌條，而且表面不做任何處理。由此提醒廣大建設(shè)單位和設(shè)計單位注意這個問題，把好質(zhì)量關(guān)。生物潔凈室的特點還很多，實際工程中的問題也很多，我們只有充分了解不同類別潔凈室的不

19、同要求和特點，熟悉規(guī)的規(guī)定，才能真正把生物潔凈室建設(shè)好。標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗室標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗室簡介1、主體結(jié)構(gòu)：主體為彩鋼板、鋁合金型材。室所有陰角、陽角均采用鋁合金50圓角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。2、標(biāo)準(zhǔn)的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)：將PCR過程分成試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和PCR擴(kuò)增檢測三個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)，同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié)，使整個PCR實驗過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染?？纱蜷_緩沖區(qū)，緩沖區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)的排風(fēng)扇往外排氣，在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有

20、風(fēng)量可調(diào)的回風(fēng)口，空氣通過回風(fēng)口向室換氣。3、消毒：在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以與傳送窗部安裝有紫外燈，供消毒用。在試劑準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)還設(shè)置移動紫外線燈，對實驗桌進(jìn)行局部消毒。4、機(jī)械連鎖不銹鋼傳遞窗：試劑和標(biāo)本通過機(jī)械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。5、地面地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好。便于進(jìn)行清掃，耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800mm800mm）接縫需要小于2mm。6、照明燈具要選用凈化燈具，能達(dá)到便于清洗、不積塵的特點。標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗室在建設(shè)的過程中應(yīng)注意：規(guī)的安裝流

21、程和全面的服務(wù)流程。嚴(yán)格按照規(guī)科學(xué)設(shè)計的安裝流程。安裝前需要確定以下安裝條件，如：電源電壓，電源進(jìn)線位置，網(wǎng)絡(luò)線進(jìn)線位置，進(jìn)水水壓，最小安裝空間，地面平整度，通風(fēng)孔、進(jìn)水管和下水管的位置等，理想狀態(tài)的空間尺寸和通風(fēng)口尺寸。1.1.1PCR實驗室基本要求2.1 PCR 實驗室依據(jù)所使用的方法可分為試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備、擴(kuò)增、產(chǎn)物分析等三或四個區(qū)域。只是使用實時熒光PCR儀、HIV病毒載量測定儀的PCR實驗室，有上述前面三個區(qū)域即可。各區(qū)域應(yīng)完全獨立分隔，不應(yīng)有任何的空氣直通。2.2標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗室 產(chǎn)物分析區(qū)或三個區(qū)域的最后一個區(qū)域（即擴(kuò)增與產(chǎn)物分析區(qū)），空氣流向應(yīng)由室外向室，可通過在室設(shè)置通風(fēng)

22、櫥、排風(fēng)扇或其他排風(fēng)系統(tǒng)達(dá)到空氣流由室外向室流動的要求。2.3 PCR實驗室各區(qū)域儀器設(shè)備配備通常如下：2.3.1標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗室 試劑準(zhǔn)備區(qū):儀器設(shè)備主要應(yīng)有加樣器、冰箱、天平、低速離心機(jī)、混勻器、可移動紫外燈等。可使用超凈工作臺作為試劑配制操作臺面。2.3.2標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗室 標(biāo)本制備區(qū)儀器設(shè)備主要應(yīng)有生物安全柜（最好為B2, 可避免提取核酸在柜反復(fù)循環(huán)，造成標(biāo)本間交叉“污染”，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。此外還應(yīng)配備加樣器、臺式高速離心機(jī)（冷凍與常溫）、臺式低速離心機(jī)、恒溫設(shè)備（水浴和/或干浴儀）、冰箱、混勻器和可移動紫外燈等。2.3.3標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗室 擴(kuò)增區(qū)主要儀器就是核酸擴(kuò)增熱循環(huán)儀（P

23、CR儀，實時熒光或普通的）。熱循環(huán)儀的電源應(yīng)專用，并配備一個穩(wěn)壓電源或UPS，以防止由于電壓的波動對擴(kuò)增測定的影響。此外，根據(jù)工作需要，還可配備加樣器、超凈臺等。2.3.4標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗室 產(chǎn)物分析區(qū)：本區(qū)所使用的儀器設(shè)備可能有加樣器、電泳儀（槽）、電轉(zhuǎn)印儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶標(biāo)儀和洗板機(jī)等。The equipment here may be pipette, electrophoresis system capillary, transblot system, chest/ oven molecule hybridization, water bath, DNA se

24、quencer, microplate-reader for ELISA, microplate washer and so on.建議Recommendations在理想情況下，PCR實驗室試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備、擴(kuò)增三個區(qū)域可設(shè)置緩沖間。在緩沖間，可設(shè)置正壓，使室空氣不流向室外，室外空氣不流向室。PCR實驗室平面布置示意圖一般實驗室間隔材料分:彩鋼板,不銹鋼板,理化板等,價格依次而上,主要考慮不產(chǎn)塵,不滋菌,容易清理就行一般實驗室間隔材料分:彩鋼板,不銹鋼板,理化板等,價格依次而上,主要考慮不產(chǎn)塵,不滋菌,容易清理就行*衛(wèi)生部PCR研究員金明(衛(wèi)生部臨床檢驗中心臨床免疫室主任,研究員)的PCR

25、建設(shè)方案再說吧！國外的資料不一定是最好。個人覺得金明的實驗室區(qū)正壓（擴(kuò)增分析區(qū)因為沒有緩沖，所以為負(fù)壓），緩沖間負(fù)壓的作法可以更好的防止氣體的外泄與防止試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、產(chǎn)物擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)四區(qū)之間的氣體相互滲漏。PCR實驗室也可以分為三個區(qū)，即第三、四區(qū)合為一區(qū)，必須設(shè)立緩沖間。有條件建設(shè)實驗室采用三十萬級的標(biāo)準(zhǔn)來建設(shè)。空調(diào)系統(tǒng)采用制冷劑各區(qū)獨立循環(huán)，可以防止氣流交叉。*疾病預(yù)防控制中心實驗室建設(shè)之PCR 實驗室基本要求:PCR實驗室可以是分散形式，也可以是組合形式。完成一組PCR實驗，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增與產(chǎn)物分析四個實驗過程，若實驗工藝需要，還應(yīng)增加樣品粉碎過程

26、。一、分散形式PCR實驗室 所謂分散形式PCR實驗室，是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠(yuǎn)，呈分散布置形式。對于這種布置形式的PCR實驗室，由于各個實驗之間不易相互干擾，因此無需特殊條件要求。 二、組合形式PCR實驗室所謂組合形式PCR實驗室, 是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置，組成獨立實驗區(qū)域的形式。對于組合形式PCR實驗室，由于各個實驗間集中布置，容易造成相互干擾，因此，對總體布局以與屏障系統(tǒng)具有一定的要求。各室在入口處設(shè)緩沖間，以減少室外空氣交換。試劑配制室與樣品處理室宜呈微正壓，以防外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染；核酸擴(kuò)增室與產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負(fù)壓，以防含核酸的氣

27、溶膠擴(kuò)散出去污染試劑與樣品。如果使用熒光PCR儀，擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室可以合并。若房間進(jìn)深允許，可設(shè)PCR部專用走廊。需要指出的是在減少室外空氣交換方面，緩沖間比專用走廊更有意義。*PCR實驗區(qū)的設(shè)置，幾個要注意的問題：1、幾個區(qū)域的大小設(shè)置情況，應(yīng)該是試劑準(zhǔn)備區(qū)、產(chǎn)物擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)，要小一些。標(biāo)本制備區(qū)應(yīng)大一些。因為，標(biāo)本制備室要放置一個生物安全柜為一個低溫冰箱。2、試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)就設(shè)立緊急洗眼器，以備不時之需。3、PCR實驗室的潔凈度可以根據(jù)用戶的實際使用情況和資金的投入來設(shè)計。*臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)臨床檢驗擴(kuò)增檢驗實驗室管理暫行辦法，制定本標(biāo)準(zhǔn) 一、 臨床基因

28、擴(kuò)增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)置原則 （一） 臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)置原則 1、 試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū) 2、 標(biāo)本制備區(qū) 3、 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū) 4、 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) 如使用全自動分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并。 （二）各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域的設(shè)備、物品混用。 （三）進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū) 標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。 （四）不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時，不得將工作服帶出。 二、 工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn) （一） 試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū) 1、2-8C和-15C冰箱 2、混勻器 3

29、、微量加樣器（覆蓋1-1000ul） 4、移動紫外燈（近工作臺面） 5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心） 6、專用工作服和工作鞋 7、專用辦公用品 （二） 標(biāo)本制備區(qū) 1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱 2、高速臺式冷凍離心機(jī) 3、混允器 4、水浴箱或加熱模塊 5、微量加樣器（覆蓋1-1000ul） 6、可移動紫外燈（近工作臺面） 7、超凈工作臺 8、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心） 9、專用工作服和工作鞋 10、專用辦公用品 如需處理大分子DNA，應(yīng)具有超聲波水浴儀。 （三） 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)

30、 1、 核酸擴(kuò)增儀 2、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul） 3、 可移動紫外燈（近工作臺面） 4、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心） 5、 專用工作服和工作鞋 6、 專用辦公用品 (四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) 視檢驗方法不同而定?；緝x器設(shè)備如下： 1、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul） 2、 可移動紫外燈（近工作臺面） 3、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心） 4、 專用工作服和工作鞋 5、 專用辦公用品 為了對以個特定序列進(jìn)行PCR做重復(fù)檢測,需要三個不同的區(qū)域,每一個區(qū)域的具體技術(shù)操作和試劑在下面詳細(xì)列出. 1、樣品準(zhǔn)備區(qū) 這個區(qū)域?qū)?/p>

