微生物學(xué)實驗：實驗二 產(chǎn)胞外淀粉酶細(xì)菌的分離篩選

1、實驗二 產(chǎn)胞外淀粉酶細(xì)菌的分離篩選第二模塊 功能微生物的篩選和選育實驗?zāi)康?.掌握固體平板的配制（倒平板）；2.了解單菌落劃線分離菌種技術(shù)、進(jìn)一步掌握稀釋涂布分離菌種技術(shù)；3.掌握分離、鑒定產(chǎn)淀粉酶細(xì)菌的方法（水解圈）；實驗原理 在自然界的土壤中存在產(chǎn)淀粉酶的細(xì)菌，通過土樣懸液稀釋涂布和平板劃線分離于含有淀粉的培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)產(chǎn)生淀粉酶。產(chǎn)淀粉酶的細(xì)菌可在菌落周圍水解淀粉生成小分子界限糊精、麥芽糖和葡萄糖，滴加碘液，未水解的淀粉呈藍(lán)色，水解圈無色，在淀粉平板上，產(chǎn)淀粉酶菌落周圍會出現(xiàn)水解圈。實驗原理透明圈（H）與菌落直徑（C）比值的大小在一定程度上反映了菌株產(chǎn)生淀粉酶的能力：H/C值越大，表明分

2、泌的淀粉酶越多，水解淀粉的能力也就越強(qiáng)。實驗材料樣品：新鮮土壤樣品（同學(xué)自備）。培養(yǎng)基：淀粉培養(yǎng)基。無菌水：帶有玻璃珠裝有20mL無菌水三角瓶。其它：無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、無菌離心管、電子天平、記號筆、玻璃涂棒、酒精燈、火柴。實驗步驟一、制備淀粉培養(yǎng)基平板：每組制5塊淀粉培養(yǎng)基平板。具體制法為：倒入融化好的淀粉培養(yǎng)基（溫度為不燙手為宜）并輕輕搖晃混勻，置于桌面冷卻平板。在無菌培養(yǎng)皿底部注明分離菌名、稀釋度、組別、班級。 二、制備土壤稀釋液：稱取土壤2g，放入18mL帶有玻璃珠的無菌水三角瓶中，振蕩5min，即為稀釋101的土壤懸液。然后在離心管中依次稀釋至103、104稀釋度。實驗步驟三、稀釋

3、涂布：無菌操作法分別吸取103、104土壤稀釋液各0.1mL，分別加在已制好的2塊淀粉平板培養(yǎng)基上；用玻璃涂布棒將稀釋液在培養(yǎng)機(jī)上充分混勻鋪平，靜置5min；倒置于30恒溫箱培養(yǎng)24小時。四、劃線分離將101土壤稀釋液用接種環(huán)挑取一環(huán)，在一塊淀粉培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線分離（每人一塊）；倒置于房間30恒溫箱培養(yǎng)24小時。實驗步驟平板劃線的操作方法實驗步驟五、挑選單菌落轉(zhuǎn)接劃線24小時后，在之前稀釋涂布和劃線的3塊淀粉培養(yǎng)基上選取典型細(xì)菌菌落（盡量選取邊緣整齊和規(guī)則的菌落），并用記號筆進(jìn)行編號。然后將編號后的菌落用無菌牙簽挑取，在另1塊淀粉培養(yǎng)基平板上分別劃短線。實驗步驟六、觀察水解圈和測量H/C值在3塊淀粉培養(yǎng)基上加碘液，觀察是否有水解圈的產(chǎn)生，并測量其半徑，計算H/C值。對照劃線平板和編號菌落的水解圈大小，挑取水解圈最大的一個菌斑，用記號筆將其勾選出來，并在劃線平板上標(biāo)記好。將劃線平板置于培養(yǎng)箱30培養(yǎng)。實驗結(jié)果1.拍照紀(jì)錄篩選培養(yǎng)基平板上的水解圈；2.列表記錄單菌落數(shù)量、