第三章多標(biāo)記分析儀

1、2022-7-7現(xiàn)代儀器分析現(xiàn)代儀器分析modern Instrumental Analysis 2022-7-72022-7-7第三章第三章 多標(biāo)記分析儀多標(biāo)記分析儀 PE VictorTM X4 2022-7-7第三章第三章 多標(biāo)記分析儀多標(biāo)記分析儀功能：功能：比色讀數(shù)功能比色讀數(shù)功能化學(xué)發(fā)光功能化學(xué)發(fā)光功能熒光讀數(shù)功能熒光讀數(shù)功能時(shí)間分辨熒光讀數(shù)功能時(shí)間分辨熒光讀數(shù)功能第一節(jié)、多標(biāo)記分析儀原理第一節(jié)、多標(biāo)記分析儀原理2022-7-7一、比色讀數(shù)功能一、比色讀數(shù)功能b*c*IIlogAbsorbance02022-7-7酶聯(lián)免疫檢測(cè)酶聯(lián)免疫檢測(cè)ELISA*AntibodyEnzyme Co

2、njugateSubstrateStop SolutionPhotometricMeasurementCoating= Antibody= Enzyme*= Incubation, Washing, AspirationPatient Sample (Antigen)= AntigenTest Procedure2022-7-7二、化學(xué)發(fā)光功能二、化學(xué)發(fā)光功能Luminescence = the emission of light from any substance occurs from electronically excited statesChemiluminescence = li

3、ght emitted by a chemical reactionBioluminescence = type of chemiluminescence chemical reaction is catalyzed by an enzyme important in studies of gene expression and gene regulation2022-7-7三、熒光讀數(shù)功能三、熒光讀數(shù)功能分子熒光：分子熒光： 基態(tài)基態(tài)( (S0)激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)( (S1、S2激發(fā)態(tài)振動(dòng)能級(jí)激發(fā)態(tài)振動(dòng)能級(jí)) )：吸收特定頻：吸收特定頻率的輻射。率的輻射。符合什么公式？符合什么公式？ 激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)

4、基態(tài)：多種途徑和方式；速度最快、激發(fā)態(tài)壽基態(tài)：多種途徑和方式；速度最快、激發(fā)態(tài)壽命最短的途徑占優(yōu)勢(shì)。命最短的途徑占優(yōu)勢(shì)。符合什么公式？符合什么公式？ 分子熒光是激發(fā)光將電子激發(fā)到激發(fā)態(tài)，由激發(fā)態(tài)最低分子熒光是激發(fā)光將電子激發(fā)到激發(fā)態(tài)，由激發(fā)態(tài)最低振動(dòng)能級(jí)躍遷到基態(tài)所發(fā)出的輻射光。振動(dòng)能級(jí)躍遷到基態(tài)所發(fā)出的輻射光。 濃度很低時(shí)，熒光強(qiáng)度濃度很低時(shí)，熒光強(qiáng)度 If = 2.3 I0 l c = Kc 2022-7-7 鑭系元素銪、釤、鋱、鏑的螯合物經(jīng)紫外光激發(fā)后不鑭系元素銪、釤、鋱、鏑的螯合物經(jīng)紫外光激發(fā)后不僅熒光強(qiáng)度高，而且其衰變時(shí)間也長(zhǎng)，可達(dá)幾百個(gè)僅熒光強(qiáng)度高，而且其衰變時(shí)間也長(zhǎng)，可達(dá)幾百個(gè)

5、s s，而樣品中蛋白質(zhì)天然本底熒光的衰變時(shí)間為而樣品中蛋白質(zhì)天然本底熒光的衰變時(shí)間為1-10ns1-10ns，相差，相差5-65-6個(gè)數(shù)量級(jí)，因此在時(shí)間分辨熒光光度計(jì)上測(cè)量時(shí)，利個(gè)數(shù)量級(jí)，因此在時(shí)間分辨熒光光度計(jì)上測(cè)量時(shí)，利用延遲測(cè)量時(shí)間，待短半衰期的天然本底熒光完全衰變用延遲測(cè)量時(shí)間，待短半衰期的天然本底熒光完全衰變后測(cè)定，所測(cè)信號(hào)完全為稀土螯合物的熒光，從而消除后測(cè)定，所測(cè)信號(hào)完全為稀土螯合物的熒光，從而消除了非特異干擾的影響。了非特異干擾的影響。 四、時(shí)間分辨熒光讀數(shù)功能四、時(shí)間分辨熒光讀數(shù)功能2022-7-7背景熒光背景熒光激激 發(fā)發(fā) 周周 期期超長(zhǎng)衰減時(shí)間超長(zhǎng)衰減時(shí)間發(fā)射光強(qiáng)度發(fā)射光