31、門用作樣品的準(zhǔn)備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時應(yīng)該采 取預(yù)防措施： 1）PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。 2）組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理，以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。 3）用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。 4）DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。 5）大體積樣品應(yīng)該用單獨包裝的無菌一次性移液管吸取。 6）管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生，而且管子不能用力崩開，這樣會產(chǎn)生氣溶膠。 7）任何時候都應(yīng)該穿實驗服和帶手套，手套要經(jīng)常更換，尤其在抽提

32、過程中每一步之間都要更換。實驗服要專門用于樣品準(zhǔn)備間，經(jīng)常清洗。 2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會。為了避免這一問題，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報道。 3、前PCR區(qū) 必須有專門用于準(zhǔn)備各種反應(yīng)的區(qū)域，這個區(qū)域必須保持干凈，而且沒有來自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備，特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。 4、PCR實驗室試劑的操作 1）所用的所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。 2）所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該

33、是高質(zhì)量的新鮮蒸餾的去離子水，用0.22m過濾的，并且是高壓滅菌。 3）在20到25貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。 4）所用試劑都應(yīng)該以大體積配制，實驗一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。 5）所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。 6）新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗。 7）樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時都應(yīng)該小心保存。 5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物 1）可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20或4，在實驗室只涉與到擴(kuò)增一種或少

34、數(shù)幾種特異序列時這樣做很有用。 2）如果你的實驗室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì)，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。 3）作為一個規(guī)則，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性對照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過使用一個已知的弱陽性樣品來驗證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。 4）陰性樣品要與每組樣品同時做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以與是否存在PCR產(chǎn)物的污染，陰性對照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。 5）當(dāng)做陽性對照時，有兩個理由決定了應(yīng)該使用最少數(shù)量的核酸。 6）由于必須有對照反應(yīng)，對照模板的特點應(yīng)該予以考慮。 6、控

35、制污染的方法 已設(shè)計出很有力的酶學(xué)方法用來消除一種形式的污染使用UNG，這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線，這種方法不能完全消除污染問題，但可以將污染降低幾個數(shù)量級。 7、PCR儀的位置 8、后PCR區(qū) PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù)，應(yīng)該留出一個專門用于反應(yīng)后處理樣品的地方。后PCR活動中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門用于這一目的，決不能把實驗室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動。*臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理暫行辦法第一章 總 則 第一條為規(guī)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理，保證臨床基因擴(kuò)增檢驗質(zhì)量，使臨床診斷和治療更為科學(xué)、合

36、理，特制定本辦法。 第二條臨床基因擴(kuò)增檢驗技術(shù)指以臨床診斷治療為目的，以擴(kuò)增檢測DNA或RNA為方法的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的放大系統(tǒng)（TAS）自主序列復(fù)制系統(tǒng)（3SR）和鏈替代擴(kuò)增（SDA）等。 第三條本辦法適用于開展臨床基因擴(kuò)增檢驗的實驗室。臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室設(shè)立在二級以上醫(yī)院。 第四條臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室必須使用經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的臨床檢驗試劑開展臨床基因擴(kuò)增檢驗項目。 第五條衛(wèi)生部臨床檢驗中心（以下簡稱衛(wèi)生部臨檢中心）和省、自治區(qū)、直轄市臨床檢驗中心（以下簡稱省臨檢中心）負(fù)責(zé)對所轄行政區(qū)域臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的質(zhì)量監(jiān)督管理工作

37、。第二章 實驗室設(shè)置和驗收 第六條擬設(shè)置臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的醫(yī)療機(jī)構(gòu)按照臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)（見附件）籌建實驗室；籌建完成后，由法定代表人向衛(wèi)生部臨檢中心提出技術(shù)驗收申請。申請時需提交以下材料： （一）醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證復(fù)印件； （二）可行性研究報告； 1、擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室機(jī)構(gòu)的所在地醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、本機(jī)構(gòu)的基本情況、對臨床基因擴(kuò)增檢驗的需求以與臨床基因擴(kuò)增實驗室運行的預(yù)測分析； 2、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的設(shè)置平面圖； 3、擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室將開展的檢驗項目、實驗設(shè)備條件和有關(guān)技術(shù)人員資料 第七條衛(wèi)生部臨檢中心和省臨檢中心共同組織相關(guān)專業(yè)的專家組（以下簡稱專家組），按照臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)對提出申請的臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室進(jìn)行技術(shù)驗收。驗收完成后，在20日將驗收報告寄送至申請機(jī)構(gòu)。 第八條經(jīng)專家組技術(shù)驗收合格的醫(yī)療機(jī)構(gòu)將本辦法第六條規(guī)定的材料與專家組驗收報告送至省級行政部備案。在將符合規(guī)定的全部材料送達(dá)省級衛(wèi)生行政部門后15日未收到省級衛(wèi)生行政部門不同意的意見，方可開展專家組技術(shù)驗收合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗項目。 第九條未經(jīng)專家組驗收合格并報省級衛(wèi)生行政部門備案的醫(yī)療機(jī)構(gòu)不得擅自開展臨床基因擴(kuò)增檢驗