6、強(qiáng)度時(shí)間時(shí)間檢測(cè)窗口檢測(cè)窗口四、時(shí)間分辨熒光讀數(shù)功能四、時(shí)間分辨熒光讀數(shù)功能2022-7-72022-7-7第二節(jié)第二節(jié) 多標(biāo)記分析儀的光學(xué)系統(tǒng)多標(biāo)記分析儀的光學(xué)系統(tǒng)2022-7-7Photodiode一一 光吸收模塊光路圖光吸收模塊光路圖2022-7-7二二 化學(xué)發(fā)光模塊光路圖化學(xué)發(fā)光模塊光路圖2022-7-7三三 熒光檢測(cè)模塊光路圖熒光檢測(cè)模塊光路圖2022-7-7激發(fā)光源、激發(fā)光單色器或?yàn)V光片，樣品池、熒激發(fā)光源、激發(fā)光單色器或?yàn)V光片，樣品池、熒光單色器及設(shè)有門控的檢測(cè)器光單色器及設(shè)有門控的檢測(cè)器四四 時(shí)間分辨熒光模塊光路圖時(shí)間分辨熒光模塊光路圖2022-7-7五五 與分光光度計(jì)不同之處

7、與分光光度計(jì)不同之處1 1、光路不同、光路不同2 2、樣品池不同、樣品池不同3 3、單色器不同、單色器不同4 4、通量不同、通量不同5 5、樣品量不同、樣品量不同6 6、應(yīng)用學(xué)科不同、應(yīng)用學(xué)科不同2022-7-72022-7-7第三節(jié)第三節(jié) 多標(biāo)記分析儀的應(yīng)用多標(biāo)記分析儀的應(yīng)用2022-7-7核酸和蛋白質(zhì)的光吸收檢測(cè)核酸和蛋白質(zhì)的光吸收檢測(cè)酶聯(lián)免疫檢測(cè)（酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）細(xì)胞活性檢測(cè)（細(xì)胞活性檢測(cè)（MTT）酶動(dòng)力學(xué)分析酶動(dòng)力學(xué)分析細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)濃度測(cè)定濃度測(cè)定乙酰膽堿脂酶檢測(cè)乙酰膽堿脂酶檢測(cè)環(huán)境監(jiān)測(cè)環(huán)境監(jiān)測(cè)一、光吸收主要應(yīng)用一、光吸收主要應(yīng)用2022-7-7報(bào)告基因基因檢

8、測(cè)報(bào)告基因基因檢測(cè)化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析核酸定量核酸定量 ( (PCR Quantification) )酶活分析酶活分析活性氧分析活性氧分析二、發(fā)光主要應(yīng)用二、發(fā)光主要應(yīng)用2022-7-7濃度檢測(cè)濃度檢測(cè)活性分析活性分析熒光熒光ELISA酶聯(lián)免疫檢測(cè)（酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）研究分子之間相互作用研究分子之間相互作用三、熒光主要應(yīng)用三、熒光主要應(yīng)用2022-7-7時(shí)間分辨熒光免疫時(shí)間分辨熒光免疫激素：甲狀腺激素、甾體類激素。激素：甲狀腺激素、甾體類激素。病毒性肝炎標(biāo)志物。病毒性肝炎標(biāo)志物。腫瘤相關(guān)抗原。腫瘤相關(guān)抗原。藥物。藥物。多肽類。多肽類。四、時(shí)間分辨熒光主要應(yīng)用四、時(shí)間分辨熒光主要應(yīng)用2022-7-7 更廣的動(dòng)力學(xué)范圍更廣的動(dòng)力學(xué)范圍 更強(qiáng)的靈敏度更強(qiáng)的靈敏度 每孔更少的試劑每孔更少的試劑 更少的實(shí)驗(yàn)步驟更少的實(shí)驗(yàn)步驟 信號(hào)穩(wěn)定性超過(guò)信號(hào)穩(wěn